2 курс / Микробиология 1 кафедра / Экзамен микробик / vse_metody_MIKROB

1.Фактор инвазии.

2.Эндотоксин, обладающий пирогенным действием, вызывает интокси-

кацию, действует на клетки гладкой мускулатуры различных органов.

Сап – особо опасная инфекция, характеризуется острым или хроническим течением с образованием гранулем и абсцессов в различных органах. Зооантро-

поноз.

Источники инфекции: лошади, ослы, мулы, верблюды и др. Возбудитель может передаваться от человека к человеку.

Пути заражения: контактный и воздушно-капельный (при уходе за боль-

ными животными), реже – алиментарный (через инфицированную воду).

Заболевание протекает чаще в острой форме (септикопиемия), реже в хро-

нической (кожная, суставная, легочная и др.). Острая форма длится 7-14 дней и в 100% случаев заканчивается летально. В России сап ликвидирован, но суще-

ствует опасность завоза инфекции из стран Юго-Восточной Азии и Средизем-

номорья.

Возбудитель мелиоидоза – Burkholderia pseudomallei.

По морфо-тинкториальным свойствам сходен с возбудителем сапа, но в отличие от него, имеет жгутики (лофотрих).

Культуральные свойства: аэробы, растут на простых средах.

Факторы патогенности:

1. Фактор инвазии.

2. Эндотоксин, вызывающий интоксикацию.

3. Экзотоксины: летальный, некротический и др.

Мелиоидоз (ложный сап) – зоонозное инфекционное заболевание, проте-

кающее по типу септикопиемии.

12

Источники инфекции: грызуны и домашние животные (кошки, собаки,

козы, овцы, коровы и др.). Почва, зараженная выделениями больных грызунов,

является фактором передачи.

Пути заражения: чаще алиментарный, реже контактный.

Заболевание может протекать в септической или легочной форме.

Летальность высокая. Мелиоидоз эндемичен для стран Юго-Восточной Азии и Австралии.

Микробиологическая диагностика сапа и мелиоидоза.

1.Бактериологический метод: исследование крови, гноя из абсцессов и язв, мокроты, гнойного отделяемого из носа, мочи, испражнений и др.

2.Экспресс-метод: РИФ.

3.Молекулярно-биологический метод: ПЦР.

4.Серологический метод: РСК, РНГА, РА.

5.Аллергологический метод (только для сапа): со 2-3 недели заболева-

ния ставят пробу с малеином.

Специфическая профилактика и терапия не разработаны.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА.

1.Световая микроскопия препаратов, окрашенных по Граму, из чистых культур возбудителей чумы, туляремии, бруцеллеза, сибирской язвы,

сапа и мелиоидоза.

2.Учет реакции агглютинации Хеддльсона. Учет реакции агглютинации Райта для диагностики бруцеллеза.

13

Схема постановки реакции Хеддльсона.

Ингредиенты: физиологический раствор, сыворотка больного бруцеллезом,

бруцеллезный диагностикум Хеддльсона.

Техника постановки реакции агглютинации Хеддльсона:

1)микропипеткой в квадраты с контролями наносят по 0,03 мл физ. раствора;

2)этой же пипеткой вносят сыворотку больного в I квадрат – 0,08 мл, во II –

0,04 мл, в III – 0,02 мл, в IV – 0,01 мл, в КС – 0,03 мл сыворотки, перемеши-

вают и сбрасывают пипетку в дез. раствор;

3)другой пипеткой во все квадраты, кроме КС, вносят по 0,03 мл бруцеллез-

ного диагностикума, а затем перемешивают в следующем порядке: КА, IV, III, II, I квадраты; пипетку сбрасывают в дез. раствор; стекло покачивают и производят учет реакции. При положительной реакции наблюдается появ-

ление хлопьевидного осадка в квадратах I, II, III, IV.

Схема учета реакции агглютинации Райта

14

Занятие № 21

Тема. Общая характеристика семейства энтеробактерий. Эшерихиозы, клебсиеллезы. Кишечный эубиоз и дисбиоз.

Цель занятия: Изучить роль эшерихий и клебсиелл в инфекционной патологии человека. Изучить понятия кишечного эубиоза и дисбиоза, причины и микробиологическую диагностику дисбиоза, принципы коррекции.

