- •Российский университет дружбы народов
- •К практическим занятиям по биохимии
- •Авторский коллектив:
- •Предисловие как пользоваться этим учебным пособием?
- •Список сокращений и условных обозначений
- •Техника безопасности при работе в биохимической лаборатории
- •1. Общие требования безопасности
- •Классификация химических реактивов в биохимической лаборатории
- •2. Требования безопасности перед началом работ
- •3. Требования безопасности во время работы
- •4. Требование безопасности в аварийных ситуациях
- •5.Требование безопасности по окончании работы
- •Раздел 1: Аминокислоты и простые белки Введение
- •1.1 Проверка знаний по органической химии
- •1.2. Цветные реакции на белки и аминокислоты. Реакции осаждения и денатурации белков а. Цветные реакции на белки и аминокислоты
- •Б. Реакции осаждения и денатурации белков
- •1.3. Количественное определение белка биуретовым методом. Построение калибровочных кривых
- •1 .4. Диализ белков. Бумажная хроматография аминокислот
- •А. Диализ
- •1.5. Коллоквиум I по теме «Аминокислоты и простые белки»
- •Раздел 2: Сложные белки, нуклеиновые кислоты и ферменты Введение
- •2.1 Действие амилазы на крахмал. Влияние температуры на активность амилазы а. Действие амилазы на крахмал
- •Б. Изучение влияния температуры на скорость ферментативной реакции
- •2.2. Количественное определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови с п-нитрофенилфосфатом
- •2.3. Коллоквиум II по теме: «Сложные белки, нуклеиновые кислоты и ферменты» Вопросы, для самостоятельной подготовки
- •Варианты письменной части коллоквиума
- •Варианты заданий на компьютерном тестировании
- •Правильные ответы
- •Раздел 3: Витамины, липиды, гормоны Введение
- •3.1. Количественное определение витаминов с и р.
- •3.3. Влияние гормонов на содержание глюкозы в крови
- •3.4. Коллоквиум III по теме «Витамины, липиды, гормоны»
- •Раздел 4: Метаболизм. Биоэнергетика клеток. Химия и обмен углеводов Введение
- •4.1. Специфичность действия ферментов распада углеводов: амилазы и сахаразы
- •4.2. Количественное определение глюкозы. Построение «сахарных кривых»
- •4.3. Определение активности сукцинатдегидрогеназы в мышцах. Количественное определение пирувата в моче
- •4.4 Коллоквиум IV по теме: «Метаболизм. Биоэнергетика клеток. Химия и обмен углеводов»
- •Правильные ответы
- •Раздел 5: Обмен липидов и его регуляция Введение
- •5.1. Кинетика действия липазы.
- •5.2. Количественное определение фосфатидилхолинов (лецитинов) по фосфору
- •I. Приготовление рабочего раствора сыворотки.
- •II. Определение концентрации фосфатидолхолинов по содержанию фосфора.
- •5.3. Количественное определение холестерина в сыворотке крови
- •5.4. Количественное определение малонового диальдегида
- •5.5. Коллоквиум по теме «Обмен липидов»
- •Раздел 6: Переваривание белков и обмен аминокислот
- •6.1. Количественный анализ желудочного сока. Определение свободной, связанной, общей соляной кислоты и общей кислотности желудочного сока.
- •6.2. Количественное определение аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы в сыворотке крови
- •6.3. Доказательство проявления активности аланин-аминотрансферазы (АлАт) методом бумажной хроматографии
- •6.4. Экспресс-метод определения повышенного содержания фенилаланина в плазме крови
- •6.5. Количественное определение мочевины в моче ферментативным уреазным/фенол-гипохлоритным методом
- •6.6. Количественное определение креатинина в моче
- •6.7. Коллоквиум по теме: «Обмен простых белков» Вопросы, для самостоятельной подготовки
- •Варианты письменной части коллоквиума
- •Правильные ответы
- •Раздел 7: Обмен хромопротеинов и нуклеопротеинов. Биохимия крови и мочи. Биосинтез нуклеиновых кислот и белков. Введение
- •7.1. Определение общего билирубина в сыворотке крови
- •7.2. Количественное определение мочевой кислоты в моче
- •7.3. А. Определение активности -амилазы в моче
- •7.3. Б. Составные части мочи в норме и при патологии
- •7.4. Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови
- •7.5. Определение активности лактатдегидрогеназы в сыворотке крови
- •7.6. Коллоквиум по теме: «Обмен хромопротеинов и нуклеопротеинов. Биохимия крови и мочи. Биосинтез нуклеиновых кислот и белка». Вопросы, для самостоятельной подготовки
- •Варианты письменной части коллоквиума
- •Правильные ответы
- •Раздел 8: Подготовка к экзамену
- •8.1. Основные вопросы, выносимые на обсуждение
- •8.2. Пример экзаменационного тестового задания по курсу биохимии
- •59. Найти соответствие между процессом и его графическим изображением
- •60. Цикл мочевинообразования установил
- •Ответы к экзаменационному тесту
- •Раздел 9: Приложения
- •9.1. Термины, различающиеся по смыслу, но сходные по написанию и звучанию
- •9.2. Стандартные биохимические наборы и реактивы, используемые в практикуме
- •9.3. Рекомендуемая литература
- •Содержание
- •Раздел 7: Обмен хромопротеинов и нуклеопротеинов. Биохимия крови и мочи. Биосинтез нуклеиновых кислот и белков. 126
- •Раздел 8: Подготовка к экзамену 148
- •Раздел 9: Приложения 161
Список сокращений и условных обозначений
