35 Мл буферного раствора.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е .

Холодильник.

Х о д и с с л е д о в а н и я . Высохшие на воз-

духе мазки фиксируют в 10 % растворе фор-

малина в абсолютном метаноле при температуре

О—5 °С в течение 30 с. На высохшие мазки нано-

сят инкубационную среду после фильтрования

и оставляют мазки при комнатной температуре

на 8—10 мин. Ополаскивают в проточной воде

в течение 10 с. Докрашивают метиловым зеле-

ным в течение 15 мин или гематоксилином Май-

ера 3—4 мин.

Метод азосочетания (модификация М. Г. Шу-

бича). П р и н ц и п см. метод азосочетания по

Кеплоу.

Р е а к т и в ы . I. 0,5 % раствор целлоидина

в смеси равных количеств абсолютного спирта

и эфира. Целлоидин можно готовить из кино-

и фотопленок по методике Меркулова: удалить

слой эмульсии после вымачивания в горячей во-

де или щелочи, выдержать 5—10 дней в трех

сменах хлороформа, промыть спиртом, высу-

шить, мелко нарезать и растворить в смеси

абсолютного спирта с эфиром. 2. 0,5 М раствор

тетрабората рН 9,18 [19,1 г тетрабората натрия

(бура) растворить и довести дистиллированной

водой до 1 л]. Раствор стойкий. 3. 0,1 % рас-

твор а-нафтилфосфата в растворе тетрабората

(готовят перед употреблением). 4. 0,2 % раствор

диазоля синего 0 в растворе тетрабората (гото-

вят перед употреблением и фильтруют в защи-

щенном от света месте). 5. Гематаль 8 Бейкера:

один объем 0,1 % гематеина, приготовленного

на 50 % водном растворе этиленгликоля, смеши-

вают с одним объемом 1,6 % водного раствора

сульфата алюминия. Вместо гематаля можно

использовать гематоксилин: 1 г краски раство-

ряют в 50 мл дистиллированной воды, доводят

до кипения, доливают 50 мл дистиллированной

воды, добавляют 0,02 г йодата натрия и 5 г

алюмокалиевых квасцов, встряхивают до раст-

ворения и охлаждают. 6. Инкубационная среда

(готовят перед употреблением); равные коли-

чества реактивов 3 и 4.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . Хо-

лодильник.

Ход о п р е д е л е н и я . Мазки фиксируют

в 0,5 % растворе целлоидина в течение 3—5 с.

После фиксации целлоидин с обратной стороны

предметного стекла удаляют салфеткой, стекла

ставят в вертикальном положении на фильтро-

вальную бумагу и дают им высохнуть. Инкуби-

руют в инкубационной среде при комнатной

температуре в защищенном от света месте в те-

чение 30 мин. Промывают в проточной воде в те-

чение 5—10 мин и ополаскивают в дистиллиро-

ванной воде. Докрашивают ядра красителем

(реактив 5). При использовании гематаля 8 маз-

ки окрашивают 18—24 ч, затем ополаскивают

в дистиллированной и проточной воде и высу-

шивают. При использовании гематоксилина маз-

ки окрашивают 30—60 мин, ополаскивают в тет-

раборатном буфере, разведенном водопроводной

водой, промывают водой и высушивают.

Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У здоровых

людей большинство сегментоядерных нейтрофи-

лов являются фосфатазоотрицательными и толь-

ко в 20—30 % клеток выявлена слабая актив-

ность фермента ( + )• По данным М. Г. Шубича

и Б. С. Нагоева, активность фосфатазы для

здоровых обоего пола составляет 26,6 ед.,

или СЦК 0,26 + 0,006. Выявлено достоверное

различие между показателями энзиматической

активности у мужчин и женщин (соответственно

21 Ѓ}0,7 и 31 Ѓ}0,8 ед.).

К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Наиболь-

шее диагностическое значение имеет определе-

ние активности фермента при гемобластозах;

снижение активности характерно для хроничес-

кого миелолейкоза, повышение — рассматри-

вают как один из признаков эритремии. Повы-

шение активности наблюдается также при вос-

палительных процессах, интоксикациях, опухо-

лях, коллагенозах, циррозах печени. Показатель

может быть использован как дифференциально-

128

диагностический признак при лейкемоидных ре-

акциях (активность фермента повышена) и хро-

ническом миелолейкозе. Снижение активности

фермента часто сопутствует вирусному гепатиту,

инфекционному мононуклеозу и другим вирус-

ным инфекциям, лучевой болезни.

