metodichka_6

бытовой: через руки персонала и больных, аппаратуру (эндоскопы, зонды, ап-

параты для ИВЛ и др.), предметы ухода за больными; алиментарный. Наибо-

лее восприимчивы к инфекции дети до 1 года, поэтому заболевания чаще реги-

стрируют в детских стационарах среди новорожденных.

Клинические формы:

- гастроинтестинальная – гастроэнтериты с резким обезвоживанием ор-

ганизма и интоксикацией.

-генерализованная – септицемия, менингит с высокой летальностью.

3.Возбудители дизентерии, их свойства. Микробиологическая диагностика бактериальной дизентерии.

Возбудителей бактериальной дизентерии относят к роду Shigella. По меж-

дународной классификации выделяют 4 основных вида: S.dysenteriae (Григорь-

ева-Шига), S.flexneri, S.sonnei, S.boydii.

Морфология: грамотрицательные палочки средних размеров, неподвиж-

ны, спор и капсул не образуют.

Культуральные свойства: на средах Эндо и Плоскирева образуют лакто-

зонегативные колонии, т.к. не ферментируют лактозу. На селенитовой (накопи-

тельной) среде – диффузное помутнение.

Рост S.dysenteriae на среде Эндо.

9

Биохимические свойства: биохимически менее активны, чем эшерихии и сальмонеллы. Изучение биохимических свойств проводят с помощью энтеро-

тест-систем.

Антигенная структура шигелл:

О – соматический антиген;

К – оболочечные антигены.

Факторы патогенности шигелл:

1. Адгезины для прикрепления шигелл к колоноцитам с помощью pili, а также липополисахаридов наружной мембраны.

2.Инвазины (кодируются плазмидами) для проникновения в эпителиальные клетки толстого кишечника и размножение в них. В результате происходит разрушение эпителия и образование язв.

3.Белки внутриклеточного распространения вызывают лизис мембран колоноцитов, что обеспечивает межклеточное распространение шигелл.

4.Экзоэнтеротоксин. Его продукция наиболее выражена у S.dysenteriae (в 1000 раз выше, чем у других видов). Экзоэнтеротоксин шигелл состоит из 2 субъединиц: А и В. А-субъединица – собственно токсическая, нарушает синтез белка в клетках эпителия толстого кишечника и эндотелия капилляров; В- субъединица способствует прикреплению токсина к клеткам эпителия кишечника и проникновению в клетку А-субъединицы.

5.Эндотоксин (угнетает фагоцитоз и вызывает поражение слизистой оболочки толстого кишечника).

6.R-плазмиды кодируют формирование устойчивости к нескольким антибиотикам.

7.Эклипсные антигены с тканью толстого кишечника.

Дизентерия – кишечное инфекционное заболевание, характеризующееся поражением дистальных отделов толстого кишечника и интоксикацией. Клас-

сическими симптомами заболевания являются жидкий стул с примесью слизи и крови («инфекционный гемоколит»), а также тенезмы (резкие болевые ощу-

щения в области ануса), которые создают ложные позывы к дефекации.

10

Источники инфекции: больной человек или бактерионоситель. Болеют чаще дети в возрасте до 10 лет.

Путь заражения: алиментарный через инфицированную воду и пищевые продукты. Заболевание имеет выраженную сезонность – летне-осенний период.

Материал на исследование: фекалии.

Микробиологическая диагностика дизентерии.

1. Бактериологический метод (основной): из фекалий для посева заби-

рают слизистые и гнойные комочки с примесью крови. Посев исследуемого ма-

териала производят на дифференциально-диагностическую среду Плоскирева и накопительную селенитовую среду.

Выделенную культуру идентифицируют:

а) по биохимическим признакам с помощью энтеротест-систем;

б) по антигенным свойствам (в РА на стекле с диагностическими сыворотками).

2. РНГА по Рыцаю, РИФ: для определения шигеллезного антигена в фе-

кальном материале.

После перенесенных брюшного тифа и дизентерии у человека формирует-

ся стойкий кишечный дисбактериоз, требующий длительной корригирующей терапии. Специфическое лечение и профилактика не разработаны.

4.Характеристика кампилобактерий и хеликобактерий, вызываемые за-

болевания. Микробиологическая диагностика кампилобактериозов и

хеликобактериозов.

