- •Российский университет дружбы народов
- •К практическим занятиям по биохимии
- •Авторский коллектив:
- •Предисловие как пользоваться этим учебным пособием?
- •Список сокращений и условных обозначений
- •Техника безопасности при работе в биохимической лаборатории
- •1. Общие требования безопасности
- •Классификация химических реактивов в биохимической лаборатории
- •2. Требования безопасности перед началом работ
- •3. Требования безопасности во время работы
- •4. Требование безопасности в аварийных ситуациях
- •5.Требование безопасности по окончании работы
- •Раздел 1: Аминокислоты и простые белки Введение
- •1.1 Проверка знаний по органической химии
- •1.2. Цветные реакции на белки и аминокислоты. Реакции осаждения и денатурации белков а. Цветные реакции на белки и аминокислоты
- •Б. Реакции осаждения и денатурации белков
- •1.3. Количественное определение белка биуретовым методом. Построение калибровочных кривых
- •1 .4. Диализ белков. Бумажная хроматография аминокислот
- •А. Диализ
- •1.5. Коллоквиум I по теме «Аминокислоты и простые белки»
- •Раздел 2: Сложные белки, нуклеиновые кислоты и ферменты Введение
- •2.1 Действие амилазы на крахмал. Влияние температуры на активность амилазы а. Действие амилазы на крахмал
- •Б. Изучение влияния температуры на скорость ферментативной реакции
- •2.2. Количественное определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови с п-нитрофенилфосфатом
- •2.3. Коллоквиум II по теме: «Сложные белки, нуклеиновые кислоты и ферменты» Вопросы, для самостоятельной подготовки
- •Варианты письменной части коллоквиума
- •Варианты заданий на компьютерном тестировании
- •Правильные ответы
- •Раздел 3: Витамины, липиды, гормоны Введение
- •3.1. Количественное определение витаминов с и р.
- •3.3. Влияние гормонов на содержание глюкозы в крови
- •3.4. Коллоквиум III по теме «Витамины, липиды, гормоны»
- •Раздел 4: Метаболизм. Биоэнергетика клеток. Химия и обмен углеводов Введение
- •4.1. Специфичность действия ферментов распада углеводов: амилазы и сахаразы
- •4.2. Количественное определение глюкозы. Построение «сахарных кривых»
- •4.3. Определение активности сукцинатдегидрогеназы в мышцах. Количественное определение пирувата в моче
- •4.4 Коллоквиум IV по теме: «Метаболизм. Биоэнергетика клеток. Химия и обмен углеводов»
- •Правильные ответы
- •Раздел 5: Обмен липидов и его регуляция Введение
- •5.1. Кинетика действия липазы.
- •5.2. Количественное определение фосфатидилхолинов (лецитинов) по фосфору
- •I. Приготовление рабочего раствора сыворотки.
- •II. Определение концентрации фосфатидолхолинов по содержанию фосфора.
- •5.3. Количественное определение холестерина в сыворотке крови
- •5.4. Количественное определение малонового диальдегида
- •5.5. Коллоквиум по теме «Обмен липидов»
- •Раздел 6: Переваривание белков и обмен аминокислот
- •6.1. Количественный анализ желудочного сока. Определение свободной, связанной, общей соляной кислоты и общей кислотности желудочного сока.
- •6.2. Количественное определение аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы в сыворотке крови
- •6.3. Доказательство проявления активности аланин-аминотрансферазы (АлАт) методом бумажной хроматографии
- •6.4. Экспресс-метод определения повышенного содержания фенилаланина в плазме крови
- •6.5. Количественное определение мочевины в моче ферментативным уреазным/фенол-гипохлоритным методом
- •6.6. Количественное определение креатинина в моче
- •6.7. Коллоквиум по теме: «Обмен простых белков» Вопросы, для самостоятельной подготовки
- •Варианты письменной части коллоквиума
- •Правильные ответы
- •Раздел 7: Обмен хромопротеинов и нуклеопротеинов. Биохимия крови и мочи. Биосинтез нуклеиновых кислот и белков. Введение
- •7.1. Определение общего билирубина в сыворотке крови
- •7.2. Количественное определение мочевой кислоты в моче
- •7.3. А. Определение активности -амилазы в моче
- •7.3. Б. Составные части мочи в норме и при патологии
- •7.4. Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови
- •7.5. Определение активности лактатдегидрогеназы в сыворотке крови
- •7.6. Коллоквиум по теме: «Обмен хромопротеинов и нуклеопротеинов. Биохимия крови и мочи. Биосинтез нуклеиновых кислот и белка». Вопросы, для самостоятельной подготовки
- •Варианты письменной части коллоквиума
- •Правильные ответы
- •Раздел 8: Подготовка к экзамену
- •8.1. Основные вопросы, выносимые на обсуждение
- •8.2. Пример экзаменационного тестового задания по курсу биохимии
- •59. Найти соответствие между процессом и его графическим изображением
- •60. Цикл мочевинообразования установил
- •Ответы к экзаменационному тесту
- •Раздел 9: Приложения
- •9.1. Термины, различающиеся по смыслу, но сходные по написанию и звучанию
- •9.2. Стандартные биохимические наборы и реактивы, используемые в практикуме
- •9.3. Рекомендуемая литература
- •Содержание
- •Раздел 7: Обмен хромопротеинов и нуклеопротеинов. Биохимия крови и мочи. Биосинтез нуклеиновых кислот и белков. 126
- •Раздел 8: Подготовка к экзамену 148
- •Раздел 9: Приложения 161
7.2. Количественное определение мочевой кислоты в моче
Мочевая кислота является конечным продуктом катаболизма аденозина и гуанозина (пуринового обмена). Выводится из организма почками с мочой и в меньшей степени через желудочно-кишечный тракт. Будучи слабой кислотой, мочевая кислота присутствует в биологических жидкостях как в недиссоциированной форме, так и в виде мононатриевой соли. Плохо растворима в воде.
