Медицинская энзимология. Лабораторный практикум

3. Время начала и окончания ферментативной реакции следует фиксировать по секундомеру, причем в случае определения актив­ности ферментов и кинетических методов определения аналитов для каждой отдельной пробы, а не для серии целиком, иначе ре­зультаты анализа будут неверны. Началом реакции считается мо­мент добавления сыворотки (или стартера) в реакционную смесь, а также окрашивающего реагента, если реакция двухстадийная. Для кинетических методов, когда анализ в нескольких пробах проводят последовательно, время начала реакции и равные промежутки вре­мени между фотометрированиями следует точно фиксировать по секундомеру для каждой отдельной пробы. Так как определение, как правило, проводят в нескольких пробах, сыворотку в реакцион­ную смесь в параллельных пробах следует вносить через четко фик­сированные по секундомеру промежутки времени, например через 30 с или 1 мин. Началом реакции считается внесение сыворотки в первую пробу из серии. По истечении времени реакции следует с таким же интервалом останавливать реакцию в параллельных про­бах, т. е. вносить реагент, например щелочь, с интервалом 30 с или 1 мин, соответственно. Таким образом, время реакции будет фикси­ровано для каждой отдельной пробы. Исключением из этого прави­ла может быть только метод Райтмана–Френкеля. Так как время ферментативной реакции в этом методе – 1 ч, то допущенное от­клонение во времени между параллельно определяемыми пробами при серийном запуске и остановке реакции будет относительно не­большим и внесет незначительную ошибку в конечный результат по сравнению с ошибкой самого метода.