Обнаружение капсул по методу бурри

1. Смешать на предметном стекле немного культуры и каплю туши, разведенной 1:10 (рис. № 6)

2. Ребром шлифовального стекла сделать тонкий мазок, также как мазок крови: каплю туши наносят на предметное стекло на расстояние одной трети от левого края. В эту каплю бак. петлей вносят культуру. Затем краем специально отшлифованного стекла, наклонив его под углом 45^О, прикасаются к капле туши с культурой. Прижимая отшлифованное стекло к предметному продвигают его вперед. Мазок заканчивается «метелочкой»

3. Сбросить шлифовальное стекло в дез. средство

4. Высушить на воздухе

5. Бактериоскопировать (рис. № 7)

ОБНАРУЖЕНИЕ КАПСУЛ ПО МЕТОДУ БУРРИ-ГИНСА

1. Приготовить мазок на предметном стекле по методу Бурри

2. Высушить на воздухе

3. Фиксировать химическим способом: погружение стекла в емкость со спиртом или сулемой – 10 мин, или со смесью Никифорова (спирт и эфир 1:1) – 15-20 мин

4. Осторожно промыть водой

5. На мазок нанести фуксин Пфейффера – 3-5 мин

6. Промыть Н₂О

7. Высушить на воздухе

8. Микроскопия с иммерсией.

Внимание! Фильтровальной бумагой не пользоваться, чтобы не повредить препарат.

Препарат по Бурри – Гинсу под микроскопом: фон черный, клетки бактерий красные, капсулы неокрашенные (красители не воспринимают) (рис. № 8).

Рис. №7. Окраска по Бурри и Бурри-Гинсу

Рис. №8. Капсула у Klebsiella pneumoniae

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №4

Выявление спор по методу Ожешко.

Студент должен знать:

- классификацию микроорганизмов,

- строение, состав и значение спор,

- процесс спорообразования,

- примеры споровых микробов,

- классификация бактерий по расположению спор,

- методы выявления спор,

- особенности окраски по методу Ожешко, красители и реактивы

- цель применения и сущность метода,

- цель обработки препарата кислотами.

Студент должен уметь:

- выявление спор у бактерий методом Ожешко,

-микроскопия окрашенных препаратов с использованием иммерсионной системы,

- соблюдение мер безопасной работы с живыми культурами микробов,

- обработка рабочего места и рук дез. веществами.

Этапы самостоятельной аудиторной работы:

9. Подготовить препарат из культуры и окрасить его по методу Ожешко

10. Препараты, подготовленные и демонстрационные, промикроскопировать с иммерсией

11. Обработать рабочие места и руки

12. Зарисовать результаты микроскопирования и записать алгоритм метода в дневник

Окраска по методу ожешко

1. На высушенный мазок (нефиксированный!) + несколько капель 0,5% НCl, держать над пламенем спиртовки до образования паров

2. Высушивают и фиксируют физическим способом

3. Окрашивают по методу Циля-Нильсена:

1. На фиксированный препарат + фильтровальная бумага + фуксин Циля. Подогреваем до отхождения паров + краситель (2 раза)

2. Н₂О

3. 5% Н₂SО₄ (погружая 2-3 раза)

4. Н₂О

5. Метиленовый синий 1 % - 3-5 мин

6. Н₂О

4. Микроскопия с иммерсией

Метод Ожешко сходен с методом Циля-Нильсена, но отличается использованием раствора соляной кислоты в качестве протравы, разрыхляющей оболочку споры, которая плохо воспринимает красители.

Кислотоустойчивые споры окрашиваются в розово-красный, а бактериальная клетка в голубой цвет (рис. № 9).

Рис. №9. Споры у Bacillus subtilis

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №5

Определение подвижности микроорганизмов

методами нативных препаратов.

Студент должен знать:

- строение, состав и значение жгутиков,

- классификация бактерий по расположению жгутиков,

- примеры жгутиковых микробов,

- факторы, влияющие на скорость движения микробов,

- методы определения подвижности микробов,

- особенности темнопольной микроскопии,

- принцип строения влажной камеры, ее предназначение,

- особенности культур, используемых в данных методах.

Студент должен уметь:

- техника микроскопии нативных неокрашенных препаратов в темном поле,

- выявление подвижности микроорганизмов,

- методика приготовления висячей капли,

- методика приготовления раздавленной капли,

- соблюдение мер безопасной работы с живыми культурами микробов,

- обработка рабочего места и рук дез. веществами.

Этапы самостоятельной аудиторной работы:

13. Подготовить препараты висячая и раздавленная капли из культуры, выращенной на жидкой питательной среде

14. Препараты бактериоскопировать в темнопольной микроскопии

15. Обработать рабочие места и руки

16. Записать результаты микроскопирования и алгоритмы методов в дневник