2 курс / Микробиология 1 кафедра / Экзамен микробик / vse_metody_MIKROB
.pdfшейных), гепатоспленомегалией. В крови появляется большое количество атипичных мононуклеаров (бластоподобные лимфоциты и моноциты).
Лимфопролиферативные заболевания. Вирус является митогеном для В-
лимфоцитов и способствует развитию опухолей, особенно у пациентов с дефектом Т-клеточного иммунитета, а также опухолей, имеющих эндемичный характер: африканская лимфома Беркитта у детей, в Юго-Восточной Азии – карцинома носоглотки у молодых мужчин.
Диагностика.
1.Общий анализ крови: обнаружение атипичных мононуклеаров (95,5%).
2.ПЦР.
6. ВИЧ-инфекция, |
микробиологическая |
диагностика, |
СПИД- |
ассоциированные заболевания Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ): РНК-содержащий, имеет су-
перкапсидную оболочку.
ВИЧ вызывает инфекцию, сопровождающуюся быстрым эпидемическим распространением и заканчивающуюся синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД). СПИД характеризуется тяжелым поражением иммунной системы, длительным течением, полиморфностью клинических симптомов, абсолютной летальностью.
Характерная особенность вируса – наличие обратной транскриптазы – РНК-зависимой ДНК-полимеразы. Обратная транскриптаза (или ревертаза) обеспечивает обратную направленность передачи генетической информации от РНК к ДНК. Это свойство вирусов придает им способность к интегративной инфекции в клетках организма хозяина.
На поверхности вируса находятся 2 типа вирусных гликопротеинов. Одни из них (gp 120) взаимодействуют с рецепторами CD4+ клеток организма человека (Т-хелперы, макрофаги и моноциты). Наиболее чувствительны к ВИЧ – Т- хелперы, т.к. содержат на своей поверхности большое количество рецепторов
CD4.
8
Выделяют 2 антигенных варианта вируса: ВИЧ-1 и ВИЧ-2, которые различаются по строению генома.
ВИЧ-1 обладает высокой антигенной изменчивостью. Она касается постоянно мутирующего гена, продуцирующего синтез gp120-гликопротеина. В результате образуется много антигенных вариантов. Это затрудняет создание эффективных вакцин.
Патогенез: взаимодействие ВИЧ с клетками организма происходит по типу интегративной инфекции. В интегрированном с ДНК клетки состоянии вирус может длительно персистировать в организме (до 10 и более лет). При активации вируса интегративная инфекция переходит в продуктивную, что приводит к клиническим проявлениям ВИЧ-инфекции.
ВИЧ обладает тремя механизмами уклонения от действия иммунной системы: 1) интеграция вирусной нуклеиновой кислоты с ДНК клетки хозяина, что приводит к длительному сохранению инфекции; 2) вирус нарушает работу МНС I, в результате ЦТЛ не распознает и не уничтожает ВИЧ-инфицированные клетки; 3) ВИЧ инфицирует и убивает CD4+ Th, что приводит к нарушению работы как клеточного, так и гуморального звеньев иммунитета в целом. Наступает состояние иммунодефицита.
Источник инфекции: больной человек или ВИЧ-инфицированный. Наибольшая концентрация вируса, опасная для заражения, присутствует в
крови, семенной жидкости, вагинальном секрете, более низкая – в грудном молоке.
Основные пути передачи и контингенты риска при ВИЧ-инфекции представлены в табл. 4.
Таблица 4 Основные пути передачи и контингенты риска при ВИЧ-инфекции
|
Пути передачи |
Контингенты риска |
|
1. |
Половой |
Гомосексуалы, бисексуалы, проститутки |
|
|
|
Наркоманы (при внутривенном введении наркоти- |
|
2. |
Парентеральный, гемо- |
ков нестерильными шприцами и иглами); больные |
|
|
трансфузионный |
гемофилией и другие контингенты, требующие |
|
|
|
переливания крови и ее препаратов |
|
3. |
Контактный |
Медицинский персонал, контактирующий с кро- |
|
вью (хирурги, акушеры-гинекологи, стоматологи и |
|||
|
|
||
|
|
9 |
др.)
4.Трансплацентарный, ин- Дети, рожденные от ВИЧ-инфицированных матетранатальный, при груд- рей ном вскармливании
Исследуемый материал: кровь больного.
Микробиологическая диагностика.
