Практическое применение осадочных реакций

Характер Осаждения	Факторы	Применение в гигиенической и лечебной практике
Денатура ция	Температура 70-80 град.	Пастеризация пищевых продуктов, бактериологических питательных сред, лекарственных препаратов.
	Температура 100 град.	Кулинария, термическая обработка воды и пищи. Дезинфекция и дезинсекция одежды и белья.
	Соли тяжелых металлов (Hg, Ag, Cd, Pb, Cu)	Дератизация. Удаление доброкачественных кожных новообразований
	Окислители (например Н2О2 KMnO4, спиртовый раствор йода)	Антисептика, обработка инструментов и кожи
	Сильные минеральные и органические кислоты	Осаждение белка из биологических жидкостей при биохимических анализах. Качественные пробы на белок и количественное определение белка ( в моче)
	УФ-радиация	Дезинфекция воздуха в операционных и палатах
Высали вание	Соли аммония и щелочных металлов	Приготовление кристаллических белковых препаратов. Разделение белковых фракций.

Лабораторная работа № 3

Обратимое и необратимое осаждение белка. Фракционное разделение белков. Диализ. Электрофорез.

Реактивы и оборудование

1. Штативы для пробирок. 2. Водяная баня.3. Диализатор стеклянный с целлофановой мембраной. 4. Химические пробирки.5. Стеклянные воронки. 6. Раствор яичного белка.7.Раствор сульфата меди-II- 5%. 8. Раствор гидроксида натрия – 10%. 9. Раствор ацетата свинца-II – 5%. 10. Раствор сульфосалициловой кислоты - 20%. 11. Азотная кислота концентрированная. 12. Раствор сульфата аммония -5 0% 13. Сульфат аммония кристаллический. 14. Раствор нитрата серебра 1%.

Обратимое и необратимое осаждение белков (высаливание и денатурация)

Ход работы : берут штатив с 5 пробирками и в каждую отмеривают по 5 капель раствора яичного белка. Первую пробирку помещают на 2-3 мин. в кипящую водяную баню. Во вторую пробирку добавляют по каплям (5-6 капель) соль тяжелого металла (ацетата свинца). В третью пробирку раствор азотной кислоты. В четвертую – раствор сульфасалициловой кислоты. В пятую пробирку – раствор сульфата аммония. Наблюдают появление осадков во всех пробирках. Затем во все пробирки добавляют дистиллированную воду, в объеме, равном содержимому пробирок, встряхивают и наблюдают растворились ли осадки и делают выводы о типе осаждения белка в каждой пробирке ( денатурации или высаливании). Резу4льтаты работы оформляют в виде таблицы.

№ пробирки	Осаждающий фактор	Результат появление или отсутствие осадка	Растворим осадок или нет	Вывод указать характер осаждения
1
2
3
4
5

II.Диализ

Ход работы: в 2 пробирки наливают раствор яичного белка, содержащего примесь хлорида натрия; в одной делают биуретовую реакцию, в другой реакцию на ионы хлора с нитратом серебра в присутствии азотной кислоты – 5к. белка + 3 к. AgNO₃ . в двух других пробирках делают те же реакции с дистиллированной водой. Раствор яичного белка наливают в диализатор, который погружают в стакан с дистиллированной водой. Через 1 час вынимают диализатор из стакана и вновь, с небольшими порциями воды (диализата) и раствора яичного белка (диализируемой жидкости), проделывают биуретовую реакцию и реакцию на ионы хлора.

Название реакции	Диализируемая жидкость (солевой раствор белка – содержимое внутреннего такана)		Диализат (содержимое наружного стакана)
	до опыта	после опыта	до опыта	до опыта
1. биуретовая 2. на ионы хлора

Вывод

Методы разделения белков.

1) Высаливание нейтральными солями

2) Хроматография

3) Гель-фильтрация

4) Ультрацетрифугирование

5) Изоэлектрофокусирование

6) Температурная денатурация

7) Иммунологические методы

8) Электрофорез