25) Методы индикации вирусов при культивировании их в организме лабораторных животных

Индикацию, т.е. обнаружение факта размножения вируса, устанавливают на основании развития типичных признаков заболевания, патоморфологических изменений органов и тканей животных или положительной реакции гемагглютинации (РГА).

26)Что такое цпд? Виды цпд?

ЦПД - (цитопатическое действие вирусов) - деструктивные изменения отдельных клеток и клеточного монослоя, возникающие в результате продуктивной вирусной инфекции клеток и цитотоксического действия вирионов. В клеточном монослое ЦПД проявляется в форме сплошной или очаговой круглой или полиморфноклеточной дегенерации, образовании многоядерных клеток или клеточных симпластов, а также в пролиферативном разрастании клеток. В пораженных вирусом клетках ЦПД проявляется в пикнозе ядра, маргинации и зернистости хроматина, появлении включений, телец, кристаллов; в цитоплазме появляются вакуоли, наступает ее сморщивание и дегенерация. ЦПД используют для индикации и идентификации вирусов.

Виды: 1. Равномерная мелкозернистая деструкция клеток

(полиовирусы , вирусы Коксаки).

2. Очаговая мелкозернистая дегенерация клеток

(вирус гриппа).

З. Гроздевидная дегенерация клеток (аденовирусы).

4. Крупнозернистая равномерная деструкция клеток

(вирус герпеса).

5. симластообразование (вирус кори).

27) Механизм рга и ргАдс

на поверхности эритроцитов имеются рецепторы мукопротеидной природы, способные адсорбировать вирионЫ , а на поверхности гемагглютинирующих вирусов располагаются гемагтлютинины - сложные белковые тела с энзиматической активностью. При смешивании эритроцитов с вирусосодержащей жидкостью гемагтлютинины вируса при помощи фермента муциназы вступают во взаимодействие с рецепторами эритроцитов, в результате чего происходит адсорбция вирусов на эритроцитах. Вирионы, адсорбированные на одном эритроците, способны свободными поверхностями соединяться с другими эритроцитами, образуя при этом мостики между ними, что и приводит к склеиванию (агглютинации) эритроцитов. Адсорбция вирусов на эритроцитах является энзимэтическим процессом

28)Цветная реакция механизмы

При репродукции в ткани вирусов клетки гибнут и цвет среды не меняется. Добавление специфической сыворотки нейтрализует вирус, гибель клетки не происходит и индикатор ( феноловый красный) в кислой среде меняет свой цвет с малинового на желтый. При росте клеток, не пораженных вирусом, происходит накопление кислых продуктов метаболизма что приводит к изменению рн среды и цвета индикатора

29)Метод бляшек механизм.  В основе метода лежит образование в местах цитопатогенного действия вируса обесцвеченных пятен, так как пораженные клетки теряют способность сохранять или воспринимать витальные окрашивания. Пятна, или бляшки, представляют собой изолированные колонии вируса в однослойных культурах, видимые микроскопиически в виде неокрашенных округлых форм, четко выделяющиеся на фоне живых клеток, окрашенных в красный цвет.

30. Бактериофаги - бактериальные вирусы, вызывающие разрушение (лизис) бактерий и других микроорганизмов. Бактериофаги размножаются в клетках, лизируют их и переходят в др., как правило, молодые, растущие клетки. Бактериофаги состоят из головки округлой, гексагональной или палочковидной формы диаметром 45-140 нм и отростка толщиной 10-40 и длиной 100-200 нм (рис.). Другие Бактериофаги не имеют отростка; одни из них округлы, другие - нитевидны, размером 8х800 нм. Содержимое головки состоит преимущественно из РНК и небольшого количества белка. Отросток имеет вид полой трубки, окруженной чехлом, содержащим сократительные белки, подобные мышечным. У ряда Бактериофагов чехол способен сокращаться, обнажая часть стержня. На конце отростка у многих Бактериофаги имеется базальная пластинка с несколькими шиловидными или другие формы выступами. От пластинки отходят тонкие длинные нити, которые способствуют прикреплению фага к бактерии. Оболочки головки и отростка состоят из белков. Каждый Бактериофаг обладает специфическими антигенными свойствами, отличными от антигенов бактерии-хозяина и других фагов. Имеются антигены, общие для ряда фагов (особенно содержащих РНК). Некоторые фаги применяли для профилактики и лечения ряда бактериальных инфекционных болезней человека (дизентерия, брюшной тиф, холера, чума, стафилококковые и анаэробная инфекции и др.) и животных. Однако антибиотики и другие химиотерапевтические средства оказались эффективнее фагов, в связи с чем применение их с лечебной целью сузилось. Бактериофаги успешно применяются при определении вида бактерий, актиномицетов. Бактериофаги могут вредить производству антибиотиков, аминокислот, молочных продуктов, бактериальных удобрений и в других отраслях микробиологического синтеза.

