- •Тема 3. Иммунное воспаление и инфекционные болезни. Вич инфекция: імунопатогенез, иммунодиагностика, иммунокоррекция.
- •Задания для проверки начального уровня знаний.
- •Источники учебной информации
- •Механизмы иммунной защиты при бактериальных, грибковых и протозойных инфекциях
- •Особенности иммунитета при бактериальных инфекциях
- •Особенности иммунитета при вирусных инфекциях
- •Профилактика и лечение гриппа
- •Особенности иммунитета при бактериальных инфекциях, имеющих первично-хроническое течение
- •Особенности иммунитета при грибковых заболеваниях
- •Особенности иммунитета при протозойных заболеваниях
- •Особенности иммунитета при глистных инвазиях
- •Лечение и профилактика гельминтозов
- •Динамика лейко- и иммунограмм при инфекционных заболеваниях
- •Классификация иммунограмм при инфекционном воспалении
- •Некоторые особенности иммунограммы при инфекционных заболеваниях
- •Вич инфекция: иммунопатогенез, иммунодиагностика, иммунокоррекция
- •Лабораторная диагностика вич-инфекции и спиДа
- •Антиретровирусные химиопрепараты
- •Задания для заключительного контроля знаний
- •Технологіна карта проведення практичоного заняття
Лабораторная диагностика вич-инфекции и спиДа
Лабораторна діагностика ґрунтується на виявленні маркерів вірусу й специфічних антитіл у біологічних рідинах.
Для постановки діагнозу використаються наступні методики:
Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) – високочутливий метод виявлення вірусної РНК.
Гибридизаційний аналіз (ГА) – пошук певних нуклеінових кислот і визначення їхньої кількості по зв'язуванню із ДНК-зондами;
Реакція імунофлюоресценції (РІФ) – виявлення антигенів у лейкоцитах крові. Метод специфічний, але низкочутливий.
Імуноферментний аналіз (ІФА) високочутливий метод виявлення антитіл до ВІЛ у сироватці хворого або носія.
Імуноблотінг – підтверджувальний тест. Метод виявляє антитіла до одномго або декількох оболонкових або серцеподібним білкам ВІЛ. Результат вважається позитивним якщо виявлені антитіла до будь-яким двох із трьох основних антигенів ВІЛ - р24, gp 41 і gp 120 (або gp 160).
Проточна цитометрія дозволяє проводити визначення субпопуляцій лімфоцитів і виявляти фенотипічні маркери, що характеризують зміни функціонального стану клітин.
Определение Антител к ВИЧ 1-2 в крови Антитела к ВИЧ 1—2 в сыворотке крови в норме отсутствуют. Определение антител к ВИЧ является основным методом лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции. В основе метода лежит ИФА (чувствительность более 99,5 %, специфичность более 99,8 %). Антитела к ВИЧ появляются у 90-95 % инфицированных в течение З мес. после заражения, у 5-9 % — через 6 мес. и 0,5-1 % — в более поздние сроки. В стадии СПИДа количество антител может снижаться вплоть до полного исчезно вения. При получении положительного ответа выявления антител к ВИЧ во избежание ложноположительных результатов анализ должен быть повторен еще 1 или 2 раза, желательно с использованием диагностикума другой серии. Положительным результатом считается тот, если из двух оба или из трех два анализа отчетливо выявили антитела.
Иммуноблоттинг на антитела к вирусным белкам ВИЧ в сыворотке крови Антитела к вирусным белкам ВИЧ в сыворотке крови в норме отсутствуют. Метод ИФА по определению антител к ВИЧ является скрининговым. При получении положительного результата для подтверждения его специфичности используется метод иммуноблоттинга Western-blot - встречная преципитация в геле антител в сыворотке крови больного с различными вирусными белками, подвергнутыми разделению по молекулярной массе с помощью электрофореза и нанесенными на нитроцеллюлозу. Определяются антитела к вирусным белкам gp41, gpl20, gpl60, р24, р18, р17 и др. Обнаружение антител к одному из гликопротеинов - gp41, gpl20, gpl60 следует считать положительным результатом. В случае обнаружения антител к другим белкам вируса результат считается сомнительным, и такого человека следует обследовать еще дважды - через 3 и 6 мес. Отсутствие антител к специфическим белкам ВИЧ означает, что ИФА дал ложноположительный результат. Вместе с тем в практической работе при оценке результатов метода иммуноблоттинга необходимо руководствоваться инструкцией, прилагаемой фирмой к используемому набору для исследования.
Антиген р24 в сыворотке крови Антиген р24 в сыворотке крови в норме отсутствует. Антиген р24 представляет собой белок стенки нуклеотида ВИЧ. Стадия первичных проявлений после инфицирования ВИЧ является следствием начала репликативного процесса. Антиген р24 появляется в крови спустя 2 нед. после инфицирования и может быть выявлен методом ИФА в период от 2 до 8 нед. Через 2 мес. от начала инфицирования антиген р24 исчезает из крови. В дальнейшем в клиническом течении ВИЧ-инфекции отмечается второй подъем содержания в крови белка р24. Он приходится на период формирования СПИДа. Существующие тест-системы ИФА для детекции антигена р24 используются для раннего обнаружения ВИЧ у доноров крови и детей, определения прогноза течения СПИДа и контроля за проводимой терапией у этих больных. Метод ИФА обладает высокой аналитической чувствительностью, что позволяет обнаруживать антиген р24 при ВИЧ-1 в сыворотке крови в концентрациях 5—10 пкг/мл и менее 0,5 нг/мл — при ВИЧ-2, и высокой специфичностью. Вместе с тем следует отметить, что уровень антигена р24 в крови подвержен индивидуальным вариациям, а это значит, что только 20—30 % пациентов могут быть выявлены с помощью данного исследования в ранний период после инфицирования.
Антитела к антигену р24 классов IgM и IgG появляются в крови начиная со 2-й недели, достигают пика в течение 2—4 нед. и держатся на таком уровне различное время: антитела класса IgM в течение нескольких месяцев, исчезая в течение года после инфицирования, а антитела IgG могут сохраняться годами.
Алгоритм диагностики ВИЧ-инфекции приведен на схеме 1, а на рис. 6 представлена динамика антител различных классов после ВИЧ-инфицирования.
Схема 1. Алгоритм диагностики ВИЧ-инфекции