Испытание проводят для субстанции, предназначенной для приготовления инъекционных лекарственных форм.

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Определение проводят методом ВЭЖХ.

Фосфатный буферный раствор с рН 5,5-5,6. 2,72 г калия фосфата однозамещенного растворяют в 700 мл воды, доводят рН раствора раствором калия гидроксида до 5,5-5,6, доводят объем раствора водой до 1000 мл, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

Испытуемый раствор. Около 0,05 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в подвижной фазе (ПФ), доводят объем раствора ПФ до метки и перемешивают.

Стандартный раствор. Около 0,05 г (точная навеска) ГСО рибоксина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в ПФ, доводят объем раствора ПФ до метки и перемешивают.

Раствор для проверки пригодности системы. 0,002 г гипоксантина и 0,002 г гуанозина растворяют в 10 мл стандартного раствора.

Хроматографические условия

Колонка	-	15 × 0,39 см с октадецилсилил силикагелем (С18), 5 мкм;
ПФ	-	фосфатный буферный раствор с рН 5,5-5,6;
Температура колонки	-	50 ºС;
Скорость потока	-	0,6 мл/мин;
Детектор	-	спектрофотометрический, 254 нм;
Объем пробы	-	10 мкл.

Хроматографируют раствор для проверки пригодности системы. Порядок элюирования компонентов: гипоксантин, рибоксин, гуанозин. Разрешение (R) между соседними пиками должно быть не менее 1,25; эффективность колонки (N), рассчитанная для пика рибоксина, должна быть не менее 3400 теоретических тарелок; хвостовой фактор (Т) пика рибоксина должен быть не более 1,1.

Шесть раз хроматографируют стандартный раствор. Относительное стандартное отклонение для площади пика рибоксина должно быть не более 2 %.

Хроматографируют испытуемый и стандартный растворы.

Содержание C₁₀H₁₂N₄O₅ в субстанции в пересчете на сухое вещество в процентах (Х) рассчитывают по формуле:

S₁ × а₀ × Р × 100

X = ————––––––––

S₀ × a₁ × (100-W)

где	S1	-	площадь пика рибоксина на хроматограмме испытуемого раствора;
	S0	-	площадь пика рибоксина на хроматограмме стандартного раствора;
	a1	-	навеска субстанции в граммах;
	а0	-	навеска ГСО рибоксина в граммах;
	Р	-	содержание C10H12N4O5 в ГСО рибоксина в процентах;
	W	-	потеря в массе при высушивании субстанции в процентах.

Хранение. В сухом, защищенном от света месте.

Сульфадиметоксин (ФС 42-0278-07)

4-Амино-N-(2,6-диметоксипиримидин-4-ил)бензолсульфонамид

C12H14N4O4S

М.м. 310,33

Cодержит не менее 99,0 % C₁₂H₁₄N₄O₄S в пересчете на сухое вещество.

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

Растворимость. Практически нерастворим в воде, очень мало растворим в хлороформе, мало растворим в спирте 95 %, растворим в хлористоводородной кислоте разведенной 8,3 %, легко растворим в растворах едких щелочей.

Подлинность. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру стандартного образца сульфадиметоксина.

0,075 г субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 5 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида и доводят объем раствора водой до метки. 5 мл полученного раствора разбавляют водой до 250 мл. По 20 мл полученного раствора помещают в две конические колбы, в первую прибавляют 0,4 мл 0,5 М раствора натрия гидроксида, а во вторую 0,4 мл хлористоводородной кислоты концентрированной.

Ультрафиолетовый спектр поглощения щелочного раствора, снятый относительно кислого раствора, в области от 240 до 280 нм должен иметь максимумы при 253 нм и 268 нм и минимум при 260 нм.

Ультрафиолетовый спектр поглощения кислого раствора, снятый относительно щелочного раствора, в области от 285 до 300 нм должен иметь максимум при 288 нм.

Раствор 0,05 г субстанции в 2 мл хлористоводородной кислоты концентрированной дает характерную реакцию на первичные ароматические амины.

Температура плавления. От 198 до 204 ºС.

Прозрачность раствора. Раствор 0,4 г субстанции в 10 мл 1 М раствора натрия гидроксида должен быть прозрачным или выдерживать сравнение с эталоном I.

Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании на Прозрачность раствора, должен быть бесцветным или выдерживать сравнение с эталоном В₉.

Кислотность. 1 г субстанции нагревают при температуре 70 ºС с 50 мл воды, свободной от углекислого газа, в течение 5 мин, быстро охлаждают и фильтруют. На титрование 25 мл фильтрата должно пойти не более 0,1 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида (индикатор 0,1 мл 0,04 % раствора бромтимолового синего).

Посторонние примеси. Испытание проводят методом ТСХ.

Испытуемый раствор. 0,1 г субстанции растворяют в смеси спирт 96 % - раствор аммиака концентрированный 25 % (9:1) и разбавляют той же смесью до 10 мл.

Раствор сравнения. 0,005 г сульфаниламида растворяют в смеси спирт 96 % - раствор аммиака концентрированный 25 % (9:1) и разбавляют той же смесью до 100 мл.

Раствор для опрыскивания. 0,02 г диметиламинобензальдегида растворяют в 20 мл спирта 96 % и прибавляют 0,5 мл хлористоводородной кислоты концентрированной.

На линию старта пластинки со слоем силикагеля 60 F наносят 10 мкл (100 мкг) испытуемого раствора и 10 мкл (0,5 мкг) раствора сравнения. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру со смесью хлороформ – метанол – диметилформамид (20:2:1) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт подвижной фазы дойдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры, сушат при температуре 100 – 105 ºС в течение 10 мин и опрыскивают раствором диметиламинобензальдегида.

На хроматограмме испытуемого раствора пятно, находящееся на уровне пятна сульфаниламида, по совокупности величины и интенсивности окраски не должно превышать пятно на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5 %).

Потеря в массе при высушивании. Около 1,0 г (точная навеска) субстанции сушат при температуре от 100 до 105 ºС до постоянной массы. Потеря в массе не должна превышать 0,5 %.

Хлориды. 0,5 г субстанции встряхивают в течение 3 мин со смесью 0,5 мл азотной кислоты разведенной 16 % и 9,5 мл воды и фильтруют. 4 мл фильтрата, разведенные водой до 10 мл, должны выдерживать испытание на хлориды (не более 0,01 % в субстанции).

Сульфаты. 1 г субстанции встряхивают в течение 3 мин со смесью 0,5 мл хлористоводородной кислоты разведенной 8,3 % и 19,5 мл воды и фильтруют. 10 мл фильтрата должны выдерживать испытание на сульфаты (не более 0,02 % в субстанции).

Сульфатная зола и тяжелые металлы. Сульфатная зола из 1,0 г (точная навеска) субстанции не должна превышать 0,1 % и должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,001 % в субстанции).

Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС «Остаточные органические растворители».

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Около 0,5 г (точная навеска) субстанции растворяют в смеси 75 мл воды и 10 мл хлористоводородной кислоты концентрированной и титруют нитритометрически. Конец титрования устанавливают по йодкрахмальной бумаге.

1 мл 0,1 М раствора натрия нитрита соответствует 31,03 мг C₁₂H₁₄N₄О₄S.

Хранение. Список Б. В сухом, защищенном от света месте.

ПРИКАЗ

Министерства здравоохранения Российской Федерации от 13.11.96

№ 377 Об утверждении Инструкции