metodichka_6
.pdfсерогруппы О1 и О139«Бенгал». V.cholerae и V.El-Tor относят к О1 серогруппе.
Они представлены 3 сероварами: Огава, Инаба и Гикошима. Чаще холеру вы-
зывают серовары Инаба и Огава.
Несмотря на общность морфологических, культуральных, биохимических
иантигенных свойств, V.cholerae и V.El-Tor являются разными биологическими вариантами (биоварами), т.к. отличаются по некоторым биологическим (фено-
игенотипическим) свойствам. Серогруппа О1 (V.El-Tor) вызывает холерные пандемии с высокой смертностью в развивающихся странах. Серогруппа О139«Бенгал» вызывает холероподобные заболевания.
Факторы патогенности возбудителей холеры:
1.Адгезины – pili для прикрепления к энтероцитам.
2.Нейраминидаза способствует прикреплению фракции В холерного эк-
зотоксина к рецепторам энтероцитов.
3.Экзоэнтеротоксин – белок, состоящий из двух субъединиц: А и В.
Субъединица В взаимодействует с рецепторами энтероцитов и обусловливает проникновение в них субъединицы А. А-субъединица – собственно токсиче-
ская, активирует аденилатциклазу, что приводит к увеличению цАМФ, гипер-
секреции солей и воды в просвет кишечника. Развивается диарея, сопровож-
дающаяся резким обезвоживанием организма.
Холера – особо опасное инфекционное заболевание.
Источники инфекции: больной человек или вибрионоситель.
Путь заражения: алиментарный при употреблении инфицированной воды или пищевых продуктов.
Микробиологические и эпидемиологические особенности современной
холеры (Информационный бюллетень ВОЗ, 2014 г.):
1.Основной возбудитель (95-99%) V.El-Tor (серогруппы О1).
2.Антисанитарные условия окружающей среды в эндемичных районах и мес-
тах поселения мигрантов, беженцев и др., где не удовлетворяются потребно-
сти в чистой воде и средствах гигиены.
3.Последствия технических катастроф с разрушением систем водоснабжения.
3
4.Высокая скорость распространения заболевания (обусловлена скоростными транспортными средствами).
5.Значительный процент вибрионосительства в эндемичных очагах (Юго-
Восточная Азия, Африка, Латинская Америка) с легким клиническим тече-
нием холеры.
Клиническая картина заболевания: основными клиническими формами заболевания является холерный энтерит и гастроэнтерит. Первым клинически выраженным признаком является диарея. Частота стула от 3-10 раз (при легких формах) до 200-300 раз в сутки (при тяжелых формах). Может быть обильная рвота фонтаном, не сопровождающаяся тошнотой. Потеря жидкости без лече-
ния может достигать до 10-15% от массы тела больного и приводит к резкому нарушению водно-электролитного баланса организма. В результате возникает
холерный алгид – клиническая форма, которая характеризуется снижением тургора кожи, нарушением функции сердечно-сосудистой, дыхательной и мо-
чевыделительной системы, падением температуры тела ниже нормы. Отсюда название этой формы заболевания от лат. algidus – холодный.
Материал на исследование: испражнения и рвотные массы.
Микробиологическая диагностика холеры.
1. Бактериологический метод (основной): посев исследуемого материала
на 1% пептонную воду и щелочной агар.
Идентификация выделенной культуры:
1)по морфологическим признакам;
2)по культуральным и биохимическим признакам;
3)по антигенным признакам: постановка ориентировочной РА на стекле, а за-
тем развернутой РА (в пробирках) с О1-холерной сывороткой, сыворотками Инаба, Огава и О-139;
4) для дифференциации V.cholerae от V.El-Tor и V.О-139 «Бенгал» проводят фа-
готипирование и посев исследуемой культуры на среду с полимиксином.
2. Экспресс – диагностика:
РИФ (прямая);
4
реакция иммобилизации вибрионов (РИВ) – утрата подвижности возбудите-
лей в присутствии диагностических сывороток (О1 или О139).
3. Молекулярно-биологический: ПЦР (для определения гена, кодирую-
щего синтез экзоэнтеротоксина).
Лечение холеры основано на восстановлении водно-солевого баланса с незамедлительным введением специальных солевых растворов и антибиотико-
терапии.
Специфическая профилактика холеры: вакцины пероральные, содер-
жащие убитые холерные вибрионы О1 серогруппы.
2. Микробиологическая характеристика вибриозов.
Вибриозы – это заболевания, вызываемые представителями рода Vibrio.
