3. Лабораторная диагностика.

Материалом для исследования являются фекалии, спинномозговая жидкость, смыв из носовой части глотки, кровь и др.

1) Экспресс-диагностика. Используется кариологический анализ. Смывы из носоглотки центрифугируют, из осадка готовят препарат, окрашивают гематоксилином, высушивают, микроскопируют с использованием иммерсионной микроскопии. Специфическим для энтеровирусной инфекции является смещение хроматина к периферии ядра и образование характерных, вытесненных из осветленного ядра, ярко-фиолетовых полумесяцев. Это дает возможность сделать предварительный вывод о репродукции энтеровирусов в исследуемом материале.

Метод флюоресцирующих антител в непрямом варианте является перспективным для выявления и идентификации вирусов ЕСНО в клиническом материале. Используются иммунные диагностические сыворотки, реагирующие с вирусным антигеном, находящимся в середине клетки исследуемого материала.

2) Вирусологический метод.

Проводят заражение клеток почек обезьян вируссодержащим материалом. Принципы выделения и идентификации общие для всех энтеровирусов. Факт обнаружения возбудителя – не абсолютный показатель для постановки диагноза (так как возможно бессимптомное носительство).

3) Серологический метод. Диагноз ЕСНО-инфекции подтверждают обнаружением антител в парных сыворотках, забираемых в начале и на 2-3 неделе болезни. Для выявления антител используют РН, РСК и РПГА.

 

4. Лечение и профилактика.

Лечение. Показано использование интерферонов и индукторов продукции эндогенных интерферонов.

Профилактика. Аналогична таковой при полиомиелите и Коксаки-инфекции.

V. ВИЧ-ИНФЕКЦИЯ.

 

1. История открытия вирусов вич-инфекции. Классификация вирусов.

История открытия. Вирусы были впервые изолированы в 1983 г. Л. Монтанье, Ф. Барре-Синусси, Д.Л. Черманом и коллегами (пастеровская группа) из культуры активированных Т-лимфоцитов, полученных из биопсийного материала лимфатического узла гомосексуалиста с лимфаденопатией. Позже в 1983 г. эти вирусы были выделены у больных СПИДом этой же группой ученых и ими же, параллельно с Д. Клацманом и Д.К. Глукманом, был доказан тропизм вирусов к СD₄₊-лимфоцитам. В 1984 г. Р.К. Гэлло, М. Попович и коллеги описали под именем «вирус Т-клеточной лейкемии человека III типа» вирус, идентичный выделенному пастеровской группой.

Классификация вирусов.

Семейство Retroviridae состоит из 7 родов:

Alpharetrovirus,

Betaretrovirus,

Gammaretrovirus,

Deltaretrovirus,

Epsilonretrovirus,

Lentivirus и

Spumavirus, включающих вирусы, патогенные для позвоночных, в том числе и человека.

Ретровирусы, вызывающие доказанные инфекционные процессы у людей, входят в рода Gammaretrovirus, Deltaretrovirus, Lentivirus и Spumavirus. 

Род Lentivirus. Название рода происходит от латинского слова lentus – длинный, что связано с длительным инкубационным периодом при инфицировании лентивирусами.

Вирус иммунодефицита человека I и II типа (ВИЧ-1 и ВИЧ-2)

2. Эпидемиология, особенности вируса, резистентность.

Эпидемиология. Источником ВИЧ-1-инфекции является больной человек или вирусоноситель. Заболевание относится к группе инфекций наружных кожных покровов.

Механизм передачи ВИЧ-1 – перкутанный.

Пути передачи ВИЧ-1:

1) Половой путь (ВИЧ-1 содержится в сперме и влагалищных секретах, возможно инфицирование даже при искусственном оплодотворении).

2) Парентеральный путь (хирургические манипуляции, инъекции и т.д., при которых используется инфицированный инструментарий).

3) Трансплантационный путь (посредством переливания инфицированной крови, препаратов крови, а также посредством трансплантации органов и тканей).

4) Трансплацентарный путь – передача ВИЧ-1 от матери к плоду через плаценту.

