Дослід 4. Підрахунок кількості еритроцитів

Мета роботи. Оволодіти методикою підрахунку еритроцитів у крові в камері Горяєва.

Матеріали та обладнання. Мікроскоп з освітлювачем, камера Горяєва, 2-3% розчин хлориду натрію, голка від шприца, скальпель, ножиці, йод, вата, кролик, кров великої рогатої худоби.

Камера Горяєва (рис.37) складається із товстого предметного скельця з жолобками, розділеного на три плоскі частини. Середня з них розділена поздовжним прорізом на дві площадки. На кожній із них нанесені сітки. Бічні площадки на 0,1 мм вищі середньої і створюють простір (щілину) в 0,1 мм. Сітка камери складається з 225 великих квадратів (15 рядів по 15 великих квадратів в кожному); 25 великих квадратів розділені на 16 маленьких. Загальна площа сітки дорівнює 9мм². Сторона малого квадрату дорівнює 1/20 1/20=1/400 мм². Об’єм рідини над малим квадратом 1/40 1/10=1/4000 мм².

Рис. 37. Камера Горяєва

а) камера Горяєва, б)сітка камери:

1 - маленький квадрат;

2 - великий квадрат;

в) меланжер для визначення еритроцитів,

г) меланжер для визначення лейкоцитів.

Хід роботи. Встановити і розглянути сітку камери при малому збільшенні. Покрити камеру покривним скельцем і притерти. Зробити прокол вушної крайової вени кролика. В капілярну піпетку від гемометра Салі обережно набрати кров до помітки 20 мм³ і перенести в пробірку з 4 мл 2-3% розчину хлориду натрію. Верхнім прозорим шаром рідини 2-3 рази промити піпетку і змішати кров з розчином. Одержуємо розведення еритроцитів в 200 разів.

Краплю рідини нанести на поверхню камери біля краю покривного скельця. Крапля повинна підтекти під скло і заповнити камеру. Зачекати 2-3 хвилини, поки станеться зсідання еритроцитів. Помістити камеру під мікроскоп, знайти сітку і провести підрахунок еритроцитів під малим (8х15) збільшенням. Еритроцити можуть розподілятися по сітці нерівномірно, через це необхідно підрахувати їх в п’яти великих квадратах або в 80 малих квадратах, вибираючи квадрати по діагоналі сітки. Для того, щоб не повторити підрахунок одних і тих самих еритроцитів, рахують всі клітини, які лежать усередині квадрата і ті, що розташовані по верхній і правій суміжних лініях.

Підрахунок кількість еритроцитів в 1 мм³ проводиться за формулою

, або ,

де х - кількість еритроцитів в 1мм³ крові, n - кількість еритроцитів в 80 квадратах, 200 - ступінь розведення.

Дослід 5. Підрахунок кількості лейкоцитів

Мета роботи. Оволодіти методикою підрахунку кількості лейкоцитів.

Матеріали та обладнання. Оцтова кислота, 2% розчин (підфарбована гентоціаном фіолетовим), кров, мікроскоп, освітлювач, камера Горяєва, капілярна піпетка.

Хід роботи. Розбавлення лейкоцитів за методикою Ніколаєва.

В пробірку налити 0,4 мл 2% розчину підфарбованої оцтової кислоти. В капілярну піпетку від гемометра Салі насисати кров до позначки 20 мм³. Кров на кінчику піпетки обтерти. Опустити піпетку на дно пробірки з оцтовою кислотою і обережно видути кров. Піпетку промити верхнім шаром рідини. Вміст пробірки старанно перемішати. Отримали звичайне розбавлення в 20 раз.

Нанести краплю рідини на поверхню лічильної камери біля краю покривного скельця; крапля повинна підтекти під скло і заповнити камеру.

Зачекати, поки лейкоцити осядуть. Помістити камеру під мікроскоп, найти сітку і провести підрахунок лейкоцитів при малому збільшені в 100 великих неподілених квадратах, які розташовані в сітці групами по чотири.

Враховуючи, що площа одного великого квадрата дорівнює або , розрахунок кількості лейкоцитів провести за формулою

, або ,

де х - кількість лейкоцитів в 1мм³ крові;

n - кількість лейкоцитів в 100 великих квадратах.