Роль мочевой кислоты в патологии связана с ее низкой растворимостью.
Мочевая кислота осаждается в виде кристаллов урата натрия. Отложение этих кристаллов в суставах вызывает подагру. Мочевая кислота может откладываться в почках в виде камней.
Гиперурекемия наблюдается при обильном потреблении пищи, содержащей нуклеотиды; при усиленном синтезе пуриновых нуклеотидов; при врожденных нарушениях резервных «путей спасения» аденина и гипоксантина (синдром Леха-Найана (Lesch-Nyhan Syndrome) и большей частью вследствие нарушения почечной экскреции с мочой.
Цель работы
Определить суточное выделение мочевой кислоты с мочой и сравнить с нормальными величинами.
Принцип метода
Метод основан на способности мочевой кислоты восстанавливать в щелочной среде бесцветный фосфорно-вольфрамовый реактив в соединение синего цвета. При титровании этого соединения раствором красной кровяной соли K3[Fe(CN)6] раствор обесцвечивается. Израсходованное количество красной кровяной соли соответствует количеству мочевой кислоты.
Выполнение работы (см. приложение )
К 2,5 мл свежевзятой мочи прибавляют 1мл 30% раствора NaOH и 1 мл фосфорно-вольфрамового реактива. Раствор приобретает синее окрашивание.
Затем раствор титруют щелочным раствором красной кровяной соли (0,0015М) до обесцвечивания. Отмечают объем красной кровяной соли, пошедшей на титрование (V в литрах).
Расчет
Количество мочевой кислоты в 2,5 мл мочи составляет 0,0015 . V моль, в 1 л – 0,0015 . 400 . V = 0,6 . V моль/л. Зная относительную молекулярную массу мочевой кислоты (Mr = 168), рассчитываем ее массу в 1 литре: m = 0,6 . V . 168 = 100,8 . V г. Принимая суточный диурез 1,5 л, получают величину суточной экскреции мочевой кислоты с мочой:
100,8 . V . 1,5 = 151,2 . V г/сутки,
конечная формула расчета:
экскреция мочевой кислоты = 0,0015· V·400·168·1,5 г/сутки,
где 0,0015 – концентрация K3[Fe(CN)6] в моль/л;
V – объем K3[Fe(CN)6] в л, пошедший на титрование;
168 – молярная масса мочевой кислоты в г/моль;
1500 – суточный диурез мочи в мл;
2,5 – исходная проба мочи в мл.
Норма: 0,3 – 1,2 г/сутки.
Выводы
Тестовые задания по теме: «Распад и синтез нуклеотидов»
1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»
Азотистые основания пищи используются для биосинтеза нуклеиновых кислот нашего организма.
Источником NH2-группы при синтезе ГМФ из инозиновой кислоты является глутаминовая кислота.
Конечный продукт распада аденозина у человека - мочевая кислота.
Концентрация мочевой кислоты в крови человека - в норме 0,2 г/ л.
Регуляция синтеза пиримидиновых оснований осуществляется по типу обратной связи.
Азот пиримидиновых оснований выводится из организма в основном в виде мочевой кислоты.
Участвует ли аспарагин в биосинтезе пуринового ядра?
Может ли ЦМФ образоваться из УМФ?
Является ли β-аланин конечным продуктом катаболизма ТМФ в организме человека?
Участвует ли карбамоилфосфат в синтезе пиримидиновых нуклеотидов?
Применяется ли ингибитор ксантиноксидазы для лечения подагры?
Только ли тиоредоксин участвует в восстановлении рибозы до дезоксирибозы?
2) Выбрать один правильный ответ
Источником NH2-группы при синтезе АМФ из инозиновой кислоты является:
|
Конечный продукт катаболизма ТМФ в организме человека:
|
3) Найти соответствие Y (буква) и X (цифра) в следующей цепи превращений:
|
X |
|
X |
|
Гипоксантин
|
|
Y |
|
Мочевая кислота |
1. дегидрогеназа 2. оксигеназа 3. оксидаза 4. гидроксилаза |
А. инозин Б. аденин В. гуанин Г. аллантоин Д. ксантин |