Домашнее задание.

Итоговая контрольная работа по разделу «Раневые, гнойно-воспалительные и гнойно-септические инфекции».

Современная классификация бактероидов

Семейство: Bacteroidaceae

1. Род Bacteroides

(включает сахаролитические виды кишечных бактероидов)

B. fragilis

B. vulgatus

B. thetaiotaomicron

B. ovatus

B. distasonis

2. Род Prevotella

(включает умеренно-сахаролитические виды)

P. bivius заболевания урогенитального тракта

P. intermedius

P. melaninogenicus

3. Род Porphyromonas

(включает асахаролитические пигментированные виды)

P. gingivalis вызывают парадонтозы

P. endodontalis

Схема выделения и идентификации облигатных анаэробов

Забор материала: шприцем с плотно притертым поршнем (удалить воздух).

Транспортировка материала: в пробирке, герметично закрытой резиновой пробкой, с транспортной средой.

Предварительный этап (проводится не всегда): посев материала на жидкую среду обогащения, например, тиогликолевую с резазурином, и анаэробная инкубация.

1 этап: рассев материала (или со среды обогащения) на плотные питательные среды для получения изолированных колоний в анаэробных условиях (анаэробный бокс), анаэробная инкубация 24-72 часа при 37⁰С (анаэростат, анаэробный бокс).

2 этап: макро- и микроскопическое изучение выросших колоний. Параллельный рассев изолированных колоний на 2 чашки с питательной средой для аэробной и анаэробной инкубации при 37⁰С на 24-48 часов. Для облигатных анаэробов обязательно отсутствие роста в аэробных условиях.

3 этап: идентификация выделенной чистой культуры возбудителя. Ферментативная активность может быть оценена с помощью дифференциально-диагностической системы API-20А.

Вывод: указывается родовая и видовая принадлежность выделенной культуры.

Состав питательных сред

Транспортная среда:

Сердечно-мозговой бульон – 100мл

D-глюкоза -- 0,5 г

Цистеин -- 0,5 г

Пробирка заполняется средой на 2/3 объема, свободный объем заполняется смесью пропана и СО₂.

Среда КАБ (кровяной агар для бактероидов):

Вода дистиллированная -- 1000 мл

Пептон 10 г

Дрожжевой экстракт 5 г

Глюкоза 10 г

Цистеин 0,25 г

NaCl 3 г

Na₂HPO₄ 2 г

Гемин 1 г

Кровь 30 мл

Агар 20г

Неомицин 200 ед./100 мл среды

Основные методы микробиологического исследования

Цели микробиологической диагностики:

1. Нахождение возбудителя.

2. Обнаружение антител или антигенов.

3. Выявление состояния инфекционной аллергии.

4. Обнаружение специфических фрагментов ДНК или РНК возбудителя.

Для обнаружения возбудителя материал от больных, бактерионосителей или из объектов внешней среды (например: кровь, гной, мокрота, испражнения, вода, пищевые продукты и т.п.) исследуют следующими методами:

А) Бактериоскопический (микроскопический) метод, при котором из исследуемого материала приготавливают микропрепараты и изучают их в окрашенном виде в световом микроскопе; применяют также фазово-контрастную и люминисцентную микроскопию. Бактериоскопический метод простой, быстрый, но обычно дает только предварительный ответ, может быть использован не при всех инфекциях. Но при некоторых заболеваниях позволяет ставить и окончательный диагноз (например, при спирохетозах и др.).

Б) Бактериологический метод, при котором исследуемый материал засевают на питательные среды с целью выделения чистой культуры возбудителя заболевания. Полученную культуру идентифицируют, т.е. подвергают тщательному изучению для определения ее видовой (иногда типовой) принадлежности. Бактериологический метод позволяет поставить окончательный диагноз, он является ведущим методом при диагностике многих инфекционных заболеваний. Основные недостатки – трудоемкость и длительность: обычно ответ получают на 4-5 день, а при некоторых заболеваниях и позже, например, при туберкулезе – через месяц и более.

В) Биологический метод, при котором исследуемым материалом заражают восприимчивых животных с тем, чтобы у инфицированного животного обнаружить и выделить возбудителя, пользуясь для этой цели бактериологическим и бактериоскопическим методами, или выявить на животных присутствие токсина (биологическая проба). Биологический метод, как правило, применяют в том случае, когда не удается поставить микробиологический диагноз другими способами.

Г) Экспресс-методы (быстрой диагностики) основаны на обнаружении возбудителя в пробах, взятых от больного, которые позволяют дать ответ через несколько часов.

Возбудитель может быть выявлен в пораженных тканях с помощью флюоресцирующих антител. Это прямой и непрямой ИФ.

Антиген может быть обнаружен в материале от больного и другим способом, при помощи твердофазного иммунологического анализа, в серологических реакциях на твердой основе. В зависимости от маркера, который используется для метки антигенов или антител, эти реакции разделены на РИА (с использованием радиоактивных маркеров) и ИФА (ферментов). Методы просты, доступны, являются высокочувствительными и сочетают наглядность микроскопического метода со специфичностью серологического.

Серологический метод применяется для обнаружения антител или антигенов в организме больного или других обследуемых лиц.

Серологический метод заключается в постановке различных реакций иммунитета (реакции агглютинации, непрямой гемагглютинации, реакции связывания комплемента, преципитации и др.).

Обычно серологическое исследование проводится для обнаружения антител в исследуемой сыворотке с помощью известных антигенов – диагностикумов. Реже в исследуемых материалах (крови, моче, спинномозговой жидкости и др.) определяют антиген, пользуясь для этой цели диагностическими сыворотками с известными антителами. Серологический метод широко применяется, так как сравнительно прост, дает ускоренный ответ (в течение суток) и отличается специфичностью.

Аллергический метод применяется для выявления состояния инфекционной аллергии. Метод заключается в постановке кожных аллергических проб со специфическими антигенами (аллергенами), приготовленными из возбудителей заболевания. При положительной кожной пробе на месте введения возникает гиперемия, припухлость, что может указывать на наличие инфекции. Кожные аллергические пробы ставятся при туберкулезе, бруцеллезе, туляремии и ряде других заболеваний.

Молекулярно-генетический метод исследования позволяет обнаружить в клиническом материале специфические фрагменты ДНК или РНК возбудителя посредством молекулярной гибридизации или полимеразной цепной реакции (ПЦР).

ПЦР – молекулярно-генетический экспресс-метод исследования, позволяющий выявить присутствие в клиническом материале даже минимального количества специфических фрагментов ДНК или РНК с определенной нуклеотидной последовательностью и тем самым диагностировать природу инфекции. По своей чувствительности ПЦР далеко превосходит все остальные методы диагностики инфекционных заболеваний.