1.ИФА: определение вирусных антигенов (ранняя диагностика) и суммарных антител к ВИЧ (через 2 недели от начала острой инфекции);
2.Иммуноблоттинг (blot (англ.) – пятно): комбинированный метод (электрофорез + ИФА). Блоттинг – перенос разделенных электрофорезом белков ВИЧ на фильтровальную бумагу для дальнейшего определения антител к данным белкам с помощью ИФА. Первые недели после инфицирования представляют собой период «серонегативного окна», когда антитела к ВИЧ не выявляются, его длительность около 3 месяцев, иногда 6-10 месяцев;
3.ПЦР: определение РНК ВИЧ в крови в остром периоде.
ВИЧ-инфекция характеризуется длительным течением и прогрессирующим снижением иммунитета. Это приводит к развитию тяжелых форм оппортунистических инфекций и заканчивается гибелью больного.
Основные СПИД-ассоциированные заболевания, приводящие к смерти больных с ВИЧ-инфекцией.
1.Оппортунистические инфекции:
вызванные простейшими (токсоплазмы и др.);
вызванные грибками (Pneumocystis сarinii – возбудитель пневмоцистной пневмонии; Candida и др);
вызванные бактериями (микобактерии, условно-патогенные бактерии и др.);
вызванные вирусами (герпетические вирусы).
10
2.Опухолевые процессы:
саркома Кáпоши: множественная злокачественная опухоль сосудистой ткани. Характеризуется кожными поражениями в виде пятен красносинего цвета;
лимфома мозга и других локализаций.
7.Характеристика вируса бешенства, микробиологическая диагностика, лечебно-профилактическая иммунизация
Вирус бешенства: РНК-содержащий, имеет суперкапсидную оболочку.
Выделяют 2 варианта вируса: «уличный», вызывающий бешенство и «фиксированный», аттенуированный (получен Л. Пастером путем много-
кратных пассажей уличного вируса через мозг кроликов) – применяется для получения антирабической вакцины.
Бешенство (rabies) – древняя зоонозная инфекция. Резервуарами возбудителя могут быть практически все теплокровные животные.
Основные источники инфекции для человека: среди диких животных – хищники, в России – чаще лисы и волки; из домашних животных – собаки и кошки.
Заражение в большинстве случаев происходит через укусы больными животными или при попадании их слюны на поврежденные кожные покровы и слизистые оболочки. Животные заразны с конца инкубационного периода, в среднем в течение 10 дней, до появления у них клинических симптомов заболевания.
Инкубационный период варьируется от нескольких дней до нескольких месяцев. Длительность инкубационного периода зависит от близости места укуса к головному мозгу. Наиболее короткий инкубационный период реги-
стрируется при укусах в области головы, шеи, кистей рук.
Патогенез и клиника: при попадании в организм вирус бешенства размножается в тканях на месте укуса. Затем по аксонам периферических нервов достигает клеток головного и спинного мозга, где размножается. В цитоплазме
11
нейронов продолговатого мозга и гиппокампа происходит накопление вируса с образованием включений Бабеша-Негри. Под действием вируса наступает гибель нейронов, что вначале приводит к повышению рефлекторной возбудимости, а затем к развитию судорог и параличей. Из мозга вирус центробежно попадает в различные ткани, в том числе в слюнные железы, откуда выделяется со слюной.
Выделяют 3 стадии заболевания:
1.начальная: неприятные ощущения в области укуса, бессонница, беспокойство, депрессия;
2.возбуждения: основным признаком заболевания является гидрофобия (водобоязнь), т.к. при попытке выпить воду у больного возникают судороги мышц глотки и гортани. Судороги могут быть спровоцированы громким звуком (фонофобия), ярким светом (фотофобия), движением воздуха (аэрофобия);
3.параличей: судороги и приступы фобий прекращаются. Смерть наступает от паралича дыхательного или сердечно-сосудистого центров. Летальность составляет ≈100%.
Микробиологическая диагностика.
Прижизненная диагностика основана на клинических проявлениях заболевания.
Посмертная диагностика.
1.Микроскопический метод: определение в мазках-отпечатках из области гиппокампа вирусных включений в окраске по Селлерсу. В пораженных вирусами нейронах обнаруживают розово-красные включения Бабеша-Негри на голубом фоне цитоплазмы.
2.РИФ: определение вирусного антигена в том же исследуемом материале.