31.Прионы - это белковые инфекционные частицы, имеющие вид фибрилл размером 10-20 х 200 нм, они вызывают у животных и человека энцефалопатии в условиях медленной вирусной инфекции. Вироиды - это небольшие молекулы кольцевой, суперспирализованной РНК, не содержащие белка и вызывающие заболевание растений.Прионные болезни — это группа заболеваний человека и животных, при которых происходит гибель нервных клеток головного мозга за счет накопления патологического белка (приона). Прионный белок существует в головном мозге и в норме, но при патологии он становится способным к формированию больших белковых агрегатов, мешающих работе нервной клетки. Белковые комплексы сначала накапливаются внутри клетки, а потом высвобождаются во внеклеточное пространство, где формируют «амилоидные бляшки».

32.Контаминация — попадание загрязнителей в образец или культуру;засорение (загрязнение) чистой культуры посторонними микроорганизмами. Деконтаминация—процесс уничтожения микробов в (на) каких-либо объектах. Д. осуществляют дезинфекцией или стерилизацией.Дезинфекция — комплекс мер по уничтожению патогенных микробов и резкое снижение общей микробной обсемененности материала или объекта. Стерилизация — обеспложивание, объектов, при кт уничтожаются все формы микроорганизмов. Асептика - совокупность мер, направленных на предупреждение попадания микробов в организм. Антисептика - комплекс мероприятий, направленных на уничтожение микробов в ране, патологическом очаге или организме в целом, на предупреждение или ликвидацию инфекционного воспалительного процесса.

33. Деконтаминация—процесс уничтожения микробов в (на) каких-либо объектах. Д. осуществляют дезинфекцией или стерилизацией. Цель в медицине – отрыв путей передачи, опосредованных мед.оборудованием или действиями врача, и снижение риска передачи инфекционных заболеваний.Воздействие на клеточные стенки гр+ бактерий и грибов должно состоять в разрушении оболочки из пептидогликана или хитина, так же в учете наличия в кл.стенкетейхоевых кислот. Разрушение пойдет по пептидным связям, по кислородным мостикам между гликозидными кольцами. Оболочка споры из денатурированного белка, следовательно мало нарушить структуру белка, надо разрушить вторичну структуру белка, по ковалентным связям: окислять амикислотные остатки или разрывать пептидные связи. У гр- над пептидогликановой оболочкой есть еще внешняя мембрана, где ЛПС, липопротеины и белки-порины. Необходимо определить мин.плотность необходимых нарушений хим.связей для нарушения целостности, стабильности и связаностикл.стенок. У вирусо надо не только разрушить белковую оболочку, но и уничтожить наследственную информацию. У вироидов белковой оболочки нет, только наслед.материал. Для уничтожения приона необходимо разрушить все молекулы, образующие его.

34. Физические факторы деконтаминации: температура, высушивание, фильтрование, лучистая энергия (уф и ионизирующее излучение), ультразвук, ионизированная плазма. Хим. Факторы: атибиотики, антисептики, дезинфектанты, консерванты, фенолы, галогены, спирты, ПАВ, соли тяж.металлов, красители, окислители, кислоты и щелочи, альдегиды.

35. Методы дезинфекции:

Механический, физический метод заключается в высокотемпературной обработке.Химический, биологический метод основан на использовании антагонизма различных видов микроорганизмов. Так, при использовании бактериофагов, то есть вирусов бактерий, уничтожаются стафилококки, синегнойная палочка, брюшнотифозные бактерии и т. д. Методы стерилизации: тепловая (прокаливание.Сухой жар, под давлением, текучий пар), газовая, химическая (перекись водорода, хлоргексидин, формальдегид, спирт), ультразвуком, уф и гамма-излучением, плазмой.

