- •Определение групп крови системы ав0 при помощи изогемагглютинирующих сывороток
- •Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинского назначения
- •Техника определения группы крови при помощи изогемагглютинирующих сывороток
- •Трактовка результатов реакции при определении группы крови с помощью изогемагглютинирующих сывороток
- •Техника определения группы крови перекрестным способом при помощи изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов
- •Трактовка результатов при определении группы крови перекрестным способом
- •Перечень возможных осложнений или ошибок при выполнении и пути их устранения
- •Определение групп крови системы ав0 с использованием моноклональных реагентов анти-а, анти-в, анти-ав
- •Применение идентификационных карт для определения групп крови ав0 в гелевом тесте микрометодом (id-карты ДиаМед)
- •Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинской техники
- •Технология использования способа
- •Применение карточек с моноклональными
- •Определение резус-принадлежности крови
- •I. Общие положения
- •Определение резус-принадлежности
- •Учет групповой принадлежности сыворотки антирезус
- •3. Контрольные исследования
- •4. Особенности стандартных сывороток антирезус
- •II. Методы определения резус-принадлежности
- •1. Определение резус-принадлежности реакцией конглютинации
- •2. Определение резус-принадлежности при помощи стандартного универсального реагента (в пробирках без подогрева)
- •3. Определение резус-принадлежности реакцией конглютинации в сывороточной среде на плоскости (чашке Петри) с подогревом
- •4. Определение резус-принадлежности эритроцитов реакцией агглютинации в солевой среде
- •5. Определение резус-принадлежности крови с использованием моноклонального реагента анти-d
- •6. Определение резус-принадлежности в непрямом антиглобулиновом тесте (непрямая проба Кумбса) с помощью неполных анти- d антител
- •III. Перечень возможных осложнений или ошибок при выполнении и пути их устранения
- •IV. Исследование других антигенов системы резус
- •Приготовление и использование стандартных сывороток и универсального реагента антирезус для определения резус-принадлежности крови человека
- •Источники получения сыворотки антирезус
- •Показатели пригодности крови для изготовления из нее стандартной сыворотки антирезус
- •Методы и дозы взятия крови
- •Первичная обработка сыворотки и плазмы
- •Исследование сыворотки на активность резус-антител
- •Повторное титрование сыворотки
- •Стандартизация сыворотки антирезус
- •Заключение о пригодности сыворотки
- •Назначение сыворотки антирезус
- •Розлив и паспортизация стандартных сывороток антирезус
- •Хранение и срок годности стандартной сыворотки антирезус
- •Выдача стандартной сыворотки антирезус
- •Изготовление универсального реагента антирезус для определения резус-принадлежности в пробирках без подогрева
- •Изготовление пробного образца реагента антирезус
- •Исследование на специфичность и активность
- •Трактовка результата
- •Изготовление серии стандартного универсального реагента антирезус
- •Инструкция по использованию стандартной сыворотки антирезус для определения резус-принадлежности эритроцитов крови реакцией с применением желатина
- •Предварительная обработка исследуемой крови и стандартных эритроцитов
- •Техника реакции
- •Трактовка результатов
- •Инструкция по использованию универсального реагента для определения резус-принадлежности эритроцитов крови в пробирках без подогрева
- •Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинской техники
- •Техника реакции
- •Трактовка результатов
- •Предварительная обработка исследуемой крови и стандартных эритроцитов
- •Техника реакции
- •Трактовка результатов
- •Исследование сыворотки человека на наличие резус-антител
- •I. Общие замечания
- •1. Учет специфичности антител и стандартных эритроцитов
- •2. Учет формы антител
- •II. Исследование сыворотки на наличие неполных резус-антител непрямой пробой кумбса
- •Предварительная обработка стандартных эритроцитов
- •2. Техника исследования
- •3. Трактовка результата
- •4. Титрование сыворотки, содержащей неполные резус-антитела
- •5. Проведение непрямого антиглобулинового теста с liss
- •6. «Спин»-метод для оценки результатов прямого и непрямого антиглобулиновых тестов
- •III. Исследование сыворотки на наличие неполных резус-антител с применением желатина
- •1. Предварительная обработка стандартных эритроцитов
- •2. Техника исследования