 

Основными факторами передачи ВИЧ-1 являются кровь, сперма, влагалищный секрет. ВИЧ-1 обнаруживается в слюне, грудном молоке при лактации. Однако доказательств возможной передачи с материнским молоком недостаточно. Роль кровососущих насекомых в передаче ВИЧ-1 изучается. Аспирационным и фекально-оральным механизмами ВИЧ-1 не передается.

 

Основные группы риска, подверженные инфицированию ВИЧ-1-инфекцией:

1) лица, ведущие беспорядочную половую жизнь (гетеро, гомо-, бисексуальные индивидуумы, работники секс-индустрии) – 60 %;

2) наркоманы – 30 %; 3) лица, больные гемофилией – 1 %;

4) реципиенты крови, компонентов крови или трансплантируемых органов – 2 %;

5) дети – 1 %;

6) другие лица, для которых степень риска не определена – 6 %.

 

Особенности вирусов. Вирионы ВИЧ-1 имеют сферическую форму диаметром 110 нм. Суперкапсид представляет собой бислойную липидную мембрану. Суперкапсид имеет форму многогранника, составленного из 20 шестиугольников и 12 пятиугольников. В суперкапсиде содержится 72-80 грибообразных шипа гликопротеиновой природы, расположенных в центре и углах каждого шестиугольника. Ножка шипа пронизывает липидный слой и состоит из гликопротеина gp41, шляпка – из gp120. Совокупность gp41 и gp120 обозначается как gp160. Гликопротеин gp120 содержит константные и гипервариабельные участки, а также область связывания с рецептором CD₄ Т-хелперов. Гликопротеин gp41 обусловливает слияние ВИЧ-1 с Т-лимфоцитами, а также опосредует проникновение ВИЧ-1 в клетки (макрофаги, макроглиоциты и др.) с дефицитом CD₄-рецепторов.

Матрикс представлен монослоем белка р17, прилежащим к суперкапсиду изнутри. Между матриксом и капсидом находится протеаза (р11), ответственная за созревание вирусных белков.

Капсид располагается в вирионе центрально, имеет форму, напоминающую снаряд или усеченный конус. Длина капсида 100 нм с диаметром основания 50 нм, а верхушки – 40 нм. Капсомеры капсида являются белками р24. Внутри капсида располагаются: геном ВИЧ-1, обратная транскриптаза, интеграза, 1 молекула затравочной РНК.

Высокая антигенная изменчивость ВИЧ-1 имеет место в течение всего периода инфекции, в том числе и у вирусоносителей. Она дает возможность ВИЧ-1 «уклоняться» от специфических антител и антигензависимых Т-киллеров. Антигенная изменчивость ВИЧ-1 значительно затрудняет создание вакцины для профилактики СПИДа.

Репродукция ВИЧ-1.

Клетками-мишенями для ВИЧ-1 являются все клетки, несущие на своих цитоплазматических мембранах кластеры дифференцировки CD₄:

1) активированные Т-хелперы (амплификаторы);

2) макрофаги;

3) моноциты;

4) дендритные клетки лимфатических узлов;

5) астроциты и олигодендроциты головного мозга;

6) клетки Лангерганса головного мозга.

 

Репродукция ВИЧ-1 в Т-хелперах завершается гибелью лимфоцитов, тогда как заражение моноцитов и макрофагов не сопровождается ЦПД, и клетки становятся пермиссивной системой для возбудителя (permission – разрешение). Изучаются механизмы заражения клеток эпителия кишечника.

Особенности репродукции ВИЧ-1:

1. Т-хелперы являются основной мишенью для атаки ВИЧ-1;

2. гликопротеин ВИЧ-1 gp41 индуцирует образование обширных синцитиальных структур за счет слияния инфицированных и неинфицированных Т-хелперов, следствием чего является их массовая гибель;

3. ВИЧ-1 может распространяться по межклеточным каналам из клетки в клетку;

4. высокая скорость репродукции ВИЧ-1 (1000 вирионов в 1 минуту);

5. образующиеся в большом количестве молекулы gp120 свободно циркулируют в крови и связываются с рецепторами неинфицированных Т-хелперов, в результате чего они также распознаются и уничтожаются Т-киллерами;

Указанные особенности обусловливают преимущественную гибель Т-хелперов.