Возбудителями вибриозов являются вибрионы различных серогрупп (кроме О1
и О139), а также галофильные вибрионы (12 видов), обитающие в морской во-
де. Название этих микробов отражает их способность размножаться только в присутствии высокой концентрации NaCl (hals – соль, philus – любить).
Из галофильных вибрионов наибольшее медицинское значение имеют
V.parahaemolyticus и V.vulnificus.
Источники инфекции: морские гидробионты (моллюски, крабы, рыбы,
устрицы).
Пути заражения: алиментарный – при употреблении сырых или слабо термически обработанных гидробионтов, контактный – при попадании в рану
инфицированной морской воды.
5
Клинические формы заболевания:
1.Гастроэнтериты (возбудитель V.parahaemolyticus).
2.Сепсис (возбудитель V.vulnificus).
3.Раневая инфекция (возбудитель V.vulnificus).
Основной метод диагностики вибриозов: бактериологический.
3. Характеристика возбудителей псевдотуберкулеза и кишечного иерси-
ниоза. Микробиологическая диагностика.
В семействе энтеробактерий к роду Yersinia относят 15 видов, из них пато-
генны для человека 3 вида: Y.pestis (см. учебно-методическое пособие «Пато-
генные кокки и грамотрицательные бактерии. Возбудители зоонозов»),
Y.pseudotuberculosis и Y.enterocolitica.
Возбудители псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза
Морфология: мелкие, грамотрицательные палочки с биполярным окра-
шиванием, перитрихи, в организме образуют капсулу.
Чистая культура иерсиний.
Культуральные свойства: температурный оптимум 280С; хорошо растут на простых питательных средах и среде Эндо.
Антигенная структура:
О-антиген;
Н-антиген.
Факторы патогенности:
1. Адгезины (pili, белок наружной мембраны);
6
2.Капсула;
3.Инвазины (белки, обеспечивающие трансцитоз через слизистую кишеч-
ника);
4.Цитотоксин, энтеротоксин;
5.Плазмиды (кодируют адгезивные и инвазивные свойства).
Y.pseudotuberculosis – возбудитель псевдотуберкулеза.
Источники инфекции: грызуны, дикие и домашние животные, птицы,
выделяющие микроорганизмы с испражнениями. Возбудители накапливаются в почве и воде.
Путь заражения: алиментарный – через овощи и воду. В овощах (мор-
ковь, капуста, зеленый лук) иерсинии размножаются и накапливаются даже в условиях хранения при температуре +40С. Характерны сезонные подъемы забо-
леваемости (февраль-март).
Клиника: острый гастроэнтерит, брыжеечный лимфаденит (псевдоаппен-
дицит), артриты.
Y.enterocolitica – возбудитель кишечного иерсиниоза.
Источники инфекции: домашние (свиньи и др.) и дикие животные, гры-
зуны, больной человек.
Путь заражения: алиментарный – через мясо, молоко, воду.
Y.enterocolitica может быть причиной внутрибольничной инфекции.
Клиника: энтероколит с продолжительной диареей (до нескольких меся-
цев), возможно развитие сепсиса, артрита.
Материал на исследование: фекалии, кровь, суставная жидкость.
Микробиологическая диагностика.
1.Молекулярно-биологический метод: ПЦР.
2.Бактериологический метод.
7
3.Серологический метод имеет значение для эпидемиологической рас-
шифровки заболеваемости, т.к. антитела в диагностически значимых количествах появляются у больных на 2-й неделе заболевания.
4. Этиологическая структура пищевых отравлений. Микробиологическая
диагностика пищевых отравлений бактериальной природы.
Пищевые отравления – острые кишечные инфекции. Для их возникнове-
ния необходимым условием является предварительное попадание, размножение и накопление микроорганизмов в пищевых продуктах. К возбудителям относят обширную группу грамотрицательных бактерий (энтеробактерии, вибрионы,
кампилобактерии и др.), а также представителей грампозитивной микрофлоры
(стафилококки, бациллы, клостридии и др.).
Характерные признаки пищевых отравлений:
1)больной человек не является источником инфекции для окружающих;
2)короткий инкубационный период, острое начало;
3)короткое течение с преимущественным поражением желудочно-
кишечного тракта (за исключением ботулизма) и соответствующими симптомами заболевания: тошнота, рвота, резкие боли в животе, диарея;
4)групповой характер заболевания;
Пищевые отравления микробной природы подразделяются:
1.Пищевые токсикоинфекции – возникают в результате размножения и на-
копления бактерий в пищевых продуктах. Важным условием развития кли-
ники пищевого отравления является массивная обсемененность пищевых продуктов микроорганизмами (более 105 КОЕ в 1 г или 1 мл). Возбудителями заболеваний являются различные виды условно-патогенных энтеробактерий
(кишечные палочки, протеи, сальмонеллы, кроме возбудителей брюшного тифа и паратифов), галофильные вибрионы, энтерококки и др.
