Метод Пигаревского (модифицированный).

П р и н ц и п . Избирательная окраска кат'ион-

ного белка гранулоцитов прочным зеленым при

рН 8,1—8,2.

Р е а к т и в ы . 1. Спиртовой раствор форма-

лина (1 мл формалина и 19 мл абсолютного

этилового спирта). 2. 0,2 М раствор триса: 24,2 г

триса (оксиметил) аминометана растворяют в

1 л дистиллированной воды. 3. 0,1 н. НС1. 4. Ме-

таноловый трис-буфер (25 мл реактива № 2

смешивают с 22,5 мл реактива № 3 и 52,5 мл

метанола). 5. Забуференный спиртовой раствор

прочного зеленого (рН 8,1—8,2): 100 мг прочно-

го зеленого растворяют в 100 мл реактива № 4.

Определяют рН через сутки после приготовле-

ния реактива и выравнивают его добавлением

в раствор порошка сухого триса (при рН ниже

8,1) или слабого раствора НС1 (рН выше 8,2).

Установленная величина рН стабильна при ра-

боте в течение 4 мес. Раствор хранить в стеклян-

ной посуде с притертой пробкой (можно при

комнатной температуре). 6. 0,25 % водный раст-

вор азура А: 250 мг азура А растворяют в 100 мл

дистиллированной воды. Краситель стойкий.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . 1.

рН-Метр. 2. Весы.

Х о д о п р е д е л е н и я . Высушенные на

воздухе мазки фиксируют в спиртовом растворе

формалина 10—15 с. Во избежание фоновой

окраски можно использовать свежеприготовлен-

ные нефиксированные мазки (не позже чем через

48 ч после приготовления, препараты более дли-

тельного срока необходимо фиксировать). Маз-

ки окрашивают забуференным спиртовым раст-

вором прочного зеленого (реактива № 5) в те-

чение 20 мин. Быстро ополаскивают дистиллиро-

ванной водой. Окрашивают водным раствором

азура А в течение 15—20 с. Смывают мазки

дистиллированной водой и высушивают. При

микроскопии с желтым или оранжевым свето-

фильтром катионный белок в цитоплазме клеток

имеет вид ярко-зеленых гранул.

В о с п р о и з в о д и м о с т ь м е т о д а : ко-

эффициент вариации V = 2,9 % для нормальных

134

величин и 5,2 % для патологических (не превы-

шает допустимой величины).

Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У взрослых

в возрасте 20—30 лет СЦК равен для мужчин

1,58 + 0,01 и для женщин 1,58 + 0,03. Более вы-

сокие значения получены у детей в возрасте

1 — 12 мес (1,89,03) и 1—3 лет (1,96 + 0,03).

Метод с бромфеноловым синим (по м. Г. Шу-

бину). П р и н ц и п . Избирательная окраска ка-

тионного белка бромфеноловым синим.

Р е а к т и в ы . 1.5% раствор сульфосалици-

ловой кислоты (5 г сульфосалициловой кислоты

растворяют в 95 мл дистиллированной воды).

2. 0,05 М раствор буры рН 9,55 (19,1 г буры

растворяют в 1 л дистиллированной воды).

3. 0,1 М раствор однозамещенного фосфата

калия (13,6 г КН2РО4 растворяют в 1 л дистил-

лированной воды). 4. 0,05 М боратный буфер

рН 8,2 (6,13 мл реактива № 2 добавляют 3,87 мл

реактива № 3, а затем доводят реактивом 3 до

рН 8,2). 5. 0,1 % раствор бромфенолового си-

него в 0,05 М боратном буфере (100 мг сухого

бромфенолового синего растворяют в 100 мл

реактива № 4). 6. 1 % водный раствор сафра-

нина или 0,05 % раствор основного фуксина.

Последний готовят перед употреблением: рас-

творяют 50 мг основного фуксина в 100 мл кипя-

щей дистиллированной воды.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . 1.

рН-Метр. 2. Весы. 3. Газовая или электрическая

плитка.

Ход о п р е д е л е н и я . Фиксируют мазки

в 5 % растворе сульфосалициловой кислоты

в течение 60—90 с. Тщательно промывают дис-

тиллированной водой и высушивают. Окраши-

вают 0,1 % раствором бромфенолового синего

в боратном буфере (реактив № 5) в течение

1—2 мин. Промывают в трех сменах 0,05 М бо-

ратного буфера (реактив № 4) по 1—3 мин.

Высушивают и докрашивают 1 % раствором

сафранина в течение 30—60с или 0,05 % раство-

ром основного фуксина в течение 1—2 с. Промы-

вают проточной водопроводной водой и высу-

шивают. Катионный белок выявляется в цито-

плазме клеток в виде синих гранул.

В о с п р о и з в о д и м о с т ь м е т о д а . От-

носительная стандартная ошибка для группы

здоровых составила 5,2 %.

Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У здоровых

в нейтрофилах обнаружено 123+1,5 ед. или

СЦК 1,23 + 0,015, при этом не отмечено разли-

чий у здоровых обоего пола. Протеинположи-

тельные нейтрофилы составляют у мужчин

83+1,4 %, у женщин 86 + 0,6 %.

К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Снижение

катионного белка в нейтрофилах характерно

для острого воспалительного процесса; наблю-

дается в разгаре различных инфекционных за-

болеваний бактериальной и вирусной этиоло-

гии. Период выздоровления сопровождается

нормализацией показателя. Изменения содер-

жания лизосомального катионного белка кор-

релируют со степенью тяжести заболевания.

Л и т е р а т у р а . Мазинг Ю. А., Старосель-

ская И. Я. Лаб. дело, 1981, № 10, стр. 582—

584; Нагоев Б. С. Катионный белок лейкоцитов

и его значение: Методические указания.— Наль-

чик, 1982.— 67 с.; Пигаревский В. Е., Ма-

зинг Ю. А. Лаб. дело, 1981, № 10, с. 579—582;

Шубин М. Г. Цитология, 1974, № 10, с. 1321 —

1322.

ЛИПИДЫ локализуются в цитоплазме кле-

ток главным образом в мембранах органелл и

обнаруживаются преимущественно в нейтро-

фильных гранулоцитах. Играют важную роль,

в проницаемости мембран. Цитохимическое ис-

следование основано на применении красящих

веществ, растворяющихся в жирах (судан I I I ,

судан IV, черный судан и др.). Для выявления

нейтрального жира пользуются судаком I I I , ок-

рашивающим жир в оранжевый цвет. Липоиды

выявляются лучше Суданом черным (черное ок-

рашивание).