metodichka_6

Клостридии. Колонии клостридий, развивающиеся в глубине среды Виль-

сона-Блера, шаровидной или чечевицеобразной формы черного цвета. Морфо-

логия: грамположительные палочки со слегка закругленными концами, иногда с центрально или субтерминально расположенной спорой.

Дрожжеподобные грибы рода Candida. На среде Сабуро образуют вы-

пуклые, сметанообразные, блестящие, белого или кремового цвета. Морфоло-

гия: круглые или овальные почкующиеся клетки с нитями мицелия.

Подсчет микроорганизмов в 1 г фекалий.

Необходимо учитывать количество выросших колоний, степень разведения исследуемого материала и величину посевной дозы. Количественную оценку производят по формуле:

M= N x 10n+1,

где: М – количество микроорганизмов в 1 г фекалий;

N – количество выросших колоний; n – степень разведения фекалий.

21

Пример подсчета: на среде Эндо при посеве 0,1 мл из разведения фекалий

10-5 выросло 20 колоний эшерихий. По формуле определяют количество E.coli в 1 г фекалий: М=20 х 10(5+1) = 20 х 106 = 2,0 х 107 КОЕ/1 г.

Cравнение полученных результатов с нормативными показателями.

Выдача заключения на специальном бланке об изменениях в составе фе-

кальной микрофлоры и степени дисбактериоза.

№ анализа______

Ф.И.О.________________________________ Возраст _____________________

Дата поступления материала__________________________________________

При микробиологическом исследовании фекалий выделены:

Примечание: * – представители родов Klebsiella, Enterobacter, Hafnia, Serratia, Proteus, Morganella, Providencia, Citrobacter и др.; ** – Pseudomonas, Acinetobacter и др.

Дата выдачи результата _____________.

22

Занятие № 22 Тема: Микробиологическая характеристика сальмонеллезов (брюшного тифа,

паратифов, госпитальных сальмонеллезов), шигеллезов, кампилобактериозов и хеликобактериозов.

Цель занятия. Изучить характеристику сальмонелл, шигелл, кампилобактерий,

хеликобактерий и микробиологическую диагностику вызываемых ими заболе-

ваний.

I.Теоретические знания:

1.Характеристика возбудителей брюшного тифа и паратифов. Патогенез брюшного тифа. Микробиологическая диагностика.

2.Внутрибольничные (госпитальные) сальмонеллезы.

3.Возбудители дизентерии, их свойства. Микробиологическая диагностика бактериальной дизентерии.

4.Характеристика кампилобактерий и хеликобактерий, вызываемые заболева-

ния. Микробиологическая диагностика кампилобактериозов и хеликобакте-

риозов.

II.Практические навыки:

1.Изучение схемы бактериологического исследования крови больного с клини-

ческим диагнозом «брюшной тиф». Учет и интерпретация результатов.

2.Серологическая диагностика брюшнотифозного бактерионосительства (по демонстрации).

3.Изучение схемы бактериологического исследования фекалий больного с клиническим диагнозом «дизентерия». Учет и интерпретация результатов.

1

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1. Характеристика возбудителей брюшного тифа и паратифов. Патогенез

брюшного тифа. Микробиологическая диагностика.

Возбудителей брюшного тифа относят к роду Salmonella, который включа-

ет более 2500 серотипов. Современная классификация сальмонелл основана на строении их ДНК и включает только 2 вида, из которых патогенным для чело-

века является вид Salmonella enterica с 6 подвидами и множеством серотипов в каждом. Это связано с изменчивостью генов, кодирующих синтез белков (фла-

геллинов) жгутиков. По современной номенклатуре возбудителя брюшного ти-

фа, как и возбудителей паратифов, относят к подвиду еntericа и обозначают как

S.еntericа еntericа, серотип typhi. Однако, во избежание путаницы, используют следующие названия возбудителей, соответственно их серотипу:

-возбудитель брюшного тифа – S.typhi;

-возбудитель паратифа А – S.paratyphi A;

-возбудитель паратифа В – S.paratyphi B;

-возбудитель паратифа С – S.paratyphi C.

Морфология: грамотрицательные палочки средних размеров, перитрихи,

спор и капсул не образуют.

Чистая культура S.typhi в окраске по Граму.