Возбудителей кампилобактериозов относят к роду Campylobacter, семей-

ству Campylobacteriaceae: C.jejuni, C.coli, C.fetus, C.upsaliensis.

Морфология: тонкие, грамотрицательные изогнутые палочки, имеющие форму запятой, латинской буквы S, крыльев летящей чайки. Спор и капсул не образуют, монотрихи.

11

Чистая культура кампилобактерий в окраске по Граму.

Культуральные свойства: микроаэрофилы, растут на специальных средах с добавлением крови при пониженной (5-10%) концентрации кислорода. Тем-

пературный оптимум 420С. Патогенные виды культивируют в присутствии га-

зовой смеси (5% О2, 10% СО2, 85% N2). Рост на плотной среде в виде росинок или капель прозрачной воды.

Факторы патогенности кампилобактерий:

1.Адгезины (для прикрепления к эпителию кишечного тракта).

2.Инвазины обеспечивают проникновение бактерий в эпителиальные клетки тонкого и толстого кишечника.

3.Токсинопродукция (выработка эндотоксина, экзоэнтеротоксина, цито-

токсина).

Источником инфекции при всех кампилобактериозах являются сельско-

хозяйственные животные и птицы, в некоторых случаях – собаки и кошки.

Пути заражения: алиментарный (через инфицированную воду и пищевые продукты), контактный (при уходе за животными).

Основные клинические проявления:

-гастроэнтериты с диареей, лихорадкой и болью в животе;

-колиты (боли в животе, имитирующие острый аппендицит);

-внекишечные формы – чаще реактивный артрит.

C.fetus вызывает сепсис, тромбофлебит, менингоэнцефалит. Может вы-

звать самопроизвольные аборты с внутриутробным инфицированием плода.

Материал на исследование: фекалии, кровь, ликвор.

12

Микробиологическая диагностика кампилобактериозов.

1. Бактериологический метод с идентификацией выделенной культуры по биохимическим и антигенным признакам.

2. Серологический метод: РСК, РИФ, ИФА.

Возбудителей хеликобактериозов относят к семейству Helicobacteriaceae,

роду Helicobacter: H.pylori, H.fenneliae (вызывает гастроэнтериты, колиты, сеп-

сис).

Морфология: спиральные грамотрицательные палочки, имеющие S-

образную форму. Спор и капсул не имеют. Лофотрихи.

H.pylori, лофотрихи.

Культуральные свойства сходны с кампилобактериями.

Факторы патогенности H.pylori:

1.Адгезины (для прикрепления к гастроцитам).

2.Ферменты инвазии: уреаза, муциназа и др.

3.Цитотоксины.

4.Острова патогенности (гены, кодирующие синтез цитотоксинов).

Источник инфекции: человек, а также домашние животные.

Пути передачи: алиментарный, контактный (со слюной), возможно зара-

жение контактно-бытовым путем.

H.pylori причастен к возникновению гастритов, язв желудка и двенадцати-

перстной кишки, аденокарциномы желудка.

Материал на исследование: биоптаты слизистой желудка.

13

Методы микробиологической диагностики.

1.Микроскопия биоптатов желудка.

2.Определение уреазной активности биоптатов желудка.

3.Молекулярно-биологический метод: ПЦР.

4.Бактериологический метод (малоэффективен).

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1.Изучение схемы бактериологического исследования крови больного с клини-

ческим диагнозом «брюшной тиф».

I этап исследования.

От больного с подозрением на брюшной тиф на 1-й неделе заболевания, в

период лихорадки, берут 10 мл крови из локтевой вены и производят посев в

20% желчный бульон в соотношении 1:10. Посевы ставят в термостат на 24 ча-

са при температуре 370С. II этап исследования.

Учет характера роста в желчном бульоне __________________________.

Высев из флакона на среду Эндо. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.

III этап исследования.

Учет характера роста на среде Эндо ______________________________.

Идентификацию выделенной культуры проводят:

а) по антигенным признакам – постановка реакции агглютинации на стекле с диагностическими сальмонеллезными сыворотками О2, О4, О9 (определение серогруппы сальмонелл), а затем с соответствующей Н-сывороткой – установ-

ление серотипа возбудителя – см. табл.1 (классификация Кауфмана-Уайта)

______________________________________________________________;

б) по биохимическим признакам – с помощью энтеротест-систем;

в) с целью определения фаготипа производят посев 4-часовой исследуемой культуры на чашку с МПА сплошным газоном, затем наносят капли типовых брюшнотифозных бактериофагов (Vi, А, В, С, Д, Е, F).

