17.Получение фагорезистентных мутантов

Техника получения фагорезистентных мутантов

Для получения фагорезистентных мутантов используют культуру бактерий E. coli К-12 в стационарной фазе роста. На поверхность питательной 1,5 % среды в чашке Петри наносят 0,2 мл суспензии бактериофага Т-группы и равномерно распределяют шпателем. Чашки подсушивают до впитывания суспензии и затем на поверхность агара наносят 0,1 мл культуры E. coli К-12 и растирают стерильным шпателем. Чашки инкубируют при 37° С в течение 24 - 48 часов. В результате заражения чувствиительных клеток бактерий фагом происходит лизис клеток, а на поверхности агаризованной среды образуются колонии только тех клеток бактерий, которые являются фагорезистентными мутантами. Количество жизнеспособных клеток бактерий, взятых в эксперимент, определяют, производя высев из разведенной культуры (10-6) на 2 чашки с питательной средой. Подсчитывая количество жизнеспособных клеток бактерий и количество фагорезистентных клонов, определяют частоту возникновения фагорезистентных мутантов в популяции бактерий.

11