17. Опсонины. Реакция опсонизации. Роль комплемента в хемотаксисе, опсонизации микробов. Опсонический индекс. Реакция иммобилизации микробов.

Опсонины обволакивают микроорганизмы и существенно ограничивают их подвиж­ность. Опсонины делают поглощение более эффективным, что связано со стабильностью взаи­модействий опсонинов с соответствующими рецепторами на мембране фагоцита. Отсутствие этих ре­цепторов приводит к резкому снижению функциональной активности фагоцитов.

Опсонинами называют антитела нормальных и иммунных сывороток, изменяющие микроорганизмы и подготавливающие их к более интенсивному фагоцитированию. Под влиянием опсонинов происходит изменение поверхности микробных тел, в частности их электрического потенциала, вследствие чего они легко подвергаются фагоцитозу.

Опсоно-фагоцитарная реакция – способ оценки активности действия опсонинов сыворотки на эффективность фагоцитоза бактерий или других корпускулярных антигенов, обработанных этой сывороткой. Для определения опсоно-фагоцитарного индекса готовят и окрашивают мазок из смеси исследуемой крови с бактериями. Под микроскопом в нем просматривается 25 фагоцитов, и каждый из них в зависимости от числа поглощенных ими бактерий относят к определенной группе.

Степень активности опсонинов принято выражать опсоническим индексом, который представляет собой отношение фагоцитарного показателя иммунной сыворотки к фагоцитарному показателю нормальной сыворотки. Фагоцитарным показателем называется числа микробов, поглощенных 100 фагоцитами, на число фагоцитов. Показатель опсонического индекса должен быть больше 1.

Система комплемента может действовать:

• через хемотаксис: различные компоненты комплемента могут привлекать иммунные клетки, которые атакуют бактерии и пожирают их;

• через опсонизацию: компоненты комплемента присоединяются к бактерии, в результате чего образуется метка для узнавания фагоцитирующими клетками, имеющими рецепторы к компонентам комплемента.

Реакция иммобилизации (РИ)

Способность иммунной сыворотки вызывать иммобилизацию подвижных микроорганизмов связана со специфическими антителами, которые проявляют свое действие в присутствии комплемента. Иммобилизирующие антитела обнаружены при сифилисе, холере и некоторых других инфекционных заболеваниях.

Это послужило основанием для разработки реакции иммобилизации трепонем, которая по своей чувствительности и специфичности превосходит другие серологические реакции, используемые при лабораторной диагностике сифилиса.

18. Реакция нейтрализации вирусов, реакция гемагглютинации, реакция торможения гемагглютинации; гемадсорбция, задержки гемадсорбции.

PH вирусов. В сыворотке крови переболевших лиц циркулируют АТ, нейтрализу­ющие вирусы. Их наличие выявляют смешиванием культуры возбудителя с сывороткой с последую­щим введением лабораторному животному или заражением культуры клеток. На эффективность нейтрализации указывает выживание животного либо отсутствие гибели клеток в культурах.

PH токсинов применяется для идентифи­кации бактериальных экзотоксинов по видовой и типовой их принадлежности, а также для определения содержания антитоксинов в ис­следуемой сыворотке. Принцип основан на способности антитоксинов связывать токсин и блокировать его действие. Для идентификации токсина и определения титра антитоксических АТ их смесь вводят лабораторным животным.

При соответствии типа токсина и антисыво­ротки гибели животных не наблюдают. Нейт­рализацию токсинов in vitro определяют в реакции флоккуляции. Для определения антитокси­ческого иммунитета у человека часто применяют кожные пробы (например, пробу Шика).

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА). принцип реакции основан на способности АТ связывать различные вирусы и нейтрализовать их, лишая возможности агглютинировать эритроциты. Ви­зуально этот эффект и проявляется в «торможении» гемагглютинации. РТГА применяют при диагностике вирусных инфекций для выявления специфических антигемагглютининов и иденти­фикации различных вирусов по их гемагглютининам, проявляющим свойства Аг.

В основе реакции прямой гемагглютинации лежит способность эритроцитов склеиваться при адсорбции на них определенных антигенов. Поскольку это происходит без участия иммунной сыворотки, реакция не является серологической.

Реакция прямой гемагглютинации (РПГА) используется для выявления поверхностных антигенов микроорганизмов и эритроцитов, а также антител к ним. К стандартным сывороткам, содержащим антитела, добавляют исследуемый материал (кровь).

Реакция гемадсорбции (Ргад) ставится на культурах ткани при некоторых вирусных болезнях с целью обнаружения вируса в клетках зараженных культур ткани на ранних стадиях размножения вируса, то есть до появления цитопатогенного действия. По своей сущности эта реакция не является серологической и основана на способности зараженных вирусом клеток культуры ткани адсорбировать на себе эритроциты.

Для постановки РГад используют зараженные вирусом культуры ткани в пробирках. В пробирки с культурой ткани, зараженной вирусом, не удаляя поддерживающую среду, вносят 0,2 мл 0,5% взвеси эритроцитов. После этого пробирки оставляют в наклонном положении под углом в 7-10° на 10-15 минут и по истечению этого времени просматривают под микроскопом. При постановке реакции во втором варианте из пробирок с зараженной культурой ткани предварительно сливают культуральную жидкость, затем вносят 0,2 мл 0,5% взвеси эритроцитов, пробирки оставляют в наклонном положении на 10-15 минут, затем культуру ткани промывают физиологическим раствором и смотрят под микроскопом. При положительной реакции эритроциты адсорбируются на зараженных клетках и хорошо видны в форме гроздьев или беспорядочных скоплений. Если клетки не инфицированы вирусом, то на них эритроциты не адсорбируются и свободно плавают в культуральной жидкости (в первом варианте) или смываются при промывании физраствором и не видны (во втором варианте).

Реакция задержки гемадсорбции. В основе этой серологической реакции задержки гемадсорбции (РЗГад) лежит способность специфической иммунной сыворотки нейтрализовать гемадсорбирующие свойства клеток культуры ткани, зараженных вирусом. С помощью РЗГад можно идентифицировать вирус по известной иммунной сыворотке или выявлять антитела в исследуемых сыворотках крови по известному антигену (вирусу).

Для постановки реакции из зараженных пробирок с культурой ткани сливают поддерживающую среду и культуру ткани промывают раствором Хенкса, затем в пробирки вносят по 0,2 мл специфической иммунной сыворотки и 0,8 мл раствора Хенкса (в контрольные пробирки вносят только раствор Хенкса без добавления сыворотки). Сыворотку с зараженной культурой ткани выдеживают в термостате или при комнатной температуре 40-60 минут и затем в пробирки вносят по 0,2 мл 0,5% взвеси эритроцитов, оставляют на 10-15 минут и просматривают под микроскопом.