- •Определение групп крови системы ав0 при помощи изогемагглютинирующих сывороток
- •Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинского назначения
- •Техника определения группы крови при помощи изогемагглютинирующих сывороток
- •Трактовка результатов реакции при определении группы крови с помощью изогемагглютинирующих сывороток
- •Техника определения группы крови перекрестным способом при помощи изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов
- •Трактовка результатов при определении группы крови перекрестным способом
- •Перечень возможных осложнений или ошибок при выполнении и пути их устранения
- •Определение групп крови системы ав0 с использованием моноклональных реагентов анти-а, анти-в, анти-ав
- •Применение идентификационных карт для определения групп крови ав0 в гелевом тесте микрометодом (id-карты ДиаМед)
- •Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинской техники
- •Технология использования способа
- •Применение карточек с моноклональными
- •Определение резус-принадлежности крови
- •I. Общие положения
- •Определение резус-принадлежности
- •Учет групповой принадлежности сыворотки антирезус
- •3. Контрольные исследования
- •4. Особенности стандартных сывороток антирезус
- •II. Методы определения резус-принадлежности
- •1. Определение резус-принадлежности реакцией конглютинации
- •2. Определение резус-принадлежности при помощи стандартного универсального реагента (в пробирках без подогрева)
- •3. Определение резус-принадлежности реакцией конглютинации в сывороточной среде на плоскости (чашке Петри) с подогревом
- •4. Определение резус-принадлежности эритроцитов реакцией агглютинации в солевой среде
- •5. Определение резус-принадлежности крови с использованием моноклонального реагента анти-d
- •6. Определение резус-принадлежности в непрямом антиглобулиновом тесте (непрямая проба Кумбса) с помощью неполных анти- d антител
- •III. Перечень возможных осложнений или ошибок при выполнении и пути их устранения
- •IV. Исследование других антигенов системы резус
- •Приготовление и использование стандартных сывороток и универсального реагента антирезус для определения резус-принадлежности крови человека
- •Источники получения сыворотки антирезус
- •Показатели пригодности крови для изготовления из нее стандартной сыворотки антирезус
- •Методы и дозы взятия крови
- •Первичная обработка сыворотки и плазмы
- •Исследование сыворотки на активность резус-антител
- •Повторное титрование сыворотки
- •Стандартизация сыворотки антирезус
- •Заключение о пригодности сыворотки
- •Назначение сыворотки антирезус
- •Розлив и паспортизация стандартных сывороток антирезус
- •Хранение и срок годности стандартной сыворотки антирезус
- •Выдача стандартной сыворотки антирезус
- •Изготовление универсального реагента антирезус для определения резус-принадлежности в пробирках без подогрева
- •Изготовление пробного образца реагента антирезус
- •Исследование на специфичность и активность
- •Трактовка результата
- •Изготовление серии стандартного универсального реагента антирезус
- •Инструкция по использованию стандартной сыворотки антирезус для определения резус-принадлежности эритроцитов крови реакцией с применением желатина
- •Предварительная обработка исследуемой крови и стандартных эритроцитов
- •Техника реакции
- •Трактовка результатов
- •Инструкция по использованию универсального реагента для определения резус-принадлежности эритроцитов крови в пробирках без подогрева
- •Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинской техники
- •Техника реакции
- •Трактовка результатов
- •Предварительная обработка исследуемой крови и стандартных эритроцитов
- •Техника реакции
- •Трактовка результатов
- •Исследование сыворотки человека на наличие резус-антител
- •I. Общие замечания
- •1. Учет специфичности антител и стандартных эритроцитов
- •2. Учет формы антител
- •II. Исследование сыворотки на наличие неполных резус-антител непрямой пробой кумбса
- •Предварительная обработка стандартных эритроцитов
- •2. Техника исследования
- •3. Трактовка результата
- •4. Титрование сыворотки, содержащей неполные резус-антитела
- •5. Проведение непрямого антиглобулинового теста с liss
- •6. «Спин»-метод для оценки результатов прямого и непрямого антиглобулиновых тестов