2

Культуральные свойства: растут на простых питательных средах: МПА

(S-колонии), МПБ, 20% желчном бульоне (диффузно-мутящий рост). На диф-

ференциально-диагностических средах Плоскирева и Эндо все виды сальмо-

нелл образуют бесцветные или цвета среды колонии, т.к. не ферментируют лак-

тозу, на висмут-сульфитном агаре возбудители брюшного тифа растут в виде черных колоний с металлическим блеском и почернением подлежащей среды.

Рост S.typhi на висмут-сульфитном агаре.

Биохимические свойства: сальмонеллы биохимически менее активны,

чем эшерихии. S.typhi ферментирует углеводы до кислоты, S.рaratyphi А и В до кислоты и газа. Изучение биохимических свойств сальмонелл проводят с по-

мощью энтеротест-систем.

Антигенная структура сальмонелл:

О – соматический антиген;

Н – жгутиковый антиген;

К – оболочечные антигены.

В системе оболочечных антигенов у S.typhi присутствует Vi-антиген (у ви-

рулентных штаммов), являющийся рецептором для Vi-бактериофагов.

На основании определения основных антигенов сальмонелл Ф. Кауфман и П. Уайт построили их классификацию (табл.1). Согласно этой классификации сальмонеллы делят на серогруппы (по наличию общих О-антигенов), которые обозначают буквами латинского алфавита: A, B, C и т.д.

3

Согласно схеме Кауфмана-Уайта, S.typhi относят к группе Д, S.рaratyphi A,

S.paratyphi B, S.paratyphi C к группам А, В, С соответственно. Дифференциация серотипов сальмонелл внутри группы проводится по Н-антигену.

Факторы патогенности сальмонелл:

1.Адгезины для прикрепления сальмонелл к энтероцитам с помощью pili.

2.Инвазины обеспечивают проникновение бактерий в макрофаги лимфоидной ткани тонкого кишечника (пейеровы бляшки) и размножение в них.

3.Vi и K-антигены обеспечивают защиту от фагоцитоза.

4.Эндотоксин (ЛПС).

5.R-плазмиды (кодируют формирование устойчивости к нескольким антибио-

тикам).

4

6. Острова патогенности (хромосомные гены, которые кодируют способ-

ность к адгезии, инвазии, защите от фагоцитоза).

Механизмы патогенного действия эндотоксина сальмонелл

на макроорганизм:

1.Вызывает выработку в организме веществ, обусловливающих лихорадочное состояние.

2.Приводит к расстройствам гемодинамики, резкому снижению артериально-

го давления.

3.Оказывает токсическое действие на нервную систему.

4.Вызывает выраженную лейкопению.

5.Активирует синтез простагландинов, что приводит к повышению цАМФ,

гиперсекреции солей и воды из клеток в просвет кишечника. Возникает

диарея.

Брюшной тиф – острое антропонозное кишечное инфекционное заболева-

ние, характеризующееся поражением лимфатического аппарата тонкого ки-

шечника, паренхиматозных органов, бактериемией, лихорадкой с явлениями общей интоксикации (головная боль, помрачение сознания, бред, галлюцина-

ции) и розеолезными высыпаниями на коже.

Особенности современного течения брюшного тифа:

-менее выраженная симптоматика;

-короткий период лихорадки;

-редко возникает status typhosis (помрачение сознания, бред, галлюцинации);

-частые рецидивы;

-преобладают стертые и абортивные формы (короткое течение, отсутствие ро-

зеолезных высыпаний и поражений внутренних органов).

Источники инфекции: больной человек или бактерионоситель.

Путь заражения: алиментарный при употреблении инфицированной воды

и молочных продуктов.

5

Основную роль в заражении брюшным тифом играют бактерионосители,

которые могут выделять сальмонеллы в течение многих лет.

Тифозная Мэри – самый известный нулевой пациент. Именно из-за нее в начале XX века в Америке началась эпидемия брюшного тифа. Мэри Маллон родилась в Ирландии и эмигрировала в Америку в начале XX века. Она выбрала себе профессию кухарки, и это ее решение стоило жизни нескольким жителям города Мамаронек. Мэри переезжала с места на место и за ней оставались горы трупов. На предложение сдать анализы на брюшной тиф Мэри очень сильно обиделась. Власти насильно отправили Мэри в лечебное учреждение на остров. Через три года Мэри дала присягу, что не будет работать кухаркой и ее освободили. Она начинает работать прачкой. Эта работа приносит маленький доход. Мэри меняет фамилию и снова работает кухаркой. И снова заболевают и умирают люди. После этого Мэри ссылают на остров пожизненно. Мэри умерла от пневмонии, когда ей было 69 лет. При вскрытии было установлено, что возбудители брюшного тифа все время жили в ее желчном пузыре.

