Порядок выполнения работы
В мерную колбу на 200 мл помещают 10 г анализируемой пробы, взвешивают на аналитических весах, добавляют 5 мл насыщенного раствора Na2B4O7 и 100 мл дистиллированной воды температурой не ниже 75°С.
Колбу с содержимым нагревают на кипящей водяной бане в течение 15 мин, периодически встряхивая, затем охлаждают до 20°С, тщательно перемешивают и последовательно добавляют по 2 мл реактива Карреза I и реактива Карреза II. Объем доводят водой до метки и выдерживают 30 мин при 20°С. Затем содержимое колбы фильтруют через складчатый фильтр.
К 20 мл полученного безбелкового фильтрата в мерной колбе на 100 мл добавляют 10 мл фотометрического реагента № 1 и добавить 6 мл. раствора Ш. Содержимое колбы перемешивают и выдерживают 5 мин в темном месте. Затем добавляют 2 мл фотометрического реагента № 2, перемешивают и выдерживают в темном месте 3 мин при 20°С. Светопоглощение (А) анализируемого раствора измеряют на фотоэлектроколориметре в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 1 см, относительно раствора сравнения при длине волны 538 нм.
Раствор сравнения готовят также как и анализируемый, но вместо 20 мл безбелкового фильтрата в колбу добавляют 20 мл дистиллированной воды.
По калибровочному графику (рис 1) определяют массу нитрита натрия, содержащегося в 1 мл фильтрата.
Построение калибровочного графика.
Для приготовления основного раствора нитрита натрия взвешивают навеску реактива, содержащую точно