2 курс / Микробиология 1 кафедра / Экзамен микробик / vse_metody_MIKROB

в) фаготипирование – проба с поливалентным дизентерийным фагом. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.

IV этап исследования.

Учет полученных результатов и выдача заключения о виде возбудителя.

16

Занятие №23

Тема. Микробиологическая характеристика холеры, псевдотуберкулеза, ки-

шечного иерсиниоза и пищевых отравлений микробной природы.

Цель занятия. Изучить характеристику и микробиологическую диагностику холеры, вибриозов, псевдотуберкулеза, кишечного иерсиниоза и пищевых от-

равлений микробной природы.

I.Теоретические знания:

1.Характеристика возбудителей холеры. Микробиологическая диагностика и специфическая профилактика холеры.

2.Микробиологическая характеристика вибриозов.

3.Характеристика возбудителей псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза.

Микробиологическая диагностика.

4.Этиологическая структура пищевых отравлений. Микробиологическая ди-

агностика пищевых отравлений бактериальной природы.

II. Практические навыки:

1. Световая микроскопия препаратов из чистых культур V.cholerae, окрашен-

ных по Граму.

2.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с клиническим диагнозом «холера». Учет и интерпретация результатов.

3.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с

предполагаемым диагнозом пищевая токсикоинфекция. Учет и интерпрета-

ция результатов.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1. Характеристика возбудителей холеры. Микробиологическая диагности-

ка и специфическая профилактика холеры.

Возбудителями холеры являются: Vibrio cholerae, Vibrio El-Tor (основной)

и Vibrio О-139 «Бенгал», относящиеся к семейству Vibrionaceae, роду Vibrio,

виду V.choleraе.

Морфология: грамотрицательные, слегка изогнутые в виде запятой палоч-

ки средних размеров, монотрихи, спор и капсул не образуют.

Культуральные свойства: облигатные аэробы, хорошо растут на щелоч-

ных средах (pH 8,5-9,0). В 1% пептонной воде через 6-8 часов образуют неж-

ную пленку. На щелочном агаре образуют гладкие прозрачные с голубоватым оттенком колонии.

Биохимические свойства: по классификации Хейберга, на основании способности ферментировать сахарозу, маннозу и арабинозу, представители рода Vibrio разделены на 8 групп. Возбудителей холеры относят к 1 группе Хейберга: расщепляют сахарозу и маннозу, не расщепляют арабинозу.

Антигенная структура:

О– соматический антиген (специфический);

Н– жгутиковый антиген (неспецифический).

По различию строения О-антигена представители вида Vibrio cholerae под-

разделяют на 206 серогрупп, среди которых возбудителями холеры являются

2

серогруппы О1 и О139«Бенгал». V.cholerae и V.El-Tor относят к О1 серогруппе.

Они представлены 3 сероварами: Огава, Инаба и Гикошима. Чаще холеру вы-

зывают серовары Инаба и Огава.

Несмотря на общность морфологических, культуральных, биохимических

иантигенных свойств, V.cholerae и V.El-Tor являются разными биологическими вариантами (биоварами), т.к. отличаются по некоторым биологическим (фено-

игенотипическим) свойствам. Серогруппа О1 (V.El-Tor) вызывает холерные пандемии с высокой смертностью в развивающихся странах. Серогруппа О139«Бенгал» вызывает холероподобные заболевания.

Факторы патогенности возбудителей холеры:

1.Адгезины – pili для прикрепления к энтероцитам.

2.Нейраминидаза способствует прикреплению фракции В холерного эк-

зотоксина к рецепторам энтероцитов.

3.Экзоэнтеротоксин – белок, состоящий из двух субъединиц: А и В.

Субъединица В взаимодействует с рецепторами энтероцитов и обусловливает проникновение в них субъединицы А. А-субъединица – собственно токсиче-

ская, активирует аденилатциклазу, что приводит к увеличению цАМФ, гипер-

секреции солей и воды в просвет кишечника. Развивается диарея, сопровож-

дающаяся резким обезвоживанием организма.

Холера – особо опасное инфекционное заболевание.

Источники инфекции: больной человек или вибрионоситель.

Путь заражения: алиментарный при употреблении инфицированной воды или пищевых продуктов.

Микробиологические и эпидемиологические особенности современной

холеры (Информационный бюллетень ВОЗ, 2014 г.):

1.Основной возбудитель (95-99%) V.El-Tor (серогруппы О1).