- •III. Исследование сыворотки на наличие неполных резус-антител с применением желатина
- •1. Предварительная обработка стандартных эритроцитов
- •2. Техника исследования
- •3. Трактовка результатов
- •4. Титрование сыворотки, содержащей неполные резус-антитела
- •Іv. Исследование сыворотки на наличие неполных антител с применением полиглюкина (в пробирках без подогрева)
- •1. Предварительная обработка стандартных эритроцитов
- •2. Техника исследования
- •3. Трактовка результатов
- •V. Исследование сыворотки на наличие полных антител в реакции агглютинации в солевой среде
- •1. Предварительная обработка стандартных эритроцитов
- •2. Техника исследования
- •3. Трактовка результата
- •4. Титрование сыворотки, содержащей полные резус-антитела
- •VI. Феномен зоны
- •VII. Специфичность антител
- •Viiі. Выявление антител к антигенам эритроцитов в гелевом тесте микрометодом
- •IX. Общее заключение
- •Удаление из сыворотки антирезус антител другой специфичности
- •1. Использование амниотической жидкости для нейтрализации групповых агглютининов и *
- •2. Нейтрализация групповых агглютининов и естественными групповыми веществами специфичности а и в (фруглюмином а и в)
- •3. Абсорбция групповых агглютининов резус-отрицательными эритроцитами на свертках крови группы ab(IV)
- •4. Нейтрализация групповых агглютининов и при помощи разведения сыворотки
- •5. Удаление из сыворотки антирезус сопутствующих антител анти-с и анти-е
- •Предупреждение посттрансфузионных осложнений, обусловленных эритроцитарными антигенами системы кеll
- •Выявление иммунных анти-а, анти-в антител к антигенам эритроцитов системы ав0
- •I. Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинской техники
- •II. Определение полных иммунных антител к эритроцитарным антигенам системы ав0 в реакции солевой агглютинации
- •1. Подготовительная работа
- •2. Техника реакции
- •3. Трактовка результатов
- •III. Определение неполных изоиммунных антител к эритроцтарным антигенам системы ав0 в непрямой пробе Кумбса
- •1. Подготовительная работа
- •2. Техника реакции
- •3. Трактовка результатов
- •Іv. Выявление иммунных (IgG) анти-а, анти-в антител с использованием унитиола
- •1. Характеристика метода
- •2. Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинской техники
- •3. Порядок проведения исследования
- •4. Трактовка результатов
- •5. Условия хранения и эксплуатации
- •V. Определение гемолизинов системы ав0
- •Перечень необходимого оборудования, реактивов, препаратов, изделий медицинской техники
- •2. Подготовительная работа
- •3. Техника реакции
- •4. Трактовка результатов определения групповых гемолизинов
- •Иммунизация доноров для получения стандартной сыворотки и иммуноглобулина антирезус
- •1. Отбор доноров для иммунизации
- •2. Выбор крови, используемой в качестве антигена
- •3. Условия иммунизации и реиммунизации
- •4. Иммунизация доноров для получения антител анти-d
- •5. Реиммунизация доноров для получения антител анти-d
- •6. Время появления антител
- •Иммунизация доноров для получения антител анти-с и анти-е
- •Время появления антител анти-с и анти-е
- •Заключение
- •Приготовление стандартных редких сывороток для определения различных изоантигенов человека
- •1. Основное назначение редких сывороток в организациях службы крови
- •2. Источники и способы получения сыворотки
- •3. Методы иммунизации и реиммунизации
- •4. Методы и дозы взятия крови
- •5. Показатели пригодности редких сывороток для практического использования
- •6. Организация поиска и первичное исследование редких сывороток
- •7. Титрование сыворотки
- •8. Стандартизация сыворотки
- •9. Обработка и расфасовка сыворотки
- •10. Паспортизация редкой сыворотки
- •11. Хранение и выдача редких сывороток
- •Использование стандартной сыворотки для определения антигенов эритроцитов редкой специфичности методом конглютинации с желатином в пробирках
- •Приготовление консервированных стандартных эритроцитов и их применение в изосерологических исследованиях
- •I. Требования, предъявляемые к стандартным эритроцитам
- •II. Приготовление консервированных стандартных эритроцитов
- •2. Получение взвеси эритроцитов в консерванте и розлив
- •3. Маркировка
- •4. Контроль