Л и т е р а т у р а . Буйкис И. М., Руденс Ю. Ф.

Гистохимическое определение активности ще-

лочной фосфатазы методом одновременного

азосочетания.— Вопросы лейкозологии (Рига),

1969, № 1,с. 369—376; Шубин М. Г.— Лаб. дело,

1965, № 1, с. 10—14; Шубин М. Г., Нагоев Б. С.

Щелочная фосфатаза лейкоцитов в норме и па-

тологии.— М.: Медицина, 1980, с. 41; Kaplow L.

Blood, 1955, vol. 10, № 10, p. 1023-1029.

КИСЛАЯ ФОСФАТАЗА (К. Ф. 3.1.3.2). Об-

наруживают преимущественно в нейтрофилах

и лимфоцитах крови; локализацию связывают

с лизосомами цитоплазмы клеток. Кислая фос-

фатаза является гидролитическим ферментом

с оптимумом действия рН 5,2. Для цитохими-

ческого исследования чаще используют методы

азосочетания.

Метод азосочетания Берстона (модификация

Ю. Ф. Руденса, И. М. Буйкиса). П р и н ц и п см.

Метод азосочетания по Кеплоу.

Реактивы. 1. 0,1 М раствор цитратного буфе-

ра (рН 5,2). 2. 0,05 М раствор хлорида магния.

3. Нафтол-АS-Фосфат (можно использовать

нафтол-АS-ТR-фосфат или нафтол-АS-В1-фос-

фат. 4. Диметилформамид. 5. Диазоль синий

2С или прочный синий ВВ. 6. Краситель Рома-

новского — Гимзы. 7. Изотонический раствор

хлорида натрия. 8. Инкубационная среда: 10 мг

нафтол-АS-Фосфата, растворенного в 5 мл диме-

тилформамида; 15 мл 0,1 М цитратного буфера

рН 5,2, 45 мл дистиллированной воды, 5 мл

раствора хлорида магния, 50 мг диазоля синего.

Готовят перед употреблением и используют по-

сле фильтрования.

С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . Тер-

мостат.

Ход и с с л е д о в а н и я . Нефиксирован-

ные мазки инкубируют в инкубационной среде

при 37 °С в течение 2 ч. Промывают изотони-

ческим раствором хлорида натрия. Докрашива-

ют красителем Романовского — Гимзы. Промы-

вают в проточной воде. Активность фермента

выявляется в виде синей окраски.

Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . В сегмен-

тоядерных нейтрофилах активность фермента

равна 38,6,82 ед., или СЦК 0,386 + 0,028, в

лимфоцитах —26,9Ѓ}1,94 ед., или СЦК 0,268Ѓ}

Ѓ}0,019. У детей активность кислой фосфатазы

в нейтрофилах выше, чем у взрослых.

К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Повыше-

ние активности наблюдается в нейтрофилах при

воспалительных процессах, при туберкулезе, ин-

фаркте миокарда, острых хирургических заболе-

ваниях, злокачественных опухолях. При этом

следует учитывать, что высокие цифры актив-

ности фермента могут быть результатом повы-

шения активности щелочной фосфатазы в ней-

трофилах, так как активность последней может

выявляться и в кислой среде. Поскольку при

всех указанных выше заболеваниях наблюда-

ется повышение активности и щелочной фосфа-

тазы, а при цитохимическом методе исследова-

ния обоих ферментов используют единый суб-

страт, при получении высокой активности кис-

лой фосфатазы М. Г. Шубич и И. В. Нестерова

предлагают проводить повторное исследование

после ингибирования щелочной фосфатазы с по-

мощью ЭДТА.

Повышение активности кислой фосфатазы

в лимфоцитах отмечается при иммунизации,

различных аллергических заболеваниях.

В властных клетках при острых лейкозах

характер распределения продукта реакции раз-

личен в зависимости от формы лейкоза. При

острых лимфобластных формах активность вы-

является в гранулярной форме, при миелоб-

ластных — в диффузной форме.

Л и т е р а т у р а . Берстон М. Гистохимия

ферментов.— М.: Мир, 1965, с. 215; Руденс Ю. Ф.,

Буйкис И. М. Вопросы лейкозологии (Рига),