- •3. Трактовка результатов
- •4. Титрование сыворотки, содержащей неполные резус-антитела
- •Іv. Исследование сыворотки на наличие неполных антител с применением полиглюкина (в пробирках без подогрева)
- •1. Предварительная обработка стандартных эритроцитов
- •2. Техника исследования
- •3. Трактовка результатов
- •V. Исследование сыворотки на наличие полных антител в реакции агглютинации в солевой среде
- •1. Предварительная обработка стандартных эритроцитов
- •2. Техника исследования
- •3. Трактовка результата
- •4. Титрование сыворотки, содержащей полные резус-антитела
- •VI. Феномен зоны
- •VII. Специфичность антител
- •Viiі. Выявление антител к антигенам эритроцитов в гелевом тесте микрометодом
- •IX. Общее заключение
- •Удаление из сыворотки антирезус антител другой специфичности
- •1. Использование амниотической жидкости для нейтрализации групповых агглютининов и *
- •2. Нейтрализация групповых агглютининов и естественными групповыми веществами специфичности а и в (фруглюмином а и в)
- •3. Абсорбция групповых агглютининов резус-отрицательными эритроцитами на свертках крови группы ab(IV)
- •4. Нейтрализация групповых агглютининов и при помощи разведения сыворотки
- •5. Удаление из сыворотки антирезус сопутствующих антител анти-с и анти-е
- •Предупреждение посттрансфузионных осложнений, обусловленных эритроцитарными антигенами системы кеll
- •Выявление иммунных анти-а, анти-в антител к антигенам эритроцитов системы ав0
- •I. Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинской техники
- •II. Определение полных иммунных антител к эритроцитарным антигенам системы ав0 в реакции солевой агглютинации
- •1. Подготовительная работа
- •2. Техника реакции
- •3. Трактовка результатов
- •III. Определение неполных изоиммунных антител к эритроцтарным антигенам системы ав0 в непрямой пробе Кумбса
- •1. Подготовительная работа
- •2. Техника реакции
- •3. Трактовка результатов
- •Іv. Выявление иммунных (IgG) анти-а, анти-в антител с использованием унитиола
- •1. Характеристика метода
- •2. Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинской техники
- •3. Порядок проведения исследования
- •4. Трактовка результатов
- •5. Условия хранения и эксплуатации
- •V. Определение гемолизинов системы ав0
- •Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинской техники
- •2. Подготовительная работа
- •3. Техника реакции
- •4. Трактовка результатов определения групповых гемолизинов
- •Иммунизация доноров для получения стандартной сыворотки и иммуноглобулина антирезус
- •1. Отбор доноров для иммунизации
- •2. Выбор крови, используемой в качестве антигена
- •3. Условия иммунизации и реиммунизации
- •4. Иммунизация доноров для получения антител анти-d
- •5. Реиммунизация доноров для получения антител анти-d
- •6. Время появления антител
- •Иммунизация доноров для получения антител анти-с и анти-е
- •Время появления антител анти-с и анти-е
- •Заключение
- •Приготовление стандартных редких сывороток для определения различных изоантигенов человека
- •1. Основное назначение редких сывороток в организациях службы крови
- •2. Источники и способы получения сыворотки
- •3. Методы иммунизации и реиммунизации
- •4. Методы и дозы взятия крови
- •5. Показатели пригодности редких сывороток для практического использования
- •6. Организация поиска и первичное исследование редких сывороток
- •7. Титрование сыворотки
- •8. Стандартизация сыворотки
- •9. Обработка и расфасовка сыворотки
- •10. Паспортизация редкой сыворотки
- •11. Хранение и выдача редких сывороток
- •Использование стандартной сыворотки для определения антигенов эритроцитов редкой специфичности методом конглютинации с желатином в пробирках
- •Приготовление консервированных стандартных эритроцитов и их применение в изосерологических исследованиях
- •I. Требования, предъявляемые к стандартным эритроцитам
- •II. Приготовление консервированных стандартных эритроцитов
- •2. Получение взвеси эритроцитов в консерванте и розлив
- •3. Маркировка
- •4. Контроль
- •Взятие и учет крови, получаемой от доноров малыми дозами для приготовления стандартных эритроцитов
- •Министерство здравоохранения республики беларусь
- •Порядок выполнения иммуногематологических исследований крови доноров и различных категорий реципиентов
- •Алгоритм проведения иммуногематологических исследований у доноров
- •1. Определение группы крови по системе ав0
- •Порядок внесения в паспорта граждан отметок о групповой и резус-принадлежности