2.Антисанитарные условия окружающей среды в эндемичных районах и мес-

тах поселения мигрантов, беженцев и др., где не удовлетворяются потребно-

сти в чистой воде и средствах гигиены.

3.Последствия технических катастроф с разрушением систем водоснабжения.

3

4.Высокая скорость распространения заболевания (обусловлена скоростными транспортными средствами).

5.Значительный процент вибрионосительства в эндемичных очагах (Юго-

Восточная Азия, Африка, Латинская Америка) с легким клиническим тече-

нием холеры.

Клиническая картина заболевания: основными клиническими формами заболевания является холерный энтерит и гастроэнтерит. Первым клинически выраженным признаком является диарея. Частота стула от 3-10 раз (при легких формах) до 200-300 раз в сутки (при тяжелых формах). Может быть обильная рвота фонтаном, не сопровождающаяся тошнотой. Потеря жидкости без лече-

ния может достигать до 10-15% от массы тела больного и приводит к резкому нарушению водно-электролитного баланса организма. В результате возникает

холерный алгид – клиническая форма, которая характеризуется снижением тургора кожи, нарушением функции сердечно-сосудистой, дыхательной и мо-

чевыделительной системы, падением температуры тела ниже нормы. Отсюда название этой формы заболевания от лат. algidus – холодный.

Материал на исследование: испражнения и рвотные массы.

Микробиологическая диагностика холеры.

1. Бактериологический метод (основной): посев исследуемого материала

на 1% пептонную воду и щелочной агар.

Идентификация выделенной культуры:

1)по морфологическим признакам;

2)по культуральным и биохимическим признакам;

3)по антигенным признакам: постановка ориентировочной РА на стекле, а за-

тем развернутой РА (в пробирках) с О1-холерной сывороткой, сыворотками Инаба, Огава и О-139;

4) для дифференциации V.cholerae от V.El-Tor и V.О-139 «Бенгал» проводят фа-

готипирование и посев исследуемой культуры на среду с полимиксином.

2. Экспресс – диагностика:

РИФ (прямая);

4

реакция иммобилизации вибрионов (РИВ) – утрата подвижности возбудите-

лей в присутствии диагностических сывороток (О1 или О139).

3. Молекулярно-биологический: ПЦР (для определения гена, кодирую-

щего синтез экзоэнтеротоксина).

Лечение холеры основано на восстановлении водно-солевого баланса с незамедлительным введением специальных солевых растворов и антибиотико-

терапии.

Специфическая профилактика холеры: вакцины пероральные, содер-

жащие убитые холерные вибрионы О1 серогруппы.

2. Микробиологическая характеристика вибриозов.

Вибриозы – это заболевания, вызываемые представителями рода Vibrio.

Возбудителями вибриозов являются вибрионы различных серогрупп (кроме О1

и О139), а также галофильные вибрионы (12 видов), обитающие в морской во-

де. Название этих микробов отражает их способность размножаться только в присутствии высокой концентрации NaCl (hals – соль, philus – любить).

Из галофильных вибрионов наибольшее медицинское значение имеют

V.parahaemolyticus и V.vulnificus.

Источники инфекции: морские гидробионты (моллюски, крабы, рыбы,

устрицы).

Пути заражения: алиментарный – при употреблении сырых или слабо термически обработанных гидробионтов, контактный – при попадании в рану

инфицированной морской воды.

5

Клинические формы заболевания:

1.Гастроэнтериты (возбудитель V.parahaemolyticus).

2.Сепсис (возбудитель V.vulnificus).

3.Раневая инфекция (возбудитель V.vulnificus).

Основной метод диагностики вибриозов: бактериологический.

3. Характеристика возбудителей псевдотуберкулеза и кишечного иерси-

ниоза. Микробиологическая диагностика.

В семействе энтеробактерий к роду Yersinia относят 15 видов, из них пато-

генны для человека 3 вида: Y.pestis (см. учебно-методическое пособие «Пато-

генные кокки и грамотрицательные бактерии. Возбудители зоонозов»),

Y.pseudotuberculosis и Y.enterocolitica.

Возбудители псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза

Морфология: мелкие, грамотрицательные палочки с биполярным окра-

шиванием, перитрихи, в организме образуют капсулу.

Чистая культура иерсиний.

Культуральные свойства: температурный оптимум 280С; хорошо растут на простых питательных средах и среде Эндо.

Антигенная структура:

О-антиген;

Н-антиген.