 

Жизненный цикл ВИЧ-1 можно разделить на следующие этапы:

1) адгезия (прикрепление) к клетке-мишени;

2) слияние и проникновение в клетку;

3) дезинтеграция («раздевание») вируса;

4) обратная транскрипция; 5) импорт ДНК;

6) интеграция ДНК вируса в ДНК клетки-мишени;

7) транскрипция и процессинг мРНК вируса;

8) экспорт РНК;

9) трансляция;

10) сборка вириона;

11) выход из клетки.

 

1) Адгезия ВИЧ-1 с клеткой-мишенью происходит в результате взаимодействия вирусного гликопротеина gp120 с CD₄-рецептором клетки.

2) Слияние и проникновение ВИЧ-1 с клеткой-мишенью происходит путем рецепторного эндоцитоза, при котором суперкапсид встраивается в цитоплазматическую мембрану клетки, а матрикс и капсид вируса проникают в цитоплазму.

3) «Раздевание» ВИЧ-1 происходит под действием ферментов клетки-хозяина, а также собственной протеазы, расположенной между матриксом и капсидом. «Раздевание» завершается освобождением вирусного генома и внутрикапсидных ферментов и поступлением их в цитоплазму клетки.

4) Обратная транскрипция состоит в том, что обратная транскриптаза на основе вирусной «+»-РНК создает двухниточную комплементарную копию генома в виде «-»-ДНК.

5) Импорт вирусной «-»-ДНК заключается в проникновении «-»-ДНК-генома ВИЧ-1 в ядро клетки совместно с вирусными ферментами.

6) Интеграция вирусной ДНК в ДНК клетки происходит при помощи вирусного фермента интегразы, в результате чего ВИЧ-1 переходит в форму провируса. В этом состоянии вирус способен длительное время сохраняться в инфицированной клетке.

7) Транскрипция и процессинг (образование) матричной информационной РНК ВИЧ-1 ведет к накоплению большого количества их копий. Транскрипция провирусной ДНК происходит при участии клеточной ДНК-зависимой РНК-полимеразы. Транскрибирующиеся молекулы РНК содержат полный геном ВИЧ-1 и составляют фонд вирионных РНК, который используется при формировании зрелых вирусных частиц. Часть образовавшихся РНК выполняют функцию иРНК, транслирующих информацию с определенных генов провируса на рибосомах.

8) Экспорт РНК состоит в их выходе из клеточного ядра в цитоплазму клетки-хозяина.

9) Трансляция иРНК приводит к накоплению в цитоплазме структурных белков и гликопротеинов ВИЧ-1. Гликопротеины gp41 и gp120 образуют комплекс gp160, который выводится на поверхность МПМ клетки-хозяина.

10) Формирование вириона ВИЧ-1 происходит в цитоплазме путем самосборки: капсомеры формируют вокруг РНК капсид, который окружается протеинами матрикса.

11) Незрелый вирион прободает цитоплазматическую мембрану клетки-хозяина в месте концентрации gp160. Одновременно происходит формирование суперкапсида, липидный слой которого имеет клеточное происхождение. Массовый выход ВИЧ-1 из клетки-мишени сопровождается ее гибелью.

Резистентность.

Бесклеточные препараты ВИЧ-1 инфекционны во влажном состоянии при комнатной температуре более 15 дней, при 37˚С – до 11 суток, а при 56˚С – 3-4 ч. При 56˚С активность обратной транскриптазы утрачивается через 30 минут. В высушенном состоянии ВИЧ-1 при комнатной температуре инфекционен от 3 до 6 дней. ВИЧ-1 выдерживает низкие температуры (до -273˚С), стабилен в лиофилизированном состоянии. ВИЧ-1 относительно устойчив к ионизирующей радиации и, тем более, к ультрафиолетовому облучению, которое не инактивирует его даже в дозах, существенно превышающих применяемые обычно в операционных и лабораториях. ВИЧ-1 чувствителен к 3 % перекиси водорода, концентрированным кислотам и щелочам, 20 % этиловому спирту, эфиру, ацетону, 0,2 % раствору натрия гипохлорида и гидрохлорида, 1 % глютаральдегиду. 70 % этанолом ВИЧ-1 инактивируется за 1 минуту.