Методы определения жгутиков.

Окраска жгутиков очень сложный процесс, в лабораториях не используется. Диагностирование жгутиков производят по косвенному признаку – движение в жидкой среде. Для этого используется два метода: микроскопический и бактериологический.

Микроскопические методы.

• Серебрение по Морозову

Жгутики пропитывают азотнокислым серебром с последующим его восстановлением, что способствует искусственному увеличению их поперечного сечения, в результате чего жгутики удается обнаружить под микроскопом при увеличении в 1000-1200 раз

• Препарат «раздавленная капля».

На середину предметного стекла наносят петлей или пипеткой каплю исследуемого материала, ее осторожно накрывают покровным стеклом, чтобы в жидкости не образовалось пузырьков воздуха. Капля должна заполнять все пространство между стеклами л не выступать за края покровного стекла. Иногда, если препарат нужно рассматривать длительное время, края покровного стекла предварительно смазывают вазелином. Препарат можно окрасить, осторожно добавив к нему петлей разведенный краситель.

Готовые препараты рассматривают в сухих и иммерсионных системах. Для получения наибольшего контраста применяют темнопольную или фазово-контрастную микроскопию. Так как при этом чаще всего необходима двойная иммерсия (объектива и конденсора), толщина препарата не должна превышать 1,1—1,3 мм. Неокрашенные организмы выглядят под микроскопом обведенными светлой или темной (в зависимости от фокусировки) полоской (линия Векке), возникающей на границе преломления среды и тела.

• Препарат «висячая капля».

В препарате «висячая капля» взвесь живых микробных клеток рассматривают в жидкой питательной среде или в физиологическом растворе (0,85% раствор NaCl). При этом не следует готовить слишком густую взвесь микробов, т.к. это затруднит наблюдение за отдельными клетками.

Микропрепарат готовится следующим образом: на чистое обезжиренное покровное стеклышко наносится небольшая капля взвеси микробов. Края стеклышка смазываются вазелином (или каким либо другим подобным веществом) и после этого на него накладывается предметное стекло с углублением в середине таким образом, чтобы капля взвеси не касалась краев и дна лунки. Затем предметное стекло быстро переворачивается так, чтобы капля свободно свисала в лунке. Капля оказывается герметически заключенной во влажной камере. Если препарат не удастся закрыть герметически, то капля физиологического раствора начнет постепенно подсыхать. В высыхающей жидкости возникают токи, способствующие пассивному передвижению микроорганизмов, что может быть ошибочно оценено как произвольное движение микробной клетки.

Наблюдение за микробами во влажной герметически закрытой камере можно осуществлять длительное время – несколько часов, используя при этом фазово-контрастный микроскоп или микроскоп с темным полем зрения.

Бактериологический метод.

• Посев уколом в столбик полужидкого агара.

При этом методе посева делают укол в столбик полужидкого агара, инкубируют и наблюдают результат: подвижные бактерии растут по всей питательной среде в пробирке, среда мутнеет, неподвижные – только по уколу в виде стержня.

Также можно исследовать жгутики при электронной микроскопии – на большом увеличении. Именно с помощью этого метода были сделаны заключения о строении жгутиков.