36.Предстерилизационная очистка предусматривает окончательное удаление остатков белковых, жировых, механических загрязнений и остаточных количеств лекарственных препаратов.Предстерилизационной очистке должны подвергаться все изделия, подлежащие стерилизации.Этапы предстерилизационной очистки: 1: промывание проточной водой после дезинфекции над раковиной в течение 30 секунд до полного уничтожения запаха дезсредств; 2: замачивание в моющем растворе при температуре воды 50°С на 15 минут шприцев и головок в разобранном состоянии; 3: мытье каждого изделия в этом же растворе, где проводилось замачивание, с помощью ерша в течение 30 секунд;4: споласкивание проточной водой; 5: споласкивание дистиллированной водой в течение 30 секунд;6: просушивание горячим воздухом при температуре +75..+87 в сушильных шкафах. Контроль качества методы: визуальный, бактериологический, химический, йодно-крахмальный. В материале после дез. И стерилиз. Должен быть хлор.

37. Автоклав: 1 атм 45 мин 120⁰, 2 атм 20 мин 132⁰. Газовый аппарат 30 мин. Р-ры хим. в-в. Ультразвук с моющим средством 15 мин. УФ и гамма-излучение 1 час. Плазмой 10-15 мин.

№38Современные методы стерилизации .контроль стерилизации. Физические методы: высокая тем.,ионизируещее излучение , фильтрование., глас- перленовый стерилизатор при тем=250гр.Комбенированные методы стерилизации:-газовая –изделия стерил от 4- 16 ч.контроль процесса ведут приборы.Плазменная стерилизация- 10 -15 мин, в зависимости от загрязнений.обьем камеры 1 л.Контроль: по показанию приборов.,с использованием физико – хим тестов.,биологические тесты, молекулярно-генетический метод контроля.( анаэробные, вирусы)

№ 39.правила техники безопасности при раб. С биоматериалом инф.ВИЧ. – заклеять открытые раны лейкопластырем.- использовать латексные перчатки однаразовые Во время работы перчатки обрабатывать 70% спиртом или другими дезинфектантами, - мыть руки с мылом немедленно после контакта с кровью или биологическими жидкостями организма; - защищать лицо – марлевой повязкой, глаза – очками или щитком. - обрабатывать поверхность рабочих столов, загрязненных кровью, немедленно 3% раствором хлорамина или 6% раствором перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства дважды с интервалом в 15 минут; - запрещать пипетирование ртом. Засасывание в капилляры производить только с помощью резиновых груш; - шприцы, иглы и катетеры сразу после использования помещают в специальный контейнер для дезинфекции и утилизации; - иметь на рабочем месте аптечки и достаточное количество дезинфицирующих средств.

№40. Микробный антагонизм- при котором один вид микробов угнетает развитие других, довольно широко распространен в природе.это -отношения между микроорганизмами выработались на протяжении длительного периода эволюции в борьбе за существование.

Хим факторы: Антибиотики- вещ-ва. Блокирующие ферментативный процесс в клетке,или разрушает основные ее структуры. Гликопротеиновой или протеиновая структура..Бактериоцины- в-ва, белковой природы,короткие пептидные цепочки, без ферментативной активности., действуя через специф. или неспециф. Клеточные рецепторы. Токсические продукты метаболизма- ислоты, эфиры, амины, сероводород, перекись. Формирование биопленки.

№41. Классификация антибиотиков по происхождению.1)из грибов, например рода Penicillium (пенициллин), рода Cephalosporium (цефалоспорины) 2)из актиномицетов; группа включает около 80% всех антибиотиков. Среди актиномицетов основное значение имеют представители рода Streptomyces, являющиеся продуцентами стрептомицина, эритромицина, левомицетина. 3)Антибиотики, продуцентами кт являются собственно бактерии.Bacillus и Pseudomonas,полимиксины, бацитрацины, грамицидин.4) животного происхождения; из рыбьего жира получают эктерицид, из молок рыб – экмолин, из эритроцитов – эритрин. 5) растительного происхождения. которые выделяют лук, чеснок, сосна, ель, сирень, другие растения. Антимикробным действием обладают многие растения, например, ромашка, шалфей, календула.