- •Взятие и учет крови, получаемой от доноров малыми дозами для приготовления стандартных эритроцитов
- •Министерство здравоохранения республики беларусь
- •Порядок выполнения иммуногематологических исследований крови доноров и различных категорий реципиентов
- •Алгоритм проведения иммуногематологических исследований у доноров
- •1. Определение группы крови по системе ав0
- •Порядок внесения в паспорта граждан отметок о групповой и резус-принадлежности
- •Определение резус-принадлежности крови
- •4. Определение антигена Келл
- •5. Фенотипирование антигенов эритроцитов
- •6. Определение наличия аллоиммунных антител в сыворотке крови
- •7. Идентификация аллоантител
- •Индивидуальный подбор гемокомпонентов для трансфузии
- •Методы определения групповой, резус-принадлежности и наличия антиэритроцитарных изоиммунных антител
- •Определение группы крови по системе ав0
- •2. Определение резус-принадлежности
- •3. Определение наличия антиэритроцитарных изоиммунных антител в сыворотке крови
- •4. Определение антител, фиксированных на эритроцитах (прямой антиглобулиновый тест)
- •5. Скрининг антиэритроцитарных аллоантител
- •Методы определения групповой, резус-принадлежности и наличия антиэритроцитарных изоиммунных антител
- •Отбор крови и плазмы для стандартных сывороток
- •Требования, предъявляемые к стандартной изогемагглютинирующей сыворотке
- •Основные этапы работы
- •Методы серологических исследований Определение групповой принадлежности сыворотки при помощи стандартных эритроцитов
- •Определение способности сыворотки вызывать неспецифическую агглютинацию
- •Определение гемолизирующих свойств сыворотки
- •Определение скорости наступления агглютинации
- •Определение титра агглютининов
- •Технология использования метода Предварительное заключение о пригодности крови для стандартной сыворотки
- •Взятие крови и донора и отделение от нее сыворотки
- •Паспортизация
- •Получение сыворотки из крови, оставшейся во флакончиках (пробирках)-спутниках после взятия ее у доноров
- •Использование плазмы крови
- •Паспортизация
- •Дальнейшая обработка и предварительное заключение о пригодности сыворотки
- •Консервирование сыворотки
- •Первый контроль сыворотки до розлива и оценка пригодности ее для дальнейшей обработки
- •Устранение свойства сыворотки вызывать неспецифическую агглютинацию
- •Устранение гемолизирующего действия сыворотки
- •Второй контроль сыворотки до розлива и оценка ее пригодности для дальнейшей обработки
- •Смешивание сывороток
- •Окрашивание сыворотки
- •Фильтрование сыворотки
- •Паспортизация разлитой сыворотки
- •Срок годности стандартной изогемагглютинирующей сыворотки
- •Контроль разлитой сыворотки
- •Методика титрования при контроле разлитой сыворотки
- •Брак разлитой сыворотки в пределах указанного срока годности
- •Выдача сыворотки
- •Хранение сыворотки
- •Общие сведения о паспортизации сыворотки
- •Паспортные записи в журналах
- •Результат реакции
- •Оценка результатов определения групп крови при помощи изогемагглютинирующих сывороток двух серий каждой группы
- •Подготовка и применение красок при приготовлении стандарнтных изогемагглютинирующих сывороток
Перечень возможных осложнений или ошибок при выполнении и пути их устранения
Отступление от изложенных правил может привести к ошибочному заключению о групповой принадлежности исследуемой крови.
Ошибочное заключение о групповой принадлежности может явиться следствием нарушения:
технических условий проведения реакции;
методических условий проведения реакции;
быть связанной с биологическими особенностями исследуемой крови.
К нарушениям, связанным с техническими сторонами реакции, относятся:
несоблюдение условий взятия крови, доставки проб крови, оформления направления и маркировки пробирки;
перепутывание при вклеивании в медицинскую карту анализов, механические ошибки при переписывании результатов;
ошибочный порядок расположения стандартных сывороток и эритроцитов в штативах и неправильное нанесение их на пластинку;
загрязнение или применение мокрых пипеток, пластинок, палочек, неправильная маркировка пипеток;
использование недоброкачественных стандартов, например, сыворотки с истекшим сроком годности (недостаточно активной), загрязненной, помутневшей или частично высохшей, которая может вызвать неспецифическую реакцию агглютинации.
