- •1. Взаимодействие фотонов оптического излучения с молекулами. Квантово-механические основы и последствия.
- •1.1. Основные характеристики оптического излучения
- •1.2. Основные квантово-механические механизмы взаимодействия оптического излучения с атомами и молекулами
- •1.3. Электронные переходы в атомах и молекулах при поглощении квантов оптического излучения.
- •2. Законы поглощения света веществом. Спектрофотометрический анализ. Особенности спектрофотометрии биологических объектов. Некоторые специальные методы спектрофотометрического анализа.
- •2.1. Количественное описание поглощения света растворами. Закон Бугера-Ламберта-Бера.
- •2.2. Условия выполнения закона Бугера-Ламберта-Бера.
- •2.3. Качественный и количественный спектрофотометрический анализ.
- •2.3.1. Качественный спектрофотометрический анализ.
- •2.3.2. Количественный спектрофотометрический анализ.
- •2.4. Некоторые специальные методы спектрофотометрии
- •2.5. Особенности спектрофотометрии биологических объектов
- •Оптические неоднородности
- •3. Вторичное излучение света молекулами объекта. Люминесцентный анализ и особенности его использования для исследования биологических объектов.
- •3.1. Явление фотолюминесценции
- •3.2. Электронные переходы в возбужденной молекуле. Законы люминесценции.
- •3.3. Зависимость интенсивности фотолюминесценции от концентрации люминесцирующих молекул. Люминесцентный анализ.
- •3.4. Методы регистрации фотолюминесценции. Спектрофлуориметры. Особенности флуориметрии биологических объектов.
- •3.5. Время жизни возбужденного состояния молекул. Связь между временем жизни возбужденных состояний и квантовым выходом фотолюминесценции.
- •3.6. Влияние окружения люминесцирующих молекул на параметры фотолюминесценции. Флуоресцентные зонды и метки.
- •3.7. Причины снижения интенсивности фотолюминесценции в биологических объектах. Тушение фотолюминесценции. Миграция энергии электронного возбуждения.
- •3.8. Поляризация фотолюминесценции.
- •3.9. Замедленная флуоресценция и фосфоресценция.
- •3.10. Хемилюминесценция биологических систем. Хемилюминесцентный анализ.
- •3.11. Проточная цитофлуориметрия.
- •3.12. Влияние размера люминесцирующей полупроводниковой частицы на ее свойства как люминофора. Квантовые точки.
- •В обычных полупроводниках радиус экситона Бора (ах) определяет размер областей электронного возбуждения.
- •Применение квантовых точек в качестве флуорофоров в медицине и биологии
- •Молекулярные сенсоры
- •Молекулярная диагностика
- •Гибридные молекулярные устройства
- •4.Биофизические основы некоторых фотобиологических процессов. Применение оптического излучения в медицине.
- •4.1. Общие закономерности фотохимических процессов в биомолекулах.
- •4.1.1. Кинетика однофотонных необратимых фотохимических реакций
- •4.1.2. Кинетика однофотонных обратимых фотохимических реакций
- •4.1.2. Кинетика многофотонных фотохимических реакций
- •4.2. Спектры действия фотопревращений молекул и фотобиологических процессов.
- •4.2.1 Спектры действия фотобиологических эффект при небольшой постоянной дозе облучения
- •4.2.2.Спектры действия при постоянной величине фотобиологического эффекта.
- •4.2.3.Спектры действия биологических ответов, зависящих от скорости фотопревращения активных молекул.
- •4.3. Фотомодификация олигомерных и однокомпонентных белков под действием ультрафиолетового излучения.
- •4.3.1. Естественное (солнечное) ультрафиолетовое излучение.
- •4.3.2. Кинетика фотоинактивации белковых молекул.
- •4.3.3. Природа первичных продуктов фотолиза аминокислот и их остатков в белках.
- •Значения для
- •4.4. Действие ультрафиолетового излучения на биологические мембраны.
