2 курс / Микробиология 1 кафедра / Экзамен микробик / vse_metody_MIKROB
.pdfЗанятие № 30
Тема. Характеристика кишечных вирусов: вирусы полиомиелита, Коксаки, ЕСНО, рота-, норо-, астро-, парэховирусы, вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика. Вирусные гепатиты.
Цель занятия. Изучить характеристику кишечных вирусов и микробиологическую диагностику вызываемых ими заболеваний, препараты для специфической профилактики полиомиелита, гепатитов А и В.
I.Теоретические знания:
1.Характеристика вирусов полиомиелита, микробиологическая диагностика и специфическая профилактика полиомиелита. Роль отечественных ученых в развитии вакцинации.
2.Характеристика неполиомиелитных энтеральных вирусов (Коксаки и ЕСНО), вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика.
3.Характеристика ротавирусов, микробиологическая диагностика.
4.Норовирусы, астровирусы и парэховирусы – роль в патологии.
5.Характеристика вирусов – возбудителей гепатита А и Е, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика гепатита А.
6.Возбудители парентеральных вирусных гепатитов (B, D, C, G), микробиологическая диагностика, специфическая профилактика гепатита В.
II.Практические навыки:
1.Изучение схемы вирусологического исследования фекалий больного энтеровирусной инфекцией. Учет РН в культуре клеток с типоспецифическими диагностическими сыворотками к вирусам Коксаки В. Интерпретация результатов исследования.
1
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ
1.Характеристика вирусов полиомиелита, микробиологическая диагностика и специфическая профилактика полиомиелита. Роль отечествен-
ных исследователей в развитии вакцинации Вирусы полиомиелита: РНК-содержащие, не имеют суперкапсидной
оболочки, имеют три антигенных типа (I, II, III).
Культивирование вирусов: в культуре клеток, что используют для диагностики и приготовления полиомиелитных вакцин.
Источник инфекции: больной человек или вирусоноситель.
Пути передачи: чаще – алиментарный (факторы передачи – молоко, молочные продукты, овощи и др.), реже – воздушно-капельный, контактнобытовой.
Патогенез: вирус попадает в глотку, кишечник, прикрепляется к рецепторам эпителиальных клеток и размножается в регионарных лимфатических узлах глотки и кишечника, затем вирус попадает в кровь.
При наличии в крови антител к вирусу вирусемия переходит в инаппа-
рантную или абортивную формы болезни.
При отсутствии в крови антител к вирусу происходит его проникнове-
ние в ЦНС и поражение двигательных нейронов спинного и продолговатого мозга. Чаще это приводит к развитию вялых параличей мышц туловища и конечностей, реже – к возникновению серозного менингита и параличу дыхательной мускулатуры. Паралитические формы в основном возникают у детей в возрасте от 3 до 10 лет (чаще вызваны I антигенным типом вируса).
Инкубационный период: в среднем 7-14 дней.
Классификация полиомиелита с учетом клинических признаков.
1.Без поражения ЦНС:
вирусоносительство: форма, при которой наблюдается выделение вируса из кишечника;
инаппарантная (бессимптомная) форма: ее диагностируют только в очагах инфекции;
2
абортивная форма: кратковременные катаральные явления в ротоглотке и/или дисфункция ЖКТ.
2.С поражением ЦНС:
паралитическая форма: с развитием вялых парезов и параличей (спинальная форма) и/или поражениями ядер черепно-мозговых нервов (синдром полиоэнцефалита);
непаралитическая форма: серозный менингит.
В91-96% случаев инфекция протекает бессимптомно, в 4-8% – в виде абортивных или непаралитических форм, в 0,1-1% случаев – в виде паралитических форм.
Материал на исследование берут в зависимости от клинической формы заболевания (табл. 2).