8
2.Пищевые интоксикации – при накоплении в пищевых продуктах экзоток-
синов бактерий (S.aureus, C.botulinum, C.perfringens и др.) и микотоксинов микроскопических грибов (Aspergillus, Fusarium и др.).
3.Смешанные пищевые отравления.
Материал на исследование: промывные воды желудка, рвотные массы,
фекалии, остатки пищевых продуктов (для эпидемиологического расследова-
ния).
Микробиологическая диагностика: бактериологический метод.
При подозрении на пищевую интоксикацию необходимо определение со-
ответствующего экзотоксина.
ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА
1.Световая микроскопия препаратов из чистых культур V.cholerae, окрашенных по Граму.
2.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с
клиническим диагнозом холера при круглосуточном режиме работы лаборатории.
I этап исследования.
Посев фекалий больного на 1% пептонную воду (1-й пептон) и щелочной агар. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.
II этап исследования (через 6 часов).
При наличии возбудителя в исследуемом материале, в 1-м пептоне образуется нежная пленка. Пересев с 1-го пептона на 2-й пептон и щелочной агар. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.
III этап исследования (через 6 часов).
Пересев со 2-го пептона на щелочной агар. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.
IV этап исследования.
9
Изучение характера роста на щелочном агаре _______________________. Из части подозрительной колонии готовят мазки с окраской по Граму и производят постановку ориентировочной реакции агглютинации на стекле с О1холерной и О-139 диагностическими сыворотками. Оставшуюся часть подозрительной колонии пересевают на скошенный щелочной агар с целью выделения чистой культуры. Посевы ставят в термостат при температуре 370С на 24 часа.
V этап исследования.
Учет характера роста на скошенном щелочном агаре _________________. Идентификация выделенной культуры:
а) по антигенным признакам – постановка и учет реакции агглютинации на стекле с О1-холерной сывороткой и сыворотками Инаба и Огава
_____________. Постановка развернутой реакции агглютинации с О1-холерной сывороткой и сывороткой Ина-
ба____________________________________________________ ;
б) по биохимическим признакам – посев на среды с сахарозой, маннозой,
арабинозой;
в) дифференциацию V.cholerae от V.El-Tor проводят по чувствительности к холерным фагам и полимиксину. Для выбора правильной антибиотикотерапии определяют чувствительность выделенной культуры к антибиотикам диско-
диффузионным методом. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.
VI этап исследования. Учет результатов.
1. |
Учет биохимических свойств. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Сахароза |
|
|
Манноза |
|
|
Арабиноза |
|
|
|
||||
|
|
+ |
|
|
|
|
+ |
|
|
|
- |
|
|
|
|
2. |
Учет развернутой РА с О1-холерной и Инаба сыворотками. |
|
|
|
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Разведения |
1/100 |
1/200 |
1/400 |
|
1/800 |
1/1600 |
1/3200 |
1/6400 |
КА |
КС |
||||
Сыворотки |
|
||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
О1-холерная |
+ |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
|
- |
- |
- |
- |
|
|||
Инаба |
|
+ |
+ |
+ |
|
+ |
+ |
|
- |
- |
- |
- |
|
3. Учет определения чувствительности возбудителя к антибиотикам.
10
4. Вывод (определение вида выделенной культуры, учет антибиотико-
граммы).
3. Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с предполагаемым диагнозом «пищевая токсикоинфекция».
I этап исследования.
Посев исследуемого материала на среды Эндо, кровяной агар, ЖСА. Посе-
вы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.
IIэтап исследования.
1.Изучение характера роста на средах
Эндо __________________________________________________________,
кровяном агаре _________________________________________________,
ЖСА __________________________________________________________. 2. Приготовление мазков из выросших колоний, окраска по Граму, микро-
скопия ____________________________________________________________.
IIIэтап исследования.
1.Определение чистоты выделенной культуры _____________________.
2.Идентификация выделенной культуры по биохимическим свойствам с помощью энтеротест-систем. 3. Определение антибиотикочувствительности диско-диффузионным методом.
IV этап исследования. Учет результатов.
Учет антибиотикограммы, заключение о виде возбудителя.
11