Диагностика туберкулеза легких бактериоскопическим методом

1. Приготовление мазков

Бактерии обнаруживаются в плотных гнойных частицах мокроты. Захватите петлей материал и распределите тонким слоем на 2/3 части предметного стекла. Можно стекло с кусочком мокроты покрыть другим предметным стеклом, придавить друг к другу и раздавить в противоположном направлении до образования тонкого мазка. Можно для приготовления мазка пользоваться деревянными палочками

2. Высушивание

Приготовленные мазки высушиваются на воздухе 15-30 мин

3. Фиксация

Медленно провести мазок в течение 3-5 мин 3 раза через верхнюю или среднюю наиболее яркую часть пламени спиртовки

4. Окрашивание

а) мазок накрыть фильтровальной бумагой и на всю поверхность бумаги нанести карболовый фуксин Циля

б) медленно нагревайте стекло с мазком над пламенем спиртовки до появления паров, не допуская кипения и высушивания. Оставить мазок с прогретым раствором на 5 мин

5. Обесцвечивание

а) снять фильтровальную бумагу и удалить окрашивающий раствор под слабой струей воды

б) обработать каждый мазок индивидуально 25% раствором серной кислоты в течение 3-х минут

в) смыть водой

г) обработать каждое стекло в течение 5 минут 96% спиртом

д) смыть водой

6. Дополнительная окраска

Обесцвеченные и промытые стекла с мазками обработать 0,3% раствором метиленовой синьки в течение 1 минуты

7. Промыть водой и высушить на воздухе

ОСНОВАНИЕ: МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ МЕЖДУНАРОДНОГО СОЮЗА БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ. ФРАНЦИЯ, ПАРИЖ, 1999г

Метод циля-нильсена (инструкция 1999год)

1. На фиксированный препарат накладывают фильтровальную бумагу, на которую наносят карболовый фуксин Циля. Подогревают до отхождения паров, процедуру можно повторить. Выдерживают 5 мин

2. Н₂О

3. 25% Н₂SО₄ - 3 мин

4. Н₂О

5. Спирт 96% - 5 мин

6. Н₂О

7. Метиленовый синий 0,3 % - 1 мин

8. Н₂О

Рис. №4. Кислотоустойчивая микобактерия

Метод циля-нильсена

1. На фиксированный препарат + фильтровальная бумага + фуксин Циля. Подогреваем до отхождения паров + краситель (2 раза)

2. Н₂О

3. 5% Н₂SО₄ (погружая 2-3 раза)

4. Н₂О

5. Метиленовый синий 1 % - 3-5 мин

6. Н₂О

7. Микроскопия с иммерсией.

Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, остальные – в синий (рис. № 4,5).

Рис. № 5 Mycobacterium tuberculosis  в мокроте

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №3

Выявление капсул по методу Бурри, Бурри-Гинса.

Студент должен иметь представления:

- негативные методы окраски.

Студент должен знать:

- методы микробиологических исследований,

- виды микроскопии, их особенности,

- строение, состав и функции капсулы,

- капсулообразование как фактор патогенности,

- примеры капсульных микробов,

- особенности фиксации и окраски по методу Бурри и Бурри-Гинса, красители и реактивы,

- цель применения и сущность метода.

Студент должен уметь:

- выявление капсул у бактерий методом Бурри – Гинса,

-микроскопия окрашенных препаратов с использованием иммерсионной системы,

- соблюдение мер безопасной работы с живыми культурами микробов,

- обработка рабочего места и рук дез. веществами.

Этапы самостоятельной аудиторной работы:

5. Подготовить препарат из культуры и окрасить его по методу Бурри-Гинса

6. Препараты, подготовленные и демонстрационные, промикроскопировать с иммерсией

7. Обработать рабочие места и руки

8. Зарисовать результаты микроскопирования и записать алгоритм метода в дневник

ОБНАРУЖЕНИЕ КАПСУЛ У БАКТЕРИЙ

Некоторые микробы обладают способностью откладывать на поверхности своего тела мощный слизистый слой вокруг клеточной стенки. Его называюткапсулой. В состав капсул входят, главным образом, полисахариды (пневмококк), но у некоторых они содержат и полипептиды (палочка сибирской язвы). Капсулы имеют консистенцию геля, поэтому при микроскопии живых бактерий они видны очень плохо. Для обнаружения применяют негативную окраску. При этом краситель заполняет пространство вокруг бактерий, в результате чего они выглядят светлыми частицами на темном фоне.

Рис. №6. ПРИГОТОВЛЕНИЕ МАЗКА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ КАПСУЛЫ