7.3.1. Метод Циля-Нильсена (бактериоскопический метод)

Одним из распространённых лабораторных методов выявления туберкулёза является метод Циля-Нильсена.

[Описание метода Циля-Нильсена, [3,4,5], [1, с.31]]

1. На фиксированный мазок накладывают белую фильтровальную бумагу и наливают карболовый фуксин Циля. Препарат 2-3 раза подогревают в в пламени до появления паров.	Карболовый фуксин-основная краска; прогревание-протрава.
2. Препарат промывают водой, бумагу сбрасывают.
3. Препарат обесцвечивают в 5% растворе серной кислоты.	Серная кислота-обесцвечивающий фактор.
4. Промывают водой
5. Докрашивают синькой Леффлера 3-5 минут	Синька Леффлера — дополнительная краска
6. Промывают водой, высушивают, смотрят под иммерсией	Кислотоустойчивые бактерии и споры рубиново- красного цвета, а остальная микрофлора — синего цвета

Подготовленная проба исследуется специалистом под микроскопом. Для этого специалист просматривает препарат вдоль предметного стекла. После просмотра одного поля зрения, препарат перемещается для просмотра второго поля зрения и т.д. Для того, чтобы дать отрицательный ответ, необходимо просмотреть более ста полей зрения. В объекте размером 1,5 см на 1,5 см количество полей зрения по длине стекла составляет около ста. [5] В среднем на исследование одного образца у специалиста уходит до 20 минут. Для обнаружения таким методом МБТ в препарате необходимо, чтобы в 1 мл мокроты содержалось не менее 100000 бактерий. При меньшем числе бактерий исследование может дать ложноотрицательный результат. Для увеличения концентрации бактерий в пробе используют различные методы, например, метод флотации, однако он увеличивает вероятность определения не более, чем на 10% [1].

Однако помимо ложноотрицательного результата тест может выдать и ложноположительный результат. Это может быть вызвано тем, что иногда в образце мокроты могут содержаться частицы, не являющиеся туберкулезными бактериями, однако также обладающие кислотоустойчивостью. При окраске по Цилю‑Нильсену они окрашиваются так же как и МБТ. Такими элементами, похожими под микроскопом на МБТ могут быть частички пищи (например, кусочки воска или жира), преципитаты, другие микроорганизмы, неорганические частицы, а также артефакты. [2]

Таким образом, к основным недостаткам данного метода относятся:

1. низкая точность при небольшой концентрации бактерий в пробе;

2. большая зависимость точности результата от квалификации исследователя.

7.3.2. Бактериологический (культуральный) метод

Значительно более точным в сравнении с прямым исследованием пробы мокроты является метод посева пробы на элективные среды. Для выделения культуры МБТ требуется всего 20-100 микробных клеток на 1 мл мокроты. Однако данный метод является очень долгим и в среднем требует от 4 до 8 недель. Существуют высокоселективные среды, позволяющие вырастить колонии и за 1-2 недели, однако в любом случае, требудется дополнительное время на идентификацию микроорганизма.