3.3.9. Цитохимические исследования

Эритроцитов

Цитохимические исследования отличаются

простотой, не требуют специального оборудова-

ния и дают ориентировочное представление о ко-

личестве исследуемого вещества. Исследования

эритроцитов проводят с целью выявления раз-

личных внутриклеточных включений, наличия

разных форм гемоглобина, ферментных нару-

шений.

Сидероциты и сидеробласты — это эритро-

циты и эритробласты (нормобласты), содержа-

щие в цитоплазме негемоглобиновое железо в

виде гемосидерина и ферритина.

П р и н ц и п . Окраска с помощью реакции

на берлинскую лазурь и образование внутри-

клеточных гранул синего цвета.

Р е а к т и в ы . 1. 2% раствор железисто-

синеродистого калия. 2. 0,1 н. раствор НС1

(8,2 мл концентрированной НС1 и дистиллиро-

ванной воды до 1 л). 3. 0,1 % раствор сафрани-

на. 4. Метиловый спирт.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е .

Микроскоп.

Х о д о п р е д е л е н и я . Фиксируют мазки

в метиловом спирте 10—20 мин и высушивают

на воздухе. Помещают в смесь равных частей

растворов 1 и 2 при температуре 50—56 °С

на 15—20 мин. Промывают в проточной воде

10—15 мин и ополаскивают дистиллированной

водой. Докрашивают раствором сафранина 3—

5 с.

Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . В перифе-

рической крови число сидероцитов не превы-

шает 1,1 % и составляет в среднем 0,6 + 0,04%,

в костном мозге их несколько больше—0,9 +

+ 0,09% (в среднем 0,2—2,1%), количество

сидеробластов (ядерных эритроцитов с железо-

содержащими гранулами) в костном мозге

23,7 + 2,4 %.

К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Снижение

сидероцитов и сидеробластов характерно для

железодефицитных анемий. Повышение железо-

содержащих клеток наблюдается при гемолити-

ческих анемиях, гипопластических анемиях, по-

сле операции спленэктомии.

Л и т е р а т у р а . Цитологические аспекты

заболеваний системы крови/Под ред. Э. И. Те-

рентьевой, Г. И. Козинца.— М.: Медицина,

1978, с. 162.

Фетальный гемоглобин. Метод Ветке.

П р и н ц и п . Элюция гемоглобина кислотой с

докраской мазков дает возможность отличить

эритроциты, содержащие фетальный гемогло-

бин, по сохраненной окраске в отличие от обес-

цвеченных эритроцитов, содержащих гемогло-

бин А.

Р е а к т и в ы . 1. Цитратно-фосфатный бу-

фер (рН 3,2): 24,7 мл 0,2 М раствора Na2HPO4

(35,6 г Na2HPO4 • 2Н2О и до 1 л дистиллирован-

ной воды) и 75,3 мл 0,1 М раствора лимонной

кислоты (21,01 г лимонной кислоты и до 1 л ди-

стиллированной воды). 2. 1 % раствор метило-

вого фиолетового или 1 % раствор эозина. Луч-

шие результаты дает докраска метиловым фио-

летовым. 3. Этиловый спирт 80 %.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . 1 .

Микроскоп. 2. Термостат на 37 °С.

Х о д о п р е д е л е н и я . Фиксируют мазки

крови в 80 % этиловом спирте 5 мин. Промы-

вают дистиллированной водой и высушивают.

Погружают мазки на 5 мин в прогретый при

37 °С в течение 30 мин цитратно-фосфатный

буфер (для элюции гемоглобина), периодически

помешивая раствор стеклянной палочкой для

удаления пузырьков воздуха. Ополаскивают

121

мазки дистиллированной водой, высушивают

фильтровальной бумагой. Докрашивают реакти-

вом 2 в течение 2—3 мин. Промывают дистил-

лированной водой и высушивают.

Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У взрослых

встречаются единичные окрашенные эритроциты

(содержащие гемоглобин F); увеличение числа

окрашенных эритроцитов наблюдается у ново-

рожденных и детей до 5-месячного возраста.

К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Увеличе-

ние числа эритроцитов с гемоглобином F наблю-

дается у больных талассемией, особенно при

гомозиготной форме.

Л и т е р а т у р а . Исаева Е. Г., Короле-

ва А. М. Лаб. дело, 1965, № 4, с. 201; Betke R.,

Kleinhauer E. Blut, 1958, Bd 5, S. 241.

Активность Г-6-ФД (К.Ф.1.1.1.49). П р и н -

ц и п . Окисление глюкозо-6-фосфата в присут-

ствии Г-6-ФД при участии NADP, который

восстанавливается в NADP-H; под влиянием

последнего тетразолий выявляется в виде гра-

нул формазана.

Р е а к т и в ы . 1. 10% раствор формалина.

2. Инкубационная среда: глюкозо-6-фосфат —

3 мг в 1 мл, NADP — 1 мг в 1 мл, магния

хлорид — 0,1 М в 0,2 мл, нитросиний тетразо-

лий — 1 мг в 1 мл, трис-буфер 0,25 М (рН 7,6) —

2,3 мл, феназин-метасульфат — 0,5 мл.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е .

1. Термостат на 37 °С. 2. Микроскоп.

Х о д и с с л е д о в а н и я . На нефиксиро-

ванные мазки крови наносят 0,1—0,2 мл инку-

бационной среды и помещают мазки в гори-

зонтальном положении в термостат на 1 ч

15 мин. Фиксируют в 10 % растворе формалина

10 мин при комнатной температуре. Высушива-

ют на воздухе и микроскопируют.

Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . В эритро-

цитах обнаруживают 10—20 гранул формазана.

К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Снижение

числа гранул формазана в эритроцитах или их

отсутствие указывает на дефицит Г-6-ФД.__