Для предупреждения возможных ошибок такого свойства необходимо в начале работы тщательно проверить расположение в штативах стандартных реагентов, сывороток, эритроцитов, их качество, групповую принадлежность, номер серии, срок годности. Строго соблюдать правила взятия крови, выписки направления, маркировки и доставки проб крови.
Ко второй возможной группе ошибок относятся несоблюдение методики определения группы крови и, как результат, – неправильная оценка реакции как в целом, так и в каждой отдельной капле, заключающаяся в следующем:
лицо, определяющее группу крови, считает, что агглютинации не произошло, в то время как она фактически должна появиться (ложноотрицательный результат);
лицо, определяющее группу крови, предполагает, что произошла агглютинация, в то время как она фактически отсутствует (ложноположительный результат);
Ложноотрицательный результат реакции проявляется при:
несоблюдении времени, необходимого для проведения реакции (5 минут). В случае, если эритроциты исследуемого лица обладают слабой агглютинабильностью, стандартная сыворотка в течение первых минут реакции дает замедленную, нечеткую, слабовыраженную агглютинацию, которая постепенно усиливается только к 5-ой минуте. Наиболее частой ошибкой является невыявление слабой подгруппы А2В(IV), которую ошибочно относят к В(III), и подгруппы А2(II), которую ошибочно относят к 0(I) группе;
неправильном соотношении количества сыворотки и эритроцитов. При избытке крови, если взята слишком густая капля крови и не выдержано соотношение крови и сыворотки 1:10;
неполном смешивании сыворотки и эритроцитов (плохо размешана капля, не покачивается пластинка);
нарушении температурного режима реакции (температура ниже +15°С и температура выше +25°С).
Ложноположительный результат реакции наблюдается при:
неспецифической агглютинации, когда эритроциты исследуемой крови складываются в «монетные столбики», которые невооруженным глазом можно принять за агглютинаты;
при феномене ауто- или панагглютинации, когда исследуемые эритроциты агглютинируются стандартными сыворотками всех групп, включая АВ(IV), а также сывороткой исследуемой крови.
при подсыхании капли, когда пластинку со смесью эритроцитов и сыворотки не покачивают или удлиняют время наблюдения сверх 5 минут.
В этих случаях необходимо:
провести повторное исследование испытуемой крови перекрестным методом для установления полной формулы крови по системе АВО, заменив стандартные изогемагглютинирующие сыворотки другими сериями; для исключения неспецифической агглютинации необходимо добавить 1 каплю (0,05 мл) изотонического раствора хлорида натрия, во все капли, где произошла агглютинация, с последующим покачиванием пластинки;
для исключения феномена ауто- или панагглютинации необходимо отмыть испытуемые эритроциты теплым изотоническим раствором хлорида натрия (температура +37°С) путем центрифугирования и повторить реакцию со стандартными сыворотками.
Ошибки, связанные с биологическими особенностями исследуемой крови, могут быть обусловлены наличием слабых антигенов – А2, В2, А2В, АВ2, экстраагглютининов, панагглютинации, аутоагглютинации, кровяной химеры вследствие гемотрансфузии, ослаблением агглютинабельности эритроцитов при онкопатологии.
В большинстве случаев ошибок при определении групповой принадлежности крови можно избежать путем строгого соблюдения инструкции. При затруднении в определении сложных групп крови образец направляют в региональную ОПК или СПК для исследования специалистом-изосерологом.
ДОПОЛНЕНИЕ
В настоящее время, наряду с применением изогемагглютинирующих сывороток для определения групп крови системы АВО, полученных от доноров крови, используются моноклональные антитела дополнение 1 (моноклональные реагенты ГУ «РНПЦГТ», цоликлоны компаний «Гематолог», «Медиклон» и других производителей), идентификационные карты для определения групп крови АВО в гелевом тесте (ID-карты ДиаМед и других производителей) – дополнение 2, метод с использованием специальных карточек с высушенными на них тестовыми реактивами («Biotest» и других производителей) – дополнение 3, микропланшеты Эритайп с нанесенными моноклональными антисыворотками (компании «Biotest AG», Германия и других производителей), карты универсальные серологические (с микроколонками) Сэллбайнд (компании «Sanquin Reagents», Голландия и других производителей).
Постановка реакций гемагглютинации с их использованием должна производиться согласно инструкции производителя.
Дополнение 1