Таблица 2 Материал на исследование в зависимости от клинической формы заболевания
Клиническая форма Материал на исследование
Без поражения ЦНС
Вирусоносительство |
|
Фекалии |
Инаппарантная форма |
|
Фекалии, мазок из ротоглотки и/или |
|
|
|
Абортивная форма |
|
парные пробы сыворотки крови |
|
|
|
|
С поражением ЦНС |
|
Непаралитическая форма |
|
Фекалии*, ликвор, мазок из ротоглот- |
Паралитическая форма |
|
ки, парные пробы сыворотки крови |
|
|
|
*Фекалии при подозрении на полиомиелит берут дважды: 1 проба – в стационаре в день установления диагноза; 2 проба – через 24-48 часов после 1 пробы.
Микробиологическая диагностика.
1.ПЦР.
2.Серологический метод: РСК, РН для определения динамики нарастания титра антител.
3.Вирусологический метод: заражение исследуемым материалом культуры клеток с идентификацией вируса в РН.
3
Специфическая профилактика.
Плановая (активная):
1)живая полиомиелитная пероральная вакцина I, II, III типов (Россия);
2)инактивированная вакцина из вирусов полиомиелита I, II, III типов (Франция).
Экстренная (пассивная): нормальный человеческий иммуноглобулин вводят однократно непривитым детям после контакта с больными паралитической формой полиомиелита.
Роль отечественных исследователей в развитии вакцинации.
На основе полученных А. Сэбиным аттенуированных штаммов полиовирусов I, II и III типов в конце 50-х гг. XX века отечественными вирусологами А.А. Смородинцевым и М.П. Чумаковым было налажено производство живой вакцины в нашей стране. С 1959 г. в России проводится плановая массовая вакцинация детей против полиомиелита, что позволило предотвратить эпидемии этой инфекции.
2.Характеристика неполиомиелитных энтеральных вирусов (Коксаки и ECHO), вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика
Кнеполиомиелитным энтеральным вирусам относят вирусы Коксаки А, Коксаки В, ECHO (enteric cytopathogenic human orphan), РНК-содержащие вирусы, не имеют суперкапсидной оболочки.
Культивирование вирусов: Коксаки А – в организме новорожденных мышей, Коксаки В и ЕСНО – в культуре клеток.
Имеют много антигенных типов.
Источник инфекции: больной человек или вирусоноситель.
Пути передачи: алиментарный (через инфицированную воду и продукты питания), воздушно-капельный.
Основные клинические формы заболеваний, вызываемых неполиомиелитными энтеральными вирусами изложены в таблице 3.
4
|
Таблица 3 |
|
Основные клинические формы |
||
|
|
|
Клинические формы |
Возбудитель |
|
Серозный менингит |
|
|
Паралитическая форма |
Коксаки А, В, ЕСНО |
|
Диарея |
||
|
||
ОРВИ |
|
|
Герпетическая ангина |
|
|
Высыпания в полости рта, на кистях и стопах |
Коксаки А |
|
Менингоэнцефалит и миокардит |
|
Материал на исследование забирают в зависимости от клинической формы заболевания: фекалии (схема забора как при подозрении на полиомиелит), отделяемое из носоглотки, ликвор (при серозном менингите).
Микробиологическая диагностика.
1.ПЦР.
2.Серологический метод: РСК, РН для определения антител в парных пробах сыворотки больного (с интервалом не менее 14 дней). Диагностическим является 4-кратное нарастание титра антител у взрослых и 2-кратное – у детей.
3.Вирусологический метод: заражение исследуемым материалом культур клеток и новорожденных мышей с последующей идентификацией в реакции нейтрализации (РН).
3. Характеристика ротавирусов, микробиологическая диагностика Ротавирусы: РНК-содержащие, не имеют суперкапсидной оболочки.
Сферическая форма и наличие трехслойной капсидной оболочки придает им вид «колеса» (лат. rota – колесо).
Источник инфекции: больной человек или вирусоноситель.
Пути передачи: алиментарный (через воду и инфицированные продукты), реже – контактно-бытовой.