АДФ – аденозиндифосфат АлАТ – аланинаминотрансфераза АМК – аминокислота АМФ – аденозинмонофосфат цАМФ – циклический АМФ АПБ – ацилпереносящий белок АсАТ – аспартатаминотрансфераза АТФ – аденозинтрифосфат АТФаза – аденозинтрифосфатаза ГАМК – гамма-аминомасляная кислота ГАФ – глицеральдегид-3-фосфат ГДФ – гуанозиндифосфат ГМГ-КоА – β-гидрокси-β-метилглутарил-КоА ГМФ – гуанозинмонофосфат цГМФ – циклический ГМФ ГТФ – гуанозинтрифосфат ДАГ – диацилглицеролы ДАФ – диоксиацетонфосфат ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота ДНКаза – дезоксирибонуклеаза ДНФГ – 2,4-динитрофенилгидразин ДОФА – диоксифенилаланин кат - катал ИМФ – инозинмонофосфат КоА – кофермент (коэнзим) А КоQ – кофермент (коэнзим) Q КФ – классификация ферментов КФК - креатинфосфокиназа ЛДГ – лактатдегидрогеназа ЛП – липопротеины ЛПВП – липопротеины высокой плотности ЛПНП – липопротеины низкой плотности ЛПОНП – липопротеины очень низкой плотности МАГ – моноацилглицеролы МАО - моноаминооксидаза НАД+ – никотинамидадениндинуклеотид окисленный НАДН(Н+) – никотинамидадениндинуклеотид восстановленный НАДФ+ – никотинамидадениндинуклеотидфосфат окисленный НАДФН(Н+) – |
никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстановленный ПВК – пировиноградная кислота ПФ – пиридоксальфосфат РНК – рибонуклеиновая кислота т-РНК – транспортная РНК РНКаза - рибонуклеаза СДГ – сукцинатдегидрогеназа ТАГ – триацилглицеролы ТГФК – тетрагидрофолиевая кислота ТДФ – тимидиндифосфат ТМФ – тимидинмонофосфат ТПФ – тиаминпирофосфат ТТФ – тимидинтрифосфат ТХУ – трихлоруксусная кислота УДФ – уридиндифосфат УМФ – уридинмонофосфат УТФ – уридинтрифосфат ФАД – флавинадениндинуклеотид окисленный ФАДН2 – флавинадениндинуклеотид восстановленный ФЕП – фосфоенолпируват ФМН – флавинаденинмононуклеотид Фн – неорганический фосфат ФФн – неорганический пирофосфат ФРПФ – 5-фосфорибозил-1-пирофосфат ФФК – фосфофруктокиназа ФЭК – фотоэлектроколориметр ХЭ - холинэстераза ЦДФ – цитидиндифосфат ЦМФ – цитидинмонофосфат ЦТК – цикл трикарбоновых кислот (цикл Кребса) ЦТФ – цитидинтрифосфат ЩУК – щавелевоуксусная кислота ЭПС – эндоплазматическая сеть D – оптическая плотность Dоп – оптическая плотность опытного образца Dст – оптическая плотность стандартного образца Dк – оптическая плотность контрольного образца Dх – оптическая плотность исследуемого образца КМ – константа Михаэлиса Vmax – максимальная скорость реакции |
Техника безопасности при работе в биохимической лаборатории
1. Общие требования безопасности
Для обеспечения безопасности труда сотрудников биохимической лаборатории следует руководствоваться международными стандартами надлежащей лабораторной практики (GLP, Good Laboratory Practice), а также общегосударственными законами и ведомственными документами по технике безопасности при проведении работ в лаборатории.
Важным элементом обеспечения безопасных условий работы является правильная организация труда сотрудников лаборатории, рационализация работ.
Во время работы в лаборатории следует неукоснительно соблюдать правила техники безопасности.
Во время работы необходимо соблюдать правила личной гигиены.
Каждый работающий должен быть полностью информирован о требованиях по безопасности труда, принятых в лаборатории и о нахождении в рабочих помещениях средств противопожарной безопасности и аптечки первой помощи.
Для ознакомления с правилами безопасного проведения работ организуется регулярное проведение инструктажа сотрудников по технике безопасности. Результаты инструктажа заносятся в специальный журнал.
Курить в лаборатории запрещается.
Помещения лаборатории должны быть оборудованы специальными контейнерами для сбора мусора и производственных отходов. Утилизация отходов должна проводиться регулярно в соответствии со специальными требованиями по утилизации отходов.
Помещения лаборатории должны быть оборудованы местами хранения повседневной и спецодежды, индивидуальных средств защиты, а также специально выделенными местами для переодевания.
Все помещения лаборатории должны быть оборудованы аптечками для оказания первой (неотложной) помощи.
В каждой лаборатории должны быть хорошая вентиляция, горячий и холодный водопровод, проводка технического тока, канализация, установки для дистилляции воды.
В качестве спецодежды в лаборатории используются лабораторные халаты и перчатки.
Халаты должны быть достаточно длинными и застегиваться полностью, при этом быть закрытыми спереди. Рукава должны плотно охватывать запястья. Перчатки должны быть удобными и достаточно длинными.
Защита глаз обеспечивается защитными очками с противоударными стеклами и защитными масками различной конструкции.
В случае необходимости для защиты органов дыхания используют респираторы различного типа (в зависимости от степени опасности).
Одноразовые средства защиты должны удаляться сразу после загрязнения.
Все химические вещества (реактивы), используемые в биохимической лаборатории, подразделяются на 8 групп хранения в зависимости от степени их опасности. Особенности правил безопасной работы с определенными реактивами и требования к их хранению зависят от отнесения вещества к той или иной группе хранения (см. таблицу).
Таблица