I.Теоретические знания:

1.Общая характеристика представителей семейства энтеробактерий.

2.Характеристика банальных эшерихий, их функции. Роль в патологии человека.

3.Диареегенные эшерихии. Микробиологическая диагностика кишечных эшерихиозов.

4.Характеристика клебсиелл, вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика.

5.Кишечный эубиоз и дисбиоз. Причины формирования кишечных дисбиозов.

6.Микробиологическая диагностика кишечного дисбиоза. Принципы коррекции.

II.Практические навыки:

1.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с подозрением на кишечный эшерихиоз (коли-инфекция), вызванный ЕРЕС. Учет и интерпретация результатов.

2.Изучение характера роста представителей микрофлоры толстого кишечника на питательных средах.

3.Световая микроскопия (окраска по Граму) чистых культур представителей микрофлоры толстого кишечника.

4.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с предполагаемым диагнозом «кишечный дисбиоз». Интерпретация результатов.

5.Решение диагностических задач на дисбиоз.

1

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1. Общая характеристика представителей семейства энтеробактерий.

По современной классификации семейство Enterobacteriaceae включает 44

рода, часть из которых имеет медицинское значение: Escherichia, Klebsiella, Yersinia, Citrobacter, Enterobacter, Proteus, Shigella, Salmonella и др.

Энтеробактерии – грамотрицательные палочки, спор не образуют, есть подвижные и неподвижные варианты, не требовательны к питательным средам.

В связи с различной биохимической активностью идентификацию энтеробакте-

рий до рода проводят по биохимическим свойствам.

Генетическая изменчивость. Отличительной особенностью семейства энтеробактерий является чрезвычайно высокий диапазон генетической измен-

чивости, обусловленный плазмидными факторами: R-плазмиды (кодируют ус-

тойчивость к нескольким антибиотикам), плазмиды патогенности, F-плазмиды и др. В результате обмена плазмидами (внехромосомная изменчивость) у энте-

робактерий могут появляться разнообразные новые признаки, в том числе, уси-

ливающие их вирулентность.

Антигенная структура:

О – соматический антиген;

H – жгутиковый антиген (у подвижных форм);

К – капсульные (поверхностные) антигены.

Изучение антигенной структуры энтеробактерий имеет диагностическое значение для их окончательной идентификации.

Факторы патогенности энтеробактерий:

1.Адгезины – структуры, осуществляющие прикрепление к эпителиальным клеткам кишечника (пили, ЛПС наружной мембраны).

2.Инвазины – структуры и вещества, способствующие проникновению в эпителиальные клетки кишечника, иногда с размножением в них (капсу-

ла, ферменты инвазии).

3.Токсинопродукция – выработка экзоэнтеротоксина и/или эндотоксина.

2

4.К-антигены – определяют устойчивость бактерий к фагоцитозу.

5.R-плазмиды.

6.Эклипсные антигены с тканью кишечника.

7.«Острова патогенности» – хромосомные и внехромосомные гены, от-

вечающие за синтез адгезинов, инвазинов, различных токсинов и факто-

ров множественной устойчивости к антибиотикам.

2. Характеристика банальных эшерихий, их функции. Роль в патологии

человека.

К роду Escherichia относят банальные и диареегенные E.coli.

Банальные E.coli – представители облигатной (резидентной) микробиоты кишечника, условно-патогенные микроорганизмы.

Морфология эшерихий: грамотрицательные палочки, средних размеров,

спор не образуют, некоторые могут формировать микрокапсулу, подвижны

(перитрихи).

Культуральные свойства: на среде Эндо чаще образуют колонии, окра-

шенные в красный цвет (лактозопозитивные), реже – колонии бесцветные или цвета среды (лактозонегативные варианты банальных эшерихий при кишечном дисбиозе).

3

Биохимические свойства: эшерихии обладают высокой биохимической активностью, ферментируя углеводы до кислоты и газа. Изучение биохимиче-

ских свойств эшерихий проводят с помощью специальных тест-систем.

Планшет полимерный с мультимикротестом для биохимической идентификации энтеробактерий.

Банальные эшерихии выполняют в макроорганизме важные физиологи-

ческие функции, присущие нормальной микробиоте (см. учебно-методическое пособие по разделу «Физиология и экология микроорганизмов»).

