Министерство здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

«Саратовский государственный медицинский университет

имени В.И. Разумовского» Министерства здравоохранения и социального

развития Российской Федерации

(ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздравсоцразвития России)

«Утверждаю»

Зав. кафедрой микробиологии,

вирусологии и иммунологии

профессор Г.М. Шуб

«___» __ ____________ 2012г.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

к практическому занятию

для студентов __2_ курса

по специальности лечебное дело

Тема: Микробная экология. Санитарная микробиология воды, воздуха, почвы. Нормальная микрофлора тела человека, 1 день исследования

Саратов 2012

Тема: Микробная экология. Санитарная микробиология воды, воздуха, почвы. Нормальная микрофлора тела человека, 1 день исследования.

1. Место проведения: кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии

2. Продолжительность: 135мин, из них самостоятельная аудиторная работа 80мин.

3. Цель занятия: ознакомление с микрофлорой окружающей среды, её значением в патологии человека и методами санитарно – микробиологических исследований.

4. Важное значение имеет контроль бактериального состояния окружающей среды. Для этого проводят санитарно – микробиологические исследования, цель которых дать качественную и количественную характеристику бактериальной и вирусной обсемененности объектов окружающей среды .Эти знания необходимы врачам любой специальности.

5. В результате занятия

Студент должен знать: методы санитарно –микробиологического исследования, микробиологические нормативы воздуха, воды и почвы.

Студент должен уметь: Оценить бактериальную загрязненность воздуха, воды, почвы.

Студент должен ознакомиться с методическими рекомендациями, таблицами по теме.

6. Таблицы по данной теме:

   • Допустимые уровни бактериальной обсемененности воздушной среды помещений лечебных учреждений в зависимости от их функционального назначения и класса чистоты,

   • Санитарно – гигиенические требования и нормативы качества питьевой воды,

   • Оценка степени эпидемической опасности почвы.

Учебные элементы по данной теме:

• Санитарно – бактериологические исследования воздуха, воды, почвы

• Санитарно - показательные микроорганизмы воздуха, воды, почвы

7. Контрольные вопросы для подготовки к занятию

1. Что такое санитарно – бактериологическое исследование?

2. Что такое ОМЧ воздуха и какие, бактерии являются санитарно – показательными микробами воздуха и почему?

3. Что такое ОМЧ,БГКП, ОКБ, ТКБ воды ?

4. Что такое ОМЧ почвы и какие бактерии являются санитарно – показательными микробами почвы?

5. Содержание самостоятельной работы студентов:

• Выполнение тестового задания по теме.

• Определение ОМЧ воздуха учебной лаборатории, приготовление мазков из отдельных колоний, окраска по Граму, микроскопия. Заполнение протокола.

• Определение ОМЧ и санитарно-показательных микроорганизмов воздуха различных подразделений медицинского учреждения. Заполнение протокола, заключение по санитарному состоянию воздуха соответствующих объектов (таблица 1).

• Определение ОМЧ и БГКП питьевой воды. Заполнение протокола, заключение по санитарному состоянию воды (таблица 2).

• Произвести смыв с рук и посев на чашки с МПА.

• Произвести посев на кровяной агар мазка из зева.

Отбор проб воздуха проводят в операционных блоках, перевязочных, послеоперационных палатах, палатах реанимации и интенсивной терапии. Метод посева воздуха основан на оседании под действием силы тяжести бактерий на питательные среды. Для этого открытые чашки Петри с МПА ставят на горизонтальную поверхность на высоте рабочего стола и оставляют на 5 минут. Затем чашку закрывают и инкубируют в термостате при температуре 37ºс в течении 24 часов.

Студенты получают готовые посевы воздуха различных объектов медицинского учреждения, подсчитывают количество выросших колоний, определяют общее микробное число (ОМЧ) по формуле Омелянского:

_{ОМЧ =} Á×5×100

В×10×С

А – количество колонии, выросших на чашке Петри;

В – площадь чашки Петри;

С – время, в течение которого чашка Петри оставалась открытой;

5, 10, 100 – числовые параметры из формулы Омелянского

1000 – коэффициент перевода литров в м³.