5
Патогенез и клинические проявления: ротавирусы вызывают гибель зрелых эпителиоцитов тонкого кишечника, что приводит к гиперсекреции воды и электролитов в просвет тонкого кишечника. В результате у больного возникает острый гастроэнтерит, который характеризуется лихорадкой, обильным водянистым стулом желтого цвета до 10-15 раз в сутки, рвотой и обезвоживанием организма.
Чаще болеют дети первых трех лет жизни. Ротавирусы преобладают в этиологической структуре гастроэнтерита у детей младшего возраста. Ротавирусы нередко являются возбудителями внутрибольничной кишечной инфекции, особенно среди новорожденных и детей раннего возраста.
Материал на исследование: фекалии.
Микробиологическая диагностика: иммунохроматографический тест,
ИФА, РИФ для обнаружения антигенов вируса.
4. Норовирусы, астровирусы и парэховирусы – роль в патологии Норовирусы: РНК-содержащие, не имеют суперкапсидной оболочки. Вы-
зывают гастроэнтерит с некротическими поражениями эпителиоцитов, болями в животе и диареей. Эти вирусы являются основной причиной небактериальных гастроэнтеритов детей старше 4 лет и взрослых.
Источник инфекции: больной человек.
Путь передачи: алиментарный (через воду и пищевые продукты).
Материал на исследование: фекалии.
Микробиологическая диагностика: ПЦР.
Астровирусы: РНК-содержащие, имеют форму икосаэдра и звездчатую поверхность с 5-6 отростками, без суперкапсидной оболочки. Вызывают гастроэнтерит с диареей, тошнотой и рвотой.
Источник инфекции: больной человек. Пути передачи: алиментарный. Материал на исследование: фекалии.
Микробиологическая диагностика: ПЦР.
6
Парэховирусы: РНК-содержащие, не имеют суперкапсидной оболочки. Вызывают гастроэнтерит. Основной группой риска являются дети до 5 лет.
Источник инфекции: больной человек.
Пути передачи: алиментарный, реже – воздушно-капельный.
Материал на исследование: фекалии.
Микробиологическая диагностика: ПЦР.
Норо-, астро- и парэховирусы широко распространены в человеческой популяции. Более 90% людей инфицируются этими вирусами и болеют в детском возрасте (от 2 до 5 лет).
5.Характеристика вирусов – возбудителей гепатитов А и Е, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика гепатита А
Вирус гепатита А (HAV): РНК-содержащий, не имеет суперкапсидной
оболочки.
Источник инфекции: больной человек.
Путь передачи: алиментарный (через инфицированные пищевые продукты и воду).
Патогенез: из кишечника вирус попадает в кровоток и переносится в печень. Инфицируя гепатоциты, вирус не вызывает цитотоксического эффекта. Повреждение зараженных гепатоцитов возникает в результате атаки на них ЦТЛ. Клетки, содержащие вирус, уничтожаются, повреждения восстанавливаются.
Инкубационный период: в среднем 30 дней.
Клиника: заболевание имеет острое начало, наблюдается повышение температуры, тошнота, рвота. На 5-7 день болезни возможно появление желтухи. Встречаются варианты бессимптомного течения заболевания. Хронические формы гепатита и вирусоносительство не развиваются.
7
Микробиологическая диагностика.
1.ИФА:
определение в сыворотке крови IgM к вирусу гепатита А на ранних стадиях болезни (основной метод);
определение IgG в парных пробах сыворотки крови к HAV. Диагностическим является 4-кратное нарастание тира антител.
обнаружение HAV в фекалиях больного.
2.ПЦР: обнаружение РНК вируса в фекалиях.
Специфическая профилактика гепатита А.
Активная: инактивированная культуральная вакцина; Пассивная (экстренная): иммуноглобулин нормальный человеческий. Прово-
дится лицам, контактировавшим с больными.
Вирус гепатита Е (HEV): РНК-содержащий, не имеет суперкапсидной оболочки.
Источник инфекции: больной человек.
Путь передачи: алиментарный, в основном через инфицированную воду. Патогенез: репродукция вируса происходит в гепатоцитах и сопровожда-
ется гибелью клеток.
Инкубационный период: от 2 до 6 недель.
