Этапы приготовления препарата

1. Приготовление мазка

2. Высушивание

3. Фиксация

4. Окрашивание

Алгоритм приготовления мазка

из культуры, выращенной на скошенном агаре(«косячке»)

1. Предметное стекло аккуратно берут за ребро и с обратной стороны нанесения мазка наносят его границы и номер культуры

2. Зажигают спиртовку, горелку, предварительно выпустив пары спирта

3. Фламбируют поверхность стекла, где будет располагаться мазок

4. Стекло помещают вблизи спиртовки на чашку Петри

5. В левую руку берут пробирку со стерильным физическим раствором (дистиллированной водой) и помещают между 1 и 2 пальцами таким образом, что ладонь находится под пробиркой и горлышко пробирки направлено в зону спиртовки

6. В правую берут бактериальную петлю, как карандаш

7. Петлю фламбируют до покраснения сначала горизонтально, затем вертикально (рис. №1)

8. Не выпуская петли, мизинцем правой руки прижимают пробку физ.р-ра к ладони и осторожно вынимают е из пробирки. Движения должны быть плавными

9. Горло пробирки обжигают в пламени и вводят петлю

10. Берут выпускной петлей физ. р-р и выносят на стекло пару капель в границы мазка

11. Закрывают пробку, предварительно проведя через пламя спиртовки пробку и горло пробирки одновременно

12. Ставят пробирку в штатив

13. В левую руку берут пробирку с культурой и помещают, как и пробирку с физ. р-ром (см. пункт №5), петля в правой руке

14. Петлю фламбируют

15. Над пламенем спиртовки спокойно вынимают пробку с культуры (см. пункт №8), одновременно обжигая пробку и горло пробирки

16. Вводят в пробирку петлю, охлаждая ее о стенки пробирки

17. Осторожно закрывают и захватывают петлей культуру, не повреждая агара, и вынимают петлю, не касаясь ею стенок пробирки

18. Петлю с культурой вносят в каплю физ. р-ра и осторожно эмульгируют, незаходя за границы мазка

19. Бактериальную петлю с остатками культуры прожигают до покраснения в пламени спиртовки

20. Прожигают горло пробирки пробку в пламени, одновременно. Закрывают пробирку.

21. Пробирку с культурой и петлю ставят в штатив

22. Приготовленный мазок высушивают либо на воздухе либо высоко над пламенем спиртовки

Примечание:

1. Приготовление мазка из культуры, выращенной на жидкой питательной среде, не требует использования физ. р-ра. Мазок готовят согласно пунктам №13 -№22

2. При приготовлении мазка из культуры, выросшей на чашке Петри необходимо:

• отметить изолированную колонию со стороны дна чашки

• чашку берут в левую руку и в сторону спиртовки приоткрывают крышку, придерживая ее 1и 2 пальцами левой руки

• прокаленную петлю вводят под крышку чашки, остужая ее о крышку

• осторожно откалывают часть выделенной колонии и, не задевая края чашки, выносят на стекло с физ. р-ром

• дальнейшие манипуляции согласно пунктам №18, 19, 21, 22

3. При подсушивании мазка следует помнить: высокая температура может нарушить структуру клетки

Рис. №1. Схема приготовления мазка

Виды фиксации

• Физический – в пламени спиртовки

• Химический – в растворах спирта, ацетона, смеси Никифорова (1:1 спирт и эфир)

Цели фиксации

• Обеззараживание патогенных микробов

• Закрепление клеток на стекле

• Убитые микроорганизмы лучше воспринимают красители