Из них наиболее существенными являются:

● антагонистическая функция по отношению к некоторым патогенным бактериям, главным образом, возбудителям кишечных инфекций (сальмонеллы,

шигеллы, вибрионы); ● иммуномодулирующая и иммуностимулирующая функции: оказывают

постоянное антигенное стимулирующее действие, что способствует развитию лимфоидной ткани кишечника, синтезу секреторных и сывороточных IgA, ак-

тивации фагоцитоза, формированию и нормальному функционированию им-

мунной системы; ● витаминообразующая функция: участвуют в энтеральном синтезе ви-

таминов (группы В, К, никотиновая кислота и др.); ● участвуют в липидном и водно-солевом обмене, участвуют в обмене

желчных кислот.

При снижении резистентности организма банальные E.coli могут вызывать

эндогенные гнойно-воспалительные процессы различной локализации (парен-

теральные эшерихиозы).

4

Эшерихии, вызывающие инфекционный процесс внекишечной лока-

лизации, подразделяют на 3 группы:

- UPEC – уропатогенные (имеют специальные структуры для адгезии на

клетках эпителия мочевыводящих путей).

Клинические формы вызываемых ими заболеваний полиморфны:

менингиты, сепсис, уретриты, циститы, пиелонефриты и др. При высокой об-

семененности пищевых продуктов банальные кишечные палочки вызывают пищевые отравления (экзогенная инфекция). Банальные эшерихии, приобретая полирезистентность к антибиотикам, становятся возбудителями внутриболь-

ничных инфекций.

3. Диареегенные эшерихии. Микробиологическая диагностика кишечных эшерихиозов.

Диареегенные E.coli являются облигатно-патогенными микроорганизма-

ми. По морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам диарее-

генные эшерихии практически не отличаются от банальных E.coli. Их можно дифференцировать только по антигенным свойствам.

Антигенная характеристика:

-О-антиген (более 160 вариантов);

-Н-антиген (более 60 вариантов);

-К-антиген (более 100 вариантов).

Серологические варианты (серовары) диареегенных эшерихий обозначают антигенной формулой чаще по сочетанию О- и Н-антигенов. Например: E.coli

О157:Н7. В практике идентификацию возбудителей кишечных эшерихиозов,

как правило, проводят до серогруппы. Серогруппу обозначают по О-антигену,

например, E.coli О157.

Диареегенные E.coli вызывают острые кишечные инфекции – кишечные эшерихиозы (коли-инфекции). Их относят к экзогенным инфекциям.

5

Источники инфекции: больной человек или бактерионоситель.

Путь заражения: алиментарный.

Факторы передачи: вода и пищевые продукты. Чаще болеют дети до 3-х

лет.

В зависимости от механизма патогенного действия и клиники вызываемых заболеваний диареегенные E.coli подразделяют на 5 основных категорий

(табл.1).

Исследуемый материал: фекалии больного.

6

Методы диагностики.

1. Бактериологический метод (основной): посев исследуемого материала на дифференциально-диагностические среды (Эндо и др.). Идентификация выделенной культуры:

а) по биохимическим признакам (до вида) с помощью энтеротест-систем; б) по антигенным признакам (чаще до серогруппы, реже – до серовара) с

помощью РА с соответствующими диагностическими сыворотками.

2. Молекулярно-биологический метод: ПЦР (определение генов виру-

лентности диареегенных эшерихий).

4. Характеристика клебсиелл, вызываемые заболевания, микробиологиче-

ская диагностика.

Род Klebsiella относят к семейству энтеробактерий. Он включает 3 основ-

ных вида микроорганизмов, имеющих наибольшее значение в патологии чело-

века: K.pneumoniae (с подвидами pneumoniae, rhinoscleromatis, ozaenae),

K.oxytoca, K.granulomatis.

Морфология: грамотрицательные палочки, спор и жгутиков не образуют, формируют капсулу как в организме (in vivo), так и на питательных средах (in vitro).

Культуральные свойства: растут на обычных питательных средах. В МПБ – диффузное помутнение; на МПА – крупные слизистые колонии.

Факторы патогенности: адгезины, капсула, R-плазмиды, эндотоксин, β-

лактамазы.

7