14

г) для выбора эффективной антибиотикотерапии определяют чувствительность выделенной культуры к антибиотикам диско-диффузионным методом.

IV этап исследования.

Учет результатов и выдача заключения о серотипе и фаготипе выделенной культуры, чувствительности ее к антибиотикам.

2.Серологическая диагностика брюшнотифозного носительства: учет РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом (по демонстрации).

Заключение о результатах серодиагностики.

3.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с клиническим диагнозом «дизентерия».

I этап исследования.

Посев фекалий больного на среду Плоскирева и селенитовую среду. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.

II этап исследования.

Макроскопическое изучение характера роста на средах

_______________________________________________________________.

Отбор лактозонегативных колоний со среды Плоскирева и пересев их на скошенный МПА для накопления чистой культуры. Посевы помещают в термостат на 24 часа при температуре 370С.

III этап исследования.

Отмечают характер роста на скошенном МПА______________________. Затем проводят идентификацию выделенной культуры:

а) по антигенным признакам – постановка реакции агглютинации на стекле со смесями диагностических адсорбированных дизентерийных сывороток (смеси №1, 2, 3), а затем с монорецепторными диагностическими сыворотками (Зонне, Флекснера, Бойда)_____________________________________________;

б) по биохимическим – с помощью энтеротест-систем;

15

в) фаготипирование – проба с поливалентным дизентерийным фагом. Посевы ставят в термостат на 24 часа при температуре 370С.

IV этап исследования.

Учет полученных результатов и выдача заключения о виде возбудителя.

16

Занятие №23

Тема. Микробиологическая характеристика холеры, псевдотуберкулеза, ки-

шечного иерсиниоза и пищевых отравлений микробной природы.

Цель занятия. Изучить характеристику и микробиологическую диагностику холеры, вибриозов, псевдотуберкулеза, кишечного иерсиниоза и пищевых от-

равлений микробной природы.

I.Теоретические знания:

1.Характеристика возбудителей холеры. Микробиологическая диагностика и специфическая профилактика холеры.

2.Микробиологическая характеристика вибриозов.

3.Характеристика возбудителей псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза.

Микробиологическая диагностика.

4.Этиологическая структура пищевых отравлений. Микробиологическая ди-

агностика пищевых отравлений бактериальной природы.

II. Практические навыки:

1. Световая микроскопия препаратов из чистых культур V.cholerae, окрашен-

ных по Граму.

2.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с клиническим диагнозом «холера». Учет и интерпретация результатов.

3.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с

предполагаемым диагнозом пищевая токсикоинфекция. Учет и интерпрета-

ция результатов.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1. Характеристика возбудителей холеры. Микробиологическая диагности-

ка и специфическая профилактика холеры.

Возбудителями холеры являются: Vibrio cholerae, Vibrio El-Tor (основной)

и Vibrio О-139 «Бенгал», относящиеся к семейству Vibrionaceae, роду Vibrio,

виду V.choleraе.

Морфология: грамотрицательные, слегка изогнутые в виде запятой палоч-

ки средних размеров, монотрихи, спор и капсул не образуют.

Культуральные свойства: облигатные аэробы, хорошо растут на щелоч-

ных средах (pH 8,5-9,0). В 1% пептонной воде через 6-8 часов образуют неж-

ную пленку. На щелочном агаре образуют гладкие прозрачные с голубоватым оттенком колонии.

Биохимические свойства: по классификации Хейберга, на основании способности ферментировать сахарозу, маннозу и арабинозу, представители рода Vibrio разделены на 8 групп. Возбудителей холеры относят к 1 группе Хейберга: расщепляют сахарозу и маннозу, не расщепляют арабинозу.

Антигенная структура:

О– соматический антиген (специфический);

Н– жгутиковый антиген (неспецифический).

По различию строения О-антигена представители вида Vibrio cholerae под-

разделяют на 206 серогрупп, среди которых возбудителями холеры являются

2