3.Вирусологический: внутримозговое заражение белых мышей. Материал на исследование: кусочки мозга из области гиппокампа и ткань слюнных желез.
12
Лечебно-профилактическая иммунизация при бешенстве проводится после укусов больными или подозрительными на бешенство животными, при ослюнении поврежденных кожных покровов и слизистых оболочек, при повреждении кожи в процессе вскрытия трупов.
Активная лечебно-профилактическая иммунизация при бешенстве:
концентрированная очищенная культуральная инактивированная антирабическая вакцина.
Пассивная лечебно-профилактическая иммунизация при бешенстве:
иммуноглобулин антирабический из сыворотки крови лошадей (Россия), иммуноглобулин антирабический человеческий донорский (Франция).
Иммуноглобулин используют одновременно с вакциной в случаях короткого инкубационного периода (при укусах в области головы, кистей рук, шеи).
8. Общая характеристика арбовирусов. Роль отечественных исследователей в их изучении
Название «арбовирусы» происходит от лат. arthropoda – членистоногие и англ. borne – передающийся. Животные и человек заражаются при укусах кровососущих членистоногих (клещи, комары) в природных очагах инфекции. Около 100 видов арбовирусов способны вызывать заболевания у людей. Это РНК-содержащие вирусы, имеют суперкапсидную оболочку, за исключением
Reoviridae.
В группу арбовирусов включены представители 4 семейств:
1.Togaviridae (от лат toga – плащ, накидка);
2.Bunyaviridae (название дано по местности Буньямвера в Уганде);
3.Reoviridae, помимо ОРВИ, некоторые представители относятся к арбовирусам;
4.Flaviviridae (от лат. flavis – желтый).
Арбовирусные инфекции в подавляющем большинстве природно-очаговые заболевания, связанные с местами обитания диких животных – прокормителей членистоногих.
13
Клинически проявляются в виде следующих основных заболеваний:
энцефалиты и энцефаломиелиты (весенне-летний клещевой энцефалит, японский энцефалит, венесуэльский энцефаломиелит и др.);
геморрагические лихорадки (конго-крымская геморрагическая лихорадка, омская геморрагическая лихорадка, желтая лихорадка, лихорадка денге и др.).
Материал на исследование – в зависимости от заболевания.
Микробиологическая диагностика.
1.Вирусологический.
2.Серологический.
3.ПЦР.
Роль отечественных исследователей в изучении арбовирусов.
Учение о природной очаговости инфекционных заболеваний было создано отечественным эпидемиологом Е.Н.Павловским в начале XX века. В открытие и изучение вирусов клещевого и японского энцефалитов, крымской и омской геморрагических лихорадок большой вклад внесли отечественные ученыевирусологи Л.А. Зильбер, М.П. Чумаков, А.А. Смородинцев.
9. Вирусы весенне-летнего клещевого энцефалита, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика и специфическое лечение
Вирус клещевого энцефалита: РНК-содержащий, имеет суперкапсидную оболочку.
Клещевой энцефалит – природно-очаговое инфекционное заболевание, которое встречается на территории России (в Сибири, на Дальнем Востоке, на Урале), а также в Центральной и Северной Европе, в регионах с хвойными лесами. Характерна весенне-летняя сезонность.
Основной резервуар и переносчики вируса: иксодовые клещи. Поддер-
жание циркуляции вируса осуществляется за счет «прокормителей» клещей – грызунов, птиц, диких и домашних животных.
14
Пути передачи: трансмиссивный (основной) – через укусы клещей, алиментарный (при употреблении сырого молока коз и овец).
Инкубационный период: 8-20 дней.
Патогенез и клиника: в месте проникновения вирусов происходит их репродукция и накопление. Затем гематогенным или лимфогенным путем вирусы проникают в спинной и головной мозг, поражая все отделы ЦНС, особенно двигательные нейроны спинного мозга и стволовой части головного мозга. Заболевание начинается остро, с внезапного подъема температуры до 39-400С. Различают несколько клинических форм заболевания: лихорадочную, менингеальную и паралитическую. Летальность составляет 15-20%.
Материал на исследование: кровь, ликвор, парные пробы сыворотки.
Микробиологическая диагностика.
1.ПЦР.
2.Серологический метод: РСК, РТГА и ИФА с парными пробами сыворотки больного с интервалом 2-3 недели.
