При стафило-, стрептококковых инфекциях:
1 этап.
Бактериоскопическое Бактериологичекое Кровь
исследование исследование
(мазок, окраска по Посевы (все виды Сахарный МПБ
Граму) – ответ материала,кроме крови).
Сахарный МПА, кровяной агар,
ЖСА.
Инкубация в термостате при +370С – 24 часа.
2 этап
а) мазок, окраска по Граму б) изучение изолированных в) посев на кровяной МПА
колоний (характерная
форма, пигмент, гемолиз,
лецитиназная активность),
посев на скошенный МПА.
Инкубация в термостате +370С – 24 часа.
3 Этап.
- Изучение свойств чистой
культуры.
- Идентификация микробного
вида.
- Определение чувствительной
к антибиотикам.
Инкубация в термостате +370С – 24 часа.
4 Этап.
Учёт результатов, заключение
по совокупности всех биологических
признаков, окончательный ответ.
Приложение №2.
Определение активности ревматического процесса по наличию и титру анти – о – стрептолизина.
1 Этап: Определение о-стрептолизина, его рабочей дозы.
Ингридиенты |
Разведения О-стрептолизина |
|
||||||
Стрептолизин в мл |
0,05 |
0,10 |
0,15 |
0,20 |
0,25 |
0,30 |
- |
|
Физ. раствор в мл |
0,25 |
0,20 |
0,15 |
0,10 |
0,05 |
- |
0,3 |
|
Эритроциты 3% взвесь |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
|
В термостат на 30 мин. при +370С. |
||||||||
Учёт результатов |
Гемолиза нет |
Гемолиз эритроцитов |
Гемолиза нет |
|||||
Рабочая доза О-стрептолизина – это его минимальное количество, которое даёт чёткий чёткий гемолиз эритроцитов. В данном примере она равна 0,15 мл.
2 этап: Определение титра анти-О-стрептолизина.
Ингредиенты |
Опытные пробирки |
Контроль |
|||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Сыворотки (0,5:50) |
О-стрептолизина |
|
Разведения сыворотки больного, мл |
1:50 0,5 |
1:100 0,5 |
1:200 0,5 |
1:400 0,5 |
1:800 0,5 |
0,5 |
- |
О-стрептолизин в рабочей дозе, мл |
0,15 |
0,15 |
0,15 |
0,15 |
0,15 |
- |
0,15 |
Эритроциты 5% взвесь |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
Физ. раствор |
- |
- |
- |
- |
- |
0,15 |
0,5 |
В термостат на 30 мин. при +370С. |
|||||||
Учёт результатов |
Задержка гемолиза |
Гемолиз |
Нет гемолиза |
Гемолиз |
|||
Титр анти-О-стрептолизина – 1:200 (то максимальное разведение сыворотки с антителами к О-стрептолизину, которое ещё заделживает гемолиз.
Приложение № 3.
Определение титра антигиалуронидазы.
1 этап. Определение титра и рабочей дозы гиалуроновой кислоты.
Ингредиенты |
Пробирки |
|||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
||
Гиалуроновая кислота, мл |
0,05 |
0,1 |
0,2 |
0,25 |
0,3 |
|
Дистилированная вода, мл |
0,25 |
0,2 |
0,1 |
0,05 |
- |
|
В термостат, +370С на 30-40 мин. |
||||||
Уксусная кислота, капли |
2 кап. |
2 кап. |
2 кап. |
2 кап. |
2 кап. |
|
Учёт результатов |
Нет сгустка |
Сгусток |
||||
Рабочая доза равна 0,2 мл. Это то минимальное количество, которое под действием уксусной кислоты даёт сгусток.
2 этап. Определение титра гиалуронидазы.
Ингредиенты |
Пробирки |
|||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6к |
|
Гиалуронидаза, мл |
0,05 |
0,10 |
0,12 |
0,15 |
0,20 |
0,25 |
Дистилированная вода, до 0,25 мл |
0,20 |
0,15 |
0,13 |
0,10 |
0,05 |
- |
Гиалуроновая кислота в рабочей дозе, мл |
0,20 |
0,20 |
0,20 |
0,20 |
0,20 |
0,20 |
В термостат, +370С на 30 мин. |
||||||
Уксусная кислота |
2 кап. |
2 кап. |
2 кап. |
2 кап. |
2 кап. |
2 кап. |
В термостат, +370С на 30 мин. |
||||||
Учёт результатов |
Сгусток |
Нет сгустка |
||||
Титр гиалуронидазы 0,12 мл (минимальный объём при котором сгусток уже не образуется в результате разрушения гиалуроновой кислоты ферментом гиалуронидазы).
3 этап. Определение титра антигиалуронидазы (антител против
гиалуронидазы).
Ингредиенты |
Пробирки |
Контроли |
||||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Сыворотки 1:50 |
Гиалуро нидазы |
Гиалуроновой кислоты |
|
Сыворотка крови больного (разведения), мл |
1:50 0,5 |
1:100 05 |
1:400 0,5 |
1:800 0,5 |
1:1600 0,5 |
0,5 |
- |
- |
Гиалуронидаза в рабочей дозе, мл |
0,12 |
0,12 |
0,12 |
0,12 |
0,12 |
- |
0,12 |
- |
В термостат, +370С на 30-40 мин. |
||||||||
Гиалуроновая к-та в рабочей дозе, мл |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
0,2 |
- |
- |
0,2 |
Дистилированная вода, мл |
- |
- |
- |
- |
- |
0,32 |
0,7 |
0,62 |
Уксусная кислота |
2 кап. |
2 кап. |
2 кап. |
2 кап. |
2 кап. |
2 кап. |
2 кап. |
2 кап. |
В термостат, +370С на 30-40 мин. |
||||||||
Учёт результатов |
Сгусток |
Нет сгустка |
Есть |
|||||