Правило Омелянского: За 5 минут на 100см² поверхности агара оседает столько бактерии, сколько их содержится в 10л воздуха.

Затем отбирают несколько различных колоний, описывают их культуральные свойства, готовят мазки, окрашивают по методу Грама, микроскопируют. По морфо -тинкториальным и культуральным свойствам определяют род выросших бактерий. Полученные результаты оформляют в виде протокола.

Седиментационный метод даёт только приблизительное представление о бактериальной загрязнённости воздуха.

Более точный метод - аспирационный реализуется с помощью аппарата Кротова, принцип действия которого основан на чисто механической аспирации воздуха через щель в крышке прибора, расположенной над вращающейся поверхностью питательной среды в чашке Петри, вследствие чего происходит инерционное осаждение бактерий из воздуха на поверхность питательной среды. Затем чашку закрывают и инкубируют 18-24 часа, после чего подсчитывают количество выросших колоний.

С целью определения санитарно-показательных микроорганизмов производят забор 1.0 м³ воздуха и засевают на желточно-солевой агар для выявления золотистого стафилококка и на среду Сабуро для выявления дрожжей и грибов.

Студенты получают чашки Петри с посевом воздуха на ЖСА и Сабуро, они описывают колонии, готовят мазки из них, окрашивают по методу Грамма, микроскопируют.

Полученные результаты оформляют в виде протокола.

Для оценки эпидемиологической безопасности воды определяют:

1. общее число микроорганизмов (ОМЧ) (КОЕ/мл);

2. общие колиформные бактерии (ОКБ) (КОЕ/100,0мл);

3. термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) (КОЕ/100,0мл);

4. споры сульфатредуцирующих клостридий (КОЕ/20,0мл);

5. колифаги (БОЕ/100,0мл).

Определение ОМЧ.

Из каждой исследуемой пробы делают высев не менее 2х проб по 1мл в стерильные чашки Петри. После внесения пробы в каждую чашку вливают по 8-10мл расплавленного и остуженного до 45-49^оС питательного агара и перемешивают содержимое чашек, равномерно распределяя по всему дну. После застывания агара чашки с посевами инкубируют при 37^оС в течение 24 часов.

Определение БГКП и ТКБ.

Пробу исследуемой воды делят на 3 объёма по 100мл и фильтруют. Фильтры помещают в чашки Петри со средой Эндо и инкубируют при 37^оС и при 44,5^оС в течение 24 часов. Если на фильтрах обнаруживают рост изолированных лактозоположительных колоний тёмно-красного цвета с металлическим блеском или без него, то подсчитывают число колоний и определяют БГКП и ТКБ.

Выявление спор сульфитредуцирующих клостридий.

Пробы объемом 20,0мл прогревают на водяной бане и фильтруют, фильтры помещают поверхностью вниз в чашки Петри, а затем заливают железосульфитным агаром. Посевы культивируют при 44⁰С в течение 16-18 часов.

Санитарно – бактериологическое исследование питьевой воды. Для определения общего микробного числа (ОМЧ) студенты получают готовые результаты посевов 1 мл воды на 2 чашки с МПА. Подсчитывают количество выросших колоний на обеих чашках, результаты суммируют и делят на число чашек, окончательный результат выражают числом колоний образующих единиц в 1 мм (КОЕ).

Определение общих колиформных (ОКБ) и термотолерантных колиформных (ТКБ) бактерий проводят методом мембранных фильтров, студенты получают готовые посевы. профильтрованной воды.,подсчитывают число колоний красного цвета с металлическим блеском. Число колониеобразующих единиц подсчитывают по формуле:

_Х= А×100 , где х – КОЕ в 100мл

V

А – число подсчитанных колоний на фильтрах

V – объём воды.

Полученные результаты сравнивают с санитарно-гигиеническими нормативами и оформляют в виде протокола..

Таблица 2: Санитарно-гигиенические показатели и нормативы качества питьевой воды