- •Определение резус-принадлежности крови
- •4. Определение антигена Келл
- •5. Фенотипирование антигенов эритроцитов
- •6. Определение наличия аллоиммунных антител в сыворотке крови
- •7. Идентификация аллоантител
- •Индивидуальный подбор гемокомпонентов для трансфузии
- •Методы определения групповой, резус-принадлежности и наличия антиэритроцитарных изоиммунных антител
- •Определение группы крови по системе ав0
- •2. Определение резус-принадлежности
- •3. Определение наличия антиэритроцитарных изоиммунных антител в сыворотке крови
- •4. Определение антител, фиксированных на эритроцитах (прямой антиглобулиновый тест)
- •5. Скрининг антиэритроцитарных аллоантител
- •Методы определения групповой, резус-принадлежности и наличия антиэритроцитарных изоиммунных антител
- •Отбор крови и плазмы для стандартных сывороток
- •Требования, предъявляемые к стандартной изогемагглютинирующей сыворотке
- •Основные этапы работы
- •Методы серологических исследований Определение групповой принадлежности сыворотки при помощи стандартных эритроцитов
- •Определение способности сыворотки вызывать неспецифическую агглютинацию
- •Определение гемолизирующих свойств сыворотки
- •Определение скорости наступления агглютинации
- •Определение титра агглютининов
- •Технология использования метода Предварительное заключение о пригодности крови для стандартной сыворотки
- •Взятие крови и донора и отделение от нее сыворотки
- •Паспортизация
- •Получение сыворотки из крови, оставшейся во флакончиках (пробирках)-спутниках после взятия ее у доноров
- •Использование плазмы крови
- •Паспортизация
- •Дальнейшая обработка и предварительное заключение о пригодности сыворотки
- •Консервирование сыворотки
- •Первый контроль сыворотки до розлива и оценка пригодности ее для дальнейшей обработки
- •Устранение свойства сыворотки вызывать неспецифическую агглютинацию
- •Устранение гемолизирующего действия сыворотки
- •Второй контроль сыворотки до розлива и оценка ее пригодности для дальнейшей обработки
- •Смешивание сывороток
- •Окрашивание сыворотки
- •Фильтрование сыворотки
- •Паспортизация разлитой сыворотки
- •Срок годности стандартной изогемагглютинирующей сыворотки
- •Контроль разлитой сыворотки
- •Методика титрования при контроле разлитой сыворотки
- •Брак разлитой сыворотки в пределах указанного срока годности
- •Выдача сыворотки
- •Хранение сыворотки
- •Общие сведения о паспортизации сыворотки
- •Паспортные записи в журналах
- •Результат реакции
- •Оценка результатов определения групп крови при помощи изогемагглютинирующих сывороток двух серий каждой группы
- •Подготовка и применение красок при приготовлении стандарнтных изогемагглютинирующих сывороток
5. Скрининг антиэритроцитарных аллоантител
Скрининг антител производится для установления причин ГБН и выработки точных рекомендаций по выбору гемокомпонентов для возможных трансфузий.
Обнаружение антиэритроцитарных аллоантител у новорожденных является показанием к определению их титра и специфичности. Одновременно необходимо определять антитела в сыворотке крови матери.
Идентификация аллоиммунных антител считается завершенной при соответствии результатов реакций исследуемой сыворотки с панелью эритроцитов результатам типирования антигенов эритроцитов новорожденного. В дальнейшем ребенку для переливания выбирают эритроцитсодержащие компоненты с отсутствием антигена, к которому выявлены антитела (в сыворотке ребенка и/или матери). В этом случае при выполнении обменных переливаний новорожденный нуждается в индивидуальном подборе по сыворотке матери и собственной сыворотке.
Методы определения групповой, резус-принадлежности и наличия антиэритроцитарных изоиммунных антител
1. Определение группы крови системы АВ0 при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток.
2. Определение группы крови системы АВ0 с помощью моноклональных реагентов анти-А и анти-В.
3. Определение группы крови системы АВ0 перекрестным методом при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов 0, А, В.
4. Определение резус-принадлежности при помощи стандартного универсального реагента анти-D (в пробирках без подогрева).
5. Определение резус-принадлежности при помощи моноклонального реагента анти-D.
6. Определение резус-принадлежности реакцией конглютинации 10%-ым раствором желатина.
7. Определение резус-принадлежности при помощи непрямого антиглобулинового теста (непрямая реакция Кумбса).