Клиника: заболевание сопровождается умеренным поражением печени, интоксикацией, реже – желтухой.
Наибольшую опасность гепатит Е представляет для беременных во II и III триместрах. Заболевание у них может приобретать злокачественное течение с быстрым развитием острой печеночной и почечной недостаточности. Летальность до 20%. При трансплацентарной передаче вируса могут происходить выкидыши.
Вирус гепатита Е может поражать диких и домашних животных (свиней, крупный рогатый скот, птиц и т.д.) и передаваться от них к человеку.
Материал на исследование: фекалии, сыворотка крови больного.
8
Микробиологическая диагностика.
1. ИФА: определение IgM и IgG к вирусу гепатита Е в сыворотке крови больного.
2. ПЦР: обнаружение РНК вируса в фекалиях и крови больного.
6. Возбудители парентеральных вирусных гепатитов (B, D, C, G), микробиологическая диагностика, специфическая профилактика гепатита В
Вирус гепатита В (HBV): сложноорганизованный ДНК-содержащий вирус. Он состоит из сердцевины – капсида, являющегося его НВс-антигеном и суперкапсидной оболочки, содержащей поверхностный НВs-антиген. Суперкапсидная оболочка двухслойная, что определяет чрезвычайно высокую устойчивость вируса во внешней среде. Для его уничтожения требуется автоклавирование при давлении 1,5 атм в течение 40 минут.
Антигены вируса гепатита В:
HBsAg: поверхностный, или австралийский (впервые обнаружен в сыворотке крови австралийских аборигенов), находится в суперкапсидной оболочке вируса. Обнаруживается в крови не только в составе вирионов, но и в виде самостоятельных фрагментов, которые неинфекционны, но высокоиммуногенны, т.е. стимулируют образование анти-НВs-нейтрализующих антител. HBsAg также обнаруживают в слюне, моче, сперме, влагалищном секрете;
HBcAg: «сердцевинный антиген», никогда не определяется в свободном состоянии в крови. Его обнаруживают только в зараженных вирусом гепатоцитах;
HBeAg: является производным HBcAg. Появление HBeAg в крови связано с репликацией вируса в гепатоцитах;
HBxAg: появляется при развитии первичного рака печени.
Источник инфекции: вирусоноситель или больной человек. Главными источниками заболевания являются вирусоносители, количество которых в мире превышает 400 миллионов человек.
9
Пути передачи:
парентеральный (основной) – при переливании крови и ее препаратов, при инъекциях, зубоврачебных манипуляциях и т.д.;
половой (через сперму и влагалищный секрет);
интранатальный;
трансплацентарный;
трансплантационный.
Патогенез: вирус гепатита В размножается в гепатоцитах без их. Для HBV характерно взаимодействие с гепатоцитами как по типу интегративной, так и по типу продуктивной инфекции. Интегративная инфекция сопровождается встраиванием вирусной ДНК в хромосому гепатоцита. При этом наблюдается синтез HBsAg. В процессе продуктивной инфекции происходит формирование новых вирусных частиц. Репликация вируса протекает в цитоплазме гепатоцита. Маркером репликации является появление в крови HBеAg. Сам вирус не разрушает клетки. Повреждение и лизис гепатоцитов вызывают CD8+ Т- лимфоциты, что провоцирует клеточное воспаление и развитие острого гепатита.
Инкубационный период: от 30 до 90 дней.
Клинические формы:
острая: может протекать как с клиническими проявлениями (желтушный и безжелтушный варианты), так и без них (инаппарантная форма);
хроническая (у 10-15% больных): формируется в результате интегративной вирусной инфекции и проявляется рецидивирующей симптоматикой с нарушениями функции печени в периоды репликации вируса.
Осложнения: острая печеночная энцефалопатия (печеночная кома), цирроз печени, первичный рак печени.
Микробиологическая диагностика.
1.ИФА:
определение HBs- и HBeAg в крови больного. Показателем активной репликации вируса (при острой инфекции и рецидиве хрониче-
10