Факторы патогенности:

1. Адгезины (pili, белок наружной мембраны);

6

2.Капсула;

3.Инвазины (белки, обеспечивающие трансцитоз через слизистую кишеч-

ника);

4.Цитотоксин, энтеротоксин;

5.Плазмиды (кодируют адгезивные и инвазивные свойства).

Y.pseudotuberculosis – возбудитель псевдотуберкулеза.

Источники инфекции: грызуны, дикие и домашние животные, птицы,

выделяющие микроорганизмы с испражнениями. Возбудители накапливаются в почве и воде.

Путь заражения: алиментарный – через овощи и воду. В овощах (мор-

ковь, капуста, зеленый лук) иерсинии размножаются и накапливаются даже в условиях хранения при температуре +40С. Характерны сезонные подъемы забо-

леваемости (февраль-март).

Клиника: острый гастроэнтерит, брыжеечный лимфаденит (псевдоаппен-

дицит), артриты.

Y.enterocolitica – возбудитель кишечного иерсиниоза.

Источники инфекции: домашние (свиньи и др.) и дикие животные, гры-

зуны, больной человек.

Путь заражения: алиментарный – через мясо, молоко, воду.

Y.enterocolitica может быть причиной внутрибольничной инфекции.

Клиника: энтероколит с продолжительной диареей (до нескольких меся-

цев), возможно развитие сепсиса, артрита.

Материал на исследование: фекалии, кровь, суставная жидкость.

Микробиологическая диагностика.

1.Молекулярно-биологический метод: ПЦР.

2.Бактериологический метод.

7

3.Серологический метод имеет значение для эпидемиологической рас-

шифровки заболеваемости, т.к. антитела в диагностически значимых количествах появляются у больных на 2-й неделе заболевания.

4. Этиологическая структура пищевых отравлений. Микробиологическая

диагностика пищевых отравлений бактериальной природы.

Пищевые отравления – острые кишечные инфекции. Для их возникнове-

ния необходимым условием является предварительное попадание, размножение и накопление микроорганизмов в пищевых продуктах. К возбудителям относят обширную группу грамотрицательных бактерий (энтеробактерии, вибрионы,

кампилобактерии и др.), а также представителей грампозитивной микрофлоры

(стафилококки, бациллы, клостридии и др.).

Характерные признаки пищевых отравлений:

1)больной человек не является источником инфекции для окружающих;

2)короткий инкубационный период, острое начало;

3)короткое течение с преимущественным поражением желудочно-

кишечного тракта (за исключением ботулизма) и соответствующими симптомами заболевания: тошнота, рвота, резкие боли в животе, диарея;

4)групповой характер заболевания;

Пищевые отравления микробной природы подразделяются:

1.Пищевые токсикоинфекции – возникают в результате размножения и на-

копления бактерий в пищевых продуктах. Важным условием развития кли-

ники пищевого отравления является массивная обсемененность пищевых продуктов микроорганизмами (более 105 КОЕ в 1 г или 1 мл). Возбудителями заболеваний являются различные виды условно-патогенных энтеробактерий

(кишечные палочки, протеи, сальмонеллы, кроме возбудителей брюшного тифа и паратифов), галофильные вибрионы, энтерококки и др.

8

2.Пищевые интоксикации – при накоплении в пищевых продуктах экзоток-

синов бактерий (S.aureus, C.botulinum, C.perfringens и др.) и микотоксинов микроскопических грибов (Aspergillus, Fusarium и др.).

3.Смешанные пищевые отравления.

Материал на исследование: промывные воды желудка, рвотные массы,

фекалии, остатки пищевых продуктов (для эпидемиологического расследова-

ния).

Микробиологическая диагностика: бактериологический метод.

При подозрении на пищевую интоксикацию необходимо определение со-

ответствующего экзотоксина.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1.Световая микроскопия препаратов из чистых культур V.cholerae, окрашенных по Граму.

2.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с

клиническим диагнозом холера при круглосуточном режиме работы лаборатории.

I этап исследования.

Посев фекалий больного на 1% пептонную воду (1-й пептон) и щелочной агар. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.

II этап исследования (через 6 часов).

При наличии возбудителя в исследуемом материале, в 1-м пептоне образуется нежная пленка. Пересев с 1-го пептона на 2-й пептон и щелочной агар. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.

III этап исследования (через 6 часов).

Пересев со 2-го пептона на щелочной агар. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.

IV этап исследования.

9