Лабораторная диагностика возбудителей анаэробных инфекций

Материал для исследования:

• возбудитель столбняка-кусочки пораженных тканей, экссудат, перевязочный материал, инородное тело, выделения из пупочного канатика.

• возбудитель ботулизма-промывные воды желудка, испражнения, моча, рвотные массы, остатки пищи.

• возбудитель газовой гангрены -кусочки пораженный тканей, отечная жидкость, перевязочный материал, почва, испражнения, продукты.

Бактериоскопический метод

Из исследуемого материала делают мазок, окашивают по Граму, обнаруживают Грам+ палочки.

Если материал был взят из внешней среды, то применяют окраску по Цилю-Нильсену (выявление спор: возбудитель столбняка - круглые, реже овальные, терминальные, напоминают «барабанные палочки;

возбудитель ботулизма - располагаются субтерминально, вид теннисной ракетки;

возбудитель газовой гангрены - споры овальные, располагаются чаще центрально). Для выявления С. perfringensмазок окрашивают по Бурри-Гинсу(выявление капсул).

Бактериологический метод (основной)

Изначально делают посев материала на прогретую на водяной бане в течение 30 минут при 85ºС (чтобы растворить кислород и убрать вегетативные форы сопутствующей микрофлоры) среду Китта-Тароцци, заливают маслом, повторно кипятят и инкубируют от 20 минут до 3-5 часов.

Китта-Тароцци (помутнение, газообразование, возможно растворение кусочков паренхиматозных органов).

Делаем пересев на какую-нибудь плотную среду:

— Вильсона-Блера (почернение среды, колонии в виде «маковых зерен»),

— Цейсслера — кровяно-сахарный агар (сероватые колонии в виде «паучков», окруженные зоной гемолиза),

—Высокий столбик сахарного агара (S-форма - в виде зерен чечевицы, R-форма — в виде пушинок),

—Железосульфитный агар.

Получаем выросшую культуру. Затем выделяем чистую культуры, накапливаем на среде Китта-Тароцци. Чистая культура выделяется и накапливается на жидкой питательной среде, потому что среду Китта-Тароццци можно профильтровать и процентрифугировать. Полученный осадок используют для микроскопии. Надосадочную жидкость - для постановки реакции нейтрализации на белых мышах.

Реакция нейтрализации:

Одной мышке вводим порцию надосадочной жидкости в нативном состоянии, второй мышке вводим часть надосадочной жидкости, смешанной со специфической анатотоксическойсывороткой, предварительно выдержанной в термостате в течение 30-60 минут. Первая мышка обязательно погибает, так как ей ввели экзотоксин, вторая мышка выживает, потому что мы ввели ей экзотоксин,смешанныйсо специфической анатотоксической сывороткой, и произошла реакция нейтрализации. Особенно широко применяется для выявления ботулизма, а именно для выявлениятипаботулотоксина: одной мышке вводят часть надосадочной жидкости, смешанной с антисывороткой типа А, второй –смешанной сантисывороткой типа В, третьей смешанной с антисывороткойтипа Е, четвертой только нативнуюнадосадочную жидкость. Последняя мышка точно погибнет, из других может кто-то выживет.

18