3.Вирусологический метод: материалом от больного (кровь, ликвор) заражают белых мышей интрацеребрально с целью выделения и идентификации вируса (широкого применения метод не имеет).
Активная специфическая профилактика: инактивированная культу-
ральная вакцина (по эпидпоказаниям).
Экстренная (пассивная) специфическая профилактика и специфиче-
ское лечение: иммуноглобулин против клещевого энцефалита человеческий донорский, иммуноглобулин против клещевого энцефалита лошадиный.
10. Геморрагические лихорадки, характеристика возбудителей, микробиологическая диагностика
Возбудители геморрагических лихорадок: РНК-содержащие вирусы,
имеют суперкапсидную оболочку.
15
Геморрагические лихорадки – острые лихорадочные заболевания, характеризующиеся поражением кровеносных сосудов с развитием геморрагического синдрома (кровоизлияния и кровотечения).
В России встречаются: конго-крымская геморрагическая лихорадка (ККГЛ), лихорадка Западного Нила (ЛЗН), омская геморрагическая лихорадка (ОГЛ), геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) и др. Геморрагические лихорадки относят к природно-очаговым зоонозным инфекциям. ККГЛ чаще встречается в южных регионах, включая Ростовскую область. ЛЗН регистрируется в Западной Сибири, Краснодарском крае, Астраханской, Волгоградской областях. ОГЛ распространена в Западной Сибири. ГЛПС регистрируется на Урале, в Поволжском и Волго-Вятском районах.
Резервуарами возбудителей являются животные (грызуны, крупный и мелкий рогатый скот) клещи, для ЛЗН – дикие и домашние птицы.
Геморрагические лихорадки характеризуются общими симптомами:
высокая температура, интоксикация, на 3-4-й день присоединяется геморрагический синдром (кожные кровоизлияния, носовые и маточные кровотечения, геморрагический конъюнктивит и др.)
Основной путь передачи (кроме ГЛПС): трансмиссивный (через укусы клещей, комаров и москитов), для ККГЛ возможен контактный путь при проведении медицинских манипуляций.
Вирусы – возбудители ГЛПС не относятся к арбовирусам, и выделены в отдельную группу робовирусов (от англ rodent borne viruses – «вирусы, рожденные грызунами»).
Источник инфекции: лесные и степные грызуны.
Пути передачи: аэрогенный, алиментарный (через продукты, инфицированные выделениями грызунов), контактный.
Микробиологическая диагностика.
1.Экспресс-диагностика: обнаружение в крови вирусных антигенов с помощью РИФ, ИФА, РНГА и др.
2.ПЦР.
16
3. Серологический метод: РСК, ИФА, РИФ, РНГА и др.
11. Характеристика вирусов папилломы человека, вызываемые заболевания, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика
Вирусы папилломы человека (ВПЧ): ДНК-содержащие, не имеют су-
перкапсидной оболочки. Описано около 200 папилломавирусов. Папилломавирусы человека инфицируют кожу, слизистые оболочки и раз-
множаются там, вызывая доброкачественные папилломы (ВПЧ 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 10, 27, 57, 60). ВПЧ 5 и 8 связаны с развитием некоторых (немеланомных) разновидностей рака кожи.
Различают низкоонкогенные ВПЧ, вызывающие бородавки. Существуют и высокоонкогенные ВПЧ, способные вызывать рак шейки матки (ВПЧ 16, 18, 31, 33, 35, 45, 51, 52, 58).
Источники инфекции: больной человек и вирусоноситель. Пути передачи: контактный, половой, интранатальный.
Клинические проявления: вульгарные (обыкновенные) бородавки (ПВЧ 1, 2, 4, 7) на руках, ногах, подошвенные бородавки, аногенитальные папилломы, кондиломы (ВПЧ 1, 2, 6, 10, 11 и т.д.).
Более высокая заболеваемость наблюдается в возрасте 18-30 лет. При респираторном рецидивирующем папилломатозе распространение папиллом возможно от полости носа до гортани и легких.
Онкогенные типы папилломавирусов (16,18 и др.) способным вызывать рак шейки матки.
Микробиологическая диагностика: ПЦР.
Специфическая профилактика: за рубежом разработана вакцина против высокоонкогенных типов ВПЧ (16, 18 и др.). С 2006 г. в России введена профилактика папилломавирусной инфекции для лиц женского пола, начиная с 11 лет.
17