- •4.5. Действие ультрафиолетового излучения на нуклеиновые кислоты.
4.2.3.Спектры действия биологических ответов, зависящих от скорости фотопревращения активных молекул.
Некоторые фотобиологические реакции, например, развитие зрительного ответа, зависят скорости превращения ответственных за них молекул. Иными словами, выполняется зависимость:
где N – концентрация активных молекул.
В таких случаях бывает удобно измерять величину интенсивности (J0) или потока (0) излучения, действие которого в течение небольшого времени (t0) вызывает появление эффекта стандартной величины (). Если рассматриваемые условия соблюдены, будут выполняться зависимости:
(136)
Выражение (136)-б справедливо для тех случаев, когда поглощение объекта мало (оптическая плотность много меньше 1). Именно в такой ситуации измеренный спектр действия рассматриваемого фотоэффекта будет совпадать со спектром поглощения молекул-акцепторов фотонов.
4.3. Фотомодификация олигомерных и однокомпонентных белков под действием ультрафиолетового излучения.
4.3.1. Естественное (солнечное) ультрафиолетовое излучение.
Солнечное излучение, падающее на земную атмосферу, содержит значительную примесь квантов ультрафиолетового спектрального диапазона. Сказанное можно иллюстрировать следующими цифрами: в области от длин волн 200 до 310 нм (на эту область приходится поглощение большинства биологически значимых молекул) интенсивность солнечного излучения у поверхности атмосферы составляет порядка 1019 квант/(м2с). Если бы все это излучение достигало поверхности Земли, клетки поверхностных слоев открытых участков кожи человека, например, погибли бы за несколько секунд. К счастью, этого не наблюдается, поскольку практически все жесткое УФ излучение Солнца задерживается озоновым слоем земной атмосферы, располагающимся на высоте от 15 до 45 км. Больше всего концентрация озона в атмосфере в слое от 25 до 30 км от поверхности планеты. По своей способности к поглощению УФ излучения озоновый слой земной атмосферы при 0оС и давлении 100 кПа эквивалентен слою чистого озона толщиной 3 мм. В максимуме поглощения озона (находящемся около 260 нм) интенсивность УФ излучения Солнца после прохождения озонового слоя атмосферы снижается в 1040 раз. Реально до земной поверхности доходит только длинноволновая часть солнечного УФ излучения с длинами волн свыше 295 нм, да и это излучение значимо ослаблено. Такое излучение, в целом, благоприятно сказывается на живых организмах и даже необходимо в ряде случаев для нормального функционирования ряда систем.
Концентрация озона в озоновом слое поддерживается на относительно постоянном уровне за счет ряда обратимых фотохимических и темновых реакций:
М и Р здесь – соответственно некоторые попадающие в атмосферу естественные и искусственные вещества и продукты их окисления.
Процесс продукции озона протекает за счет поглощения молекулярным кислородом излучения в диапазоне от 100 до 230 нм, с максимумом эффекта при 150 нм.
К сожалению, в последнее время в результате развития промышленного производства в атмосферу поступает значительное количество загрязняющих веществ (например, NO, ClO и др.), которые приводят к уменьшению концентрации озона в озоновом слое атмосферы. Потенциально накопление подобных соединений может привести к тому, что до поверхности Земли будет доходить коротковолновое ультрафиолетовое излучение (с длинами волн короче 200 нм), биологические эффекты которого близки к биологическим эффектам ионизирующей радиации. Естественно, такой ход событий представляется крайне опасным для всех живых организмов.
Но и УФ излучение с большими длинами волн естественного и искусственного (получаемое от искусственных источников) происхождения при действии на живые организмы вызывает большое количество различных фотобиологических процессов. В их основе лежат те фотохимические изменения, которые развиваются в белках, нуклеиновых кислотах, липидах и ряде других компонентах живой ткани, которые происходят под влиянием этого излучения.