Вопрос 54 Общие методы изолирования ядовитых веществ полярными растворителями. Привести принципиальную схему изолированиям по методу Карташова.

Метод Карташова (изолирование нейтральным ацетоном):

Ацетон – амфифильный растворитель, который способен смешиваться как с водой, так и с липидами.

1 этап твердо-жидкостная экстракция:

• 5г гомогенизированного биоматериала четырехкратно извлекают ацетоном последовательно: 10; 5; 5; 5 мл с помощью аппарата для встряхивания, каждый раз по 5 мин;

• Центрифугирование пробы при 2500 об/мин в течение 5 мин;

• Ацетоводный экстракт смешивают с 4г высушенного K₂CO₃. Ацетоновый слой отделяют, добавляют 20 мл 0,5 М р-ра HCl и 10 мл н-гексана, встряхивают.

• Органич. фазу, содержащую гидрофобные примеси, отбрасывают.

2 этап жидкость-жидкостная экстракция:

• Водную фазу экстрагируют эфиром, эфир испаряют и анализируют на в-ва кислотного хар-ра;

• Оставшийся водный раствор подщелачивают 25% р-ром NH₄OH до рН=9-10, добавляют 3г NaCl (для высалив. эффекта) и экстрагируют диэтиловым эфиром. Эфир испаряют и остаток исследуют на в-ва основного хар-ра.

Достоинства:

1. Способ позволяет получать достаточно чистые экстракты.

2. В процессе гомогенной экстракции анализируемые в-ва практически не теряются. При реэкстракции потери в-в не превышают 5-6%.

3. Высокий выход в-в позволяет уменьшить массу навески до 5 г, что упрощает операции и снижает расход реактивов и времени пробоподготовки.

Недостатки: многостадийность.

Вопрос 55. Частные методы изолирования ядовитых веществ поярными растворителями. Привести принципиальную схему изолирования по методу Крамаренко.

Метод Крамаренко – изолирование алкалоидов водой, подкисл. Н₂SO₄

1 этап твердо-жидкостная экстракция:

• Настаивание 100 г измельченного объекта с водой, подкисленной 20% р-ром Н₂SO₄ до рН=2-3, в течение 2х часов, затем 1 часа. Объединение, центрифугирование;

• Очистка водного извлечения от белков насыщением (NH₄)₂SO₄, настаивают 1 час и фильтруют/центрифугируют образовавшийся осадок;

• Очистка фильтрата от жиров, смол, пигментов экстрагированием эфиром. Эфирное извлечение отбрасывают;

2 этап жидкость-жидкостная экстракция:

• Подщелачивание водного извлечения 20% р-ром NaOH и экстрагирование в-в основного хар-ра хлороформом при рН=8,5-9 (четырехкратная экстракция);

• Отделение органич. фазы и концентрирование получ. извлечения упариванием.

Достоинства:

1. Быстрота;

2. Хорошая очистка от соэкстрактивных в-в.

Недостатки:

1. Потеря искомых в-в из-за соэкстракции на стадии очистки;

2. Специфичность.

Вопрос 56 Частные методы изолирования ядовитых веществ полярными растворителями. Привести принципиальные схемы изолирования по методам Валова, Поповой.

Метод Валова – изолирование барбитуратов и салицилатов подщелоченной водой:

1 этап твердо-жидкостная экстракция:

• Настаивание 100 г измельченного объекта с водой, подщелоч. 20% р-ром NaOH до рН=10, в течение 30 минут. Центрифугирование;

• Очистка водного извлечения путем насыщения вольфраматом натрия (Na₂WO₃) в кислой среде H₂SO₄, рН=2, нагревание, фильтрование/центрифугирование р-ра;

2 этап жидкость-жидкостная экстракция:

• Экстрагирование диэтиловым эфиром при рН=2. Реэкстракция водным р-ром NaOH при рН=9-10. Повторная экстракция диэтиловым эфиром при рН=2, концентрирование эфирного извлечения упариванием.

Достоинства:

• Метод дает достаточно чистые извлечения, т.к. включает стадию очистки (осаждение белков вольфраматом натрия);

• Позволяет выделить 50-90% барбитуратов.

Недостатки: соосаждение барбитуратов белками при обработке вольфраматом натрия.

Метод Поповой (для барбитуратов):

1 этап твердо-жидкостная экстракция:

• 100 г измельченного объекта заливают 80 мл 0,02 М р-ра H₂SO₄ до рН=2-3 и настаивают 3 раза: 2 ч, 1 ч и 1 ч. Водную вытяжку процеживают через тройной слой марли и центрифугируют 25-30 мин при 3000 об/мин;

• Надосадочную жидкость отделяют и очищают с помощью гель-хроматографии (гель сефадекс G-25);

• Барбитураты с колонки элюируют 0,02 М р-ром H₂SO₄ (сначала водой промывают, потом уже кислотой);

2 этап жидкость-жидкостная экстракция:

• Элюат концентрируют путем повторной экстракции хлороформом или диэтиловым эфиром.

Достоинства:

• Хорошая очистка извлечений;

• Применим при исследовании объектов, подвергшихся гнилостным изменениям.

Недостатки: специфичность (исп-ся для изолирования ограниченного числа в-в, в частности, барбитуратов).