8. Исследование сыворотки на наличие неполных резус-антител с применением 10%-го раствора желатина.
9. Исследование сыворотки на наличие неполных резус-антител с применением полиглюкина (в пробирках без подогрева).
10. Исследование сыворотки на наличие неполных резус-антител непрямой пробой Кумбса.
11. Определение аутоантител на эритроцитах прямой пробой Кумбса.
12. Гелевая технология для определения антигенов эритроцитов А, В, факторов резус и антител к ним.
13. Определение группы крови и факторов резус на картах с высушенными тестовыми реактивами.
14. Выявление аллоиммунных антител в микропланшетах Эритайп с нанесенными моноклональными антисыворотками компании «Biotest AG», Германия и других производителей.
15. Определение антигенов эритроцитов А, В, факторов резус и антител к ним с использованием универсальных серологических карт (с микроколонками) Сэллбайнд, компании «Sanquin Reagents» и других производителей.
Подробная инструкция по применению прилагается к каждому набору используемых тест-систем.
ИСПОЛЬЗУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА:
Инструкция по определению групп крови системы АВ0 при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток, МЗ СССР от 07.09.1990 г., № 05-14/27.
Инструкция по определению резус-принадлежности крови, МЗ СССР от 07.09.1990 г., № 05-14/29.
Инструкция по исследованию сыворотки на наличие резус-антител, МЗ СССР от 07.09.1990 г. № 05-14/30.
Инструкция по использованию стандартной сыворотки для пробы Кумбса от 24.04.1985 г., № 06-14/6.
Шевченко Ю.Л., Жибурт Е.Б. «Безопасное переливание крови», Питер, 2000 г.
Жибурт Е.Б. Учебник «Трансфузиология», Питер, 2002 г.
Иммуносерология (нормативные документы), Москва, 1998 г.
Инструкция по применению «Переливание донорской крови и ее компонентов» МЗ РБ от 01.12.2003 г., № 118-1103.
Инструкция по применению компонентов крови (приложение № 1) МЗ РФ от 25.11.2002 г., № 363.
ААБК «Техническое руководство»,12-е издание, 1996 г.
Минеева Н.В. «Группы крови человека. Основы иммуногематологии». Санкт-Петербург, 2007 г.
Инструкция «О порядке медицинского осмотра доноров, взятия у них крови и ее компонентов» МЗ РБ 28.04.2006 г., № 32.
СХЕМА ПРОВЕДЕНИЯ ИММУНОСЕРОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ У БЕРЕМЕННЫХ ЖЕНЩИН
ПЕРВИЧНЫЙ
ВИЗИТ
(постановка
на учет)
Rh-отрицательная
Rh-положительная
АТ
нет
28
недель
АТ
есть
АТ
нет
АТ
есть
28
недель
АТ
нет
АТ
есть
нет
повышения титра АТ
контроль
перед родами
контроль
1
раз в 2 недели до 32 недель
1
раз в неделю до 34-36 недель
титр
АТ повышается
подготовка
к обменному переливанию крови ребенку
(подбор по сыворотке матери)
1
раз в 4 недели до 28 недель
есть
повышение титра АТ
титр
АТ снижается более чем на 2 ступени
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
УТВЕРЖДАЮ
Первый заместитель министра
________ В.В. Колбанов
13 февраля 2003 г.
Регистрационный № 124-1102
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СТАНДАРТНЫХ
ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИХ
СЫВОРОТОК ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУПП
КРОВИ СИСТЕМЫ АВ0
инструкция по применению
Учреждение-разработчик: НИИ гематологии
и переливания крови,
Республиканская станция переливания крови
Авторы: к.м.н., доцент Э.Л. Свирновская, В.С. Бондаренко, к.м.н.,
доцент В.Н.Гапанович, Т.В. Будько, к.м.н. Л.В. Иванов
Минск, 2003
Стандартными изогемагглютинирующими сыворотками являются сыворотки, приготовленные из крови людей и содержащие групповые антитела (агглютинины). Сыворотки предназначаются для определения групповой принадлежности крови людей по системе АВ0.
Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки представляют собой прозрачную жидкость, окрашенную в соответствии с групповой принадлежностью, расфасованную в маленькие флаконы. На этикетке обязательно указывают название учреждения, изготовившего сыворотку, специфичность, титр агглютининов, объем (в мл) и срок годности.