Патогенез: из ротовой полости сальмонеллы попадают в тонкий кишеч-

ник, где внедряются в энтероциты, лимфатический аппарат тонкого кишечника,

а затем попадают в кровь (бактериемия и интоксикация). С током крови саль-

монеллы попадают в паренхиматозные органы: печень, почки, селезенка, кост-

ный мозг, где они размножаются в макрофагах. Далее происходит выделение сальмонелл с фекалиями, мочой и другими биологическими жидкостями. Вы-

деление бактерий с желчью приводит к повторному попаданию их в тонкий кишечник и внедрению в лимфатический аппарат. Развивается аллергическая воспалительная реакция замедленного типа с образованием язвенных пораже-

ний стенки тонкой кишки.

Клиника: подъем температуры, лихорадка, интоксикация, увеличение пе-

чени и селезенки. Вследствие образования язвенных дефектов в стенке тонкой кишки – развитие кишечных кровотечений и перфорации стенки.

Клиника паратифов отличается более острым началом и менее тяжелым течением.

6

Материал на исследование: кровь (в стадии бактериемии на первой неде-

ле заболевания), фекалии, моча, желчь, сыворотка крови (со второй недели за-

болевания).

Микробиологическая диагностика брюшного тифа.

1. Бактериологический метод: посев крови производят на желчный буль-

он, фекалии, мочу и желчь засевают на плотные питательные среды. Иденти-

фикацию чистой культуры проводят:

а) по биохимическим признакам (до рода) с помощью энтеротест-систем;

б) по антигенным признакам (до серогруппы, а затем до серотипа) в РА на стекле с диагностическими сыворотками;

в) фаготипированием (в эпидемиологических целях для установления ис-

точника инфекции).

2. Серологический метод: со 2-й недели заболевания сыворотку крови больного исследуют с помощью ИФА и в РНГА с O- и Vi-эритроцитарными диагностикумами.

Брюшной тиф – это заболевание, при котором нередко после выздоровле-

ния формируется носительство в связи с длительным сохранением сальмонелл в различных органах, чаще в желчном пузыре.

Современной особенностью эпидемиологии брюшного тифа является:

▪увеличение частоты завоза инфекции с эндемичных территорий;

▪высокий эпидемиологический риск за счет лиц без определенного места жительства, среди которых регистрируется высокая заболеваемость брюшным тифом.

С целью выявления брюшнотифозных бактерионосителей обследуют:

а) лиц, переболевших брюшным тифом и паратифом;

б) лиц, бывших в контакте с больными брюшным тифом и паратифом;

в) здоровых лиц (работников пищевых, детских и лечебных учреждений, а

также учреждений системы водоснабжения);

7

г) лиц с лихорадкой неясной этиологии более 5 дней.

Микробиологическая диагностика брюшнотифозного носительства.

1. Серологический метод:

а) ИФА – для определения IgG, как маркеров ранее перенесенного заболевания;

б) РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом. Vi-антитела быстро исчезают после полного выздоровления, но при наличии брюшнотифозного носительства присутствуют постоянно.

Все лица, сыворотки которых дали положительный результат в ИФА и РНГА, подлежат тщательному многократному бактериологическому обследо-

ванию.

2. Бактериологический метод проводится по обычной схеме (см. выше бактериологическую диагностику брюшного тифа). На исследование забирают фекалии и мочу 5-кратно с интервалом 1-2 дня и однократно желчь. Оконча-

тельный диагноз брюшнотифозного носительства может быть установлен толь-

ко после выделения возбудителя из исследуемого материала.

Специфическая профилактика брюшного тифа проводится по эпидеми-

ческим показаниям химической сорбированной брюшнотифозной вакциной,

обогащенной Vi-антигеном (малоэффективна).

Существует фагопрофилактика с использованием брюшнотифозного

бактериофага.

2. Внутрибольничные (госпитальные) сальмонеллезы.

Основным возбудителем внутрибольничных сальмонеллезов является

S.typhimurium, который отличается множественной устойчивостью к антибио-

тикам, дезинфектантам, антисептикам и не лизируется типовыми сальмонел-

лезными бактериофагами.

Источники инфекции: больной человек или бактерионоситель.

Пути заражения: воздушно-пылевой: при вдыхании воздуха, содержаще-

го пылевые частицы с адсорбированными на них сальмонеллами; контактно-

8