2 курс / Микробиология 1 кафедра / Экзамен микробик / vse_metody_MIKROB

Заболевания, вызываемые клебсиеллами, представлены в таблице 2.

Язва при паховой гранулеме, вы-

званной K.granulomatis.

8

Микробиологическая диагностика клебсиеллезных инфекций.

1.Бактериологический метод (основной): посев на среду Эндо с последующей идентификацией выделенной культуры до вида и подвида.

2.Микроскопический метод: окраска по Бурри-Гинсу с целью выявления капсулы.

3.Молекулярно-биологический метод: ПЦР.

4.Цитологический метод (для диагностики склеромы): обнаружение гигантских клеток Микулича в срезах и отпечатках пораженных тканей. Клетки Микулича – это макрофаги, в вакуолизированной цитоплазме которых находятся фагоцитированные палочки склеромы.

5.Кишечный эубиоз и дисбиоз. Причины формирования кишечных дис-

биозов.

Кишечный эубиоз – это эволюционно сложившееся качественное (видо-

вое) и количественное соотношение симбионтной микрофлоры кишечника, поддерживающее гомеостаз здорового человека. Качественный и количественный состав микробиоты кишечника в норме представлен в Отраслевом стандарте «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника». ОСТ

915000.11.0004-2003, Приказ МЗ РФ № 231 от 09.06.2003 (табл. 3).

Таблица 3

Качественный и количественный состав основной микрофлоры толстого кишечника у здоровых людей (КОЕ/г фекалий)

Примечание: * – представители родов Klebsiella, Enterobacter, Hafnia, Serratia, Proteus, Morganella, Providencia, Citrobacter и др.; ** – Pseudomonas, Acinetobacter и др.

Кишечный дисбиоз – клинико-лабораторный синдром, характеризующий-

ся изменением качественного и/или количественного состава нормофлоры тол-

стого кишечника.

Этот синдром обычно вторичен, т.к. формируется на фоне какого-либо ос-

новного заболевания. Следовательно, тактика врача должна быть направлена на диагностику и лечение основного заболевания в сочетании с коррекцией дис-

биоза.

В официальной международной классификации болезней (МКБ-10) забо-

левания с названием «дисбактериоз» нет. За рубежом существует диагноз «син-

дром избыточного бактериального роста». Он ставится при обнаружении в 1 мл содержимого тонкой кишки >105 микроорганизмов и/или появлении в ней фло-

ры, характерной для толстой кишки.

Основные причины формирования кишечных дисбиозов:

1.Недоношенность, внутриутробное инфицирование, бактериальные вагинозы

убеременных женщин.

2.Позднее прикладывание ребенка к груди, раннее искусственное вскармлива-

ние, длительное пребывание в родильном роме, частые ОРВИ, аллергические заболевания; у взрослых – неправильный режим питания.

3.Патология желудочно-кишечного тракта микробной природы (кишечные ин-

фекции, вирусный гепатит и др.) и немикробной природы (хронический гаст-

10

рит, язвенная болезнь желудка, дисферментоз, заболевания печени, поджелу-

дочной железы).

4. Микробные заболевания других органов и тканей (сепсис, пневмония, гной-

ная хирургическая инфекция и др.).

5.Длительная антибиотико-, химио- и гормонотерапия.

6.Облучение, лучевая терапия, прием цитостатиков и иммунодепрессантов.

7.Длительное пребывание в стационарах различного профиля, интернатах и,

как следствие, колонизация (заселение) кишечника госпитальными штамма-

ми микроорганизмов (золотистый стафилококк, клебсиеллы, синегнойная па-

лочка и др.).

6. Микробиологическая диагностика кишечного дисбиоза. Принципы кор-

рекции.

Материал на исследование: фекалии.

Основной метод диагностики: бактериологический.

«Чтобы отличить так называемые временные вариации состава микробио-

ты от дисбиоза необходимо проведение 2-3-кратных исследований с интерва-

лом 1-2 дня» (цит. по Меньшикову В.В. «Методики клинических лабораторных исследований», 2009). Фекалии забирают в стерильный контейнер при помощи стерильной ложки, впаянной в крышку контейнера из средней или последней порции фекалий после естественной дефекации, у новорожденных – с пеленки или памперса. Материал необходимо доставить в лабораторию не позднее 2 ча-

сов от момента забора. Фекалии (1 г) помещают в стерильную пробирку с тиог-

ликолевым буфером, обеспечивающим оптимальные условия для сохранения анаэробов. Затем производят десятикратные разведения фекалий в этом буфере от 10-1 до 10-9. Из разведений производят высевы пипеткой по 0,1 мл на соот-

ветствующие питательные среды. После термостатирования производят макро-

и микроскопическое изучение выросших колоний, а также определяют количе-

ство микроорганизмов в 1 г фекалий.

11

Принципы коррекции кишечных дисбиозов.

I. Дието-, ферменто- и витаминотерапия – для регулирования процессов пищеварения и стимулирования реактивности организма.

II. Препараты для восстановления нормальной микробиоты (эубиоти-

ки).

III. Фаготерапия.

IV. Противогрибковые препараты.

V. Иммунотропные препараты.

Бактериотерапия.

1. Пробиотики – препараты на основе живых микроорганизмов. Их назна-

чают при значительном снижении количества резидентных микроорганизмов. К

пробиотикам относят:

а) монокомпонентные препараты из представителей резидентной ки-

шечной микрофлоры:

- бифидумбактерин – из одного или нескольких штаммов бифидобактерий

(для лечения детей и взрослых). Особенно показано применение бифидумбак-

терина детям первого года жизни.

Бифидобактерии:

▪ расщепляют молочный сахар до кислоты, и тем самым создают в кишеч-

нике кислую реакцию среды, что подавляет размножение гнилостных бактерий; ▪ улучшают всасывание кальция и витамина Д в кишечнике, что способст-

вует профилактике рахита у младенцев; ▪ участвует в энтеральном синтезе витаминов группы В, К и др.;

12

▪стимулируют иммунную систему организма.

-лактобактерин – из одного или нескольких штаммов лактобактерий;

- колибактерин – из штамма бактерий E.coli М-17. Назначают детям старше 6 месяцев и взрослым. Особенно эффективен при наличии значительно-

го количества лактозонегативных и гемолитических эшерихий, а также для ле-

чения постдизентерийных дисбактериозов, длительной диареи. Обладает выра-

женным антагонистическим действием.

б) комбинированные препараты пробиотиков: например, линекс из лак-

тобактерий и энтерококков; бификол из бифидобактерий и E.coli М-17.

в) препараты из напатогенных бацилл применяют для уменьшения из-

быточного роста микроорганизмов: бактисубтил содержит бактерии штамма

Bacillus cereus IP 5832 (109 спор). Препарат назначают при острой и хрониче-

13

ской диареи различного генеза (включая инфекционную), кишечном дисбакте-

риозе (особенно после лечения антибиотиками широкого спектра действия), эн-

терите, энтероколите; для профилактики и лечения нарушений функций ки-

шечника, вызванных химиоили радиотерапией.

2. Пребиотики – вещества, являющиеся питательным субстратом для нормальной флоры кишечника и стимулирующие ее рост и размножение: хи-

лак-форте, лактулоза и др. Эффективность действия пробиотиков значитель-

но усиливается при совместном применении с пребиотиками.

3. Синбиотики – комбинация про- и пребиотиков.

Фаготерапия.

Используют при значительном увеличении в кишечнике условно-

патогенных микроорганизмов. Назначение бактериофагов для лечения дисбио-

зов возможно только после предварительного определения чувствительности

выделенной культуры к соответствующему бактериофагу. Все бактериофаги назначают по инструкции, прилагаемой к препарату.

14

Стафилококковый бактериофаг применяют при дисбактериозах со зна-

чительным выделением из фекалий стафилококка (более 104 в 1 г). Назначают детям и взрослым.

Бактериофаг псевдомонас аэругиноза применяют при дисбактериозах,

обусловленных синегнойной палочкой. Назначают детям и взрослым.

Клебсиеллезный поливалентный бактериофаг и бактериофаг клебсиелл пневмонии применяют при увеличении количества клебсиелл.

Коли-протейный бактериофаг – смесь бактериофагов, активных в отно-

шении наиболее распространенных диареегенных эшерихий, а также протеев.

Пиобактериофаг содержит бактериофаги, активные в отношении стафи-

лококков, стрептококков, энтерококков, клебсиелл, эшерихий, протеев, синег-

нойной палочки.

Интестибактериофаг содержит бактериофаги, лизирующие шигеллы,

сальмонеллы, патогенные эшерихии, энтерококки, стафилококки, протей, си-

негнойную палочку.

Противогрибковые препараты: нистатин, флуконазол и др. применяют при грибковых (чаще кандидозных) дисбактериозах.

15

Иммунотропные препараты: комплексный иммуноглобулиновый препа-

рат (КИП) содержит иммуноглобулины человека, в основном IgА, IgМ, IgG

против патогенной и условно-патогенной микробиоты, эффективен при кор-

рекции дисбиоза кишечника, обусловленного условно-патогенной микрофло-

рой.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с предполагаемым диагнозом: кишечный эшерихиоз (коли-инфекция), вы-

званный EPEC. Учет и интерпретация результатов. I этап исследования:

Посев фекалий больного на среду Эндо. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370C.

II этап исследования:

1.Макроскопическое изучение характера роста на среде Эндо:

______________________________________________________________.

2.Отбор не менее 10 лактозопозитивных колоний для постановки реакции агглютинации. С целью обнаружения EPEC ставят ориентировочную реак-

цию агглютинации на стекле со смесью типоспецифических диагностиче-

ских ОВ-коли-сывороток (О55, О111). Колонию, которая агглютинируется смесью сывороток, пересевают на скошенный МПА для накопления чистой

культуры. Посевы ставят в термостат на 24 часа при t 370C.

III этап исследования:

Отмечают характер роста на скошенном МПА__________________________.

Проводят идентификацию выделенной культуры:

16

а) по биохимическим признакам с помощью энтеротест-систем. Посевы ставят в термостат на 18-24 часа при температуре 370C;

б) по антигенным признакам: постановка реакции агглютинации на стекле с каждой типовой коли-сывороткой, входящей в состав смеси (О55, О111). При положительной реакции с одной из типовых сывороток (например, О111)

производят постановку развернутой реакции агглютинации с этой сыворот-

кой в двух рядах пробирок (живая и кипяченая культуры). Исследуемая куль-

тура считается идентифицированной, если реакция положительна не менее чем до половины титра диагностической сыворотки с кипяченой культурой

(без К-антигена). Диагностический титр сыворотки указан на этикетке ампу-

лы.

IV этап исследования. Учет результатов.

1. Учет развернутой реакции агглютинации с сывороткой О111 (титр диагно-

стической сыворотки 1/3200).

Заключения о выделенном возбудителе.

2.Изучение характера роста представителей микробиоты кишечника на питательных средах.

3.Световая микроскопия (окраска по Граму) чистых культур представителей микрофлоры кишечника.

4.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с

предполагаемым диагнозом «кишечный дисбиоз». Интерпретация результа-

тов исследования. I этап исследования.

Фекалии (1 г) помещают в стерильную пробирку с 9 мл тиогликолевого буфера. Содержимое пробирки гомогенизируют и оставляют на 10-15 минут

при комнатной температуре для осаждения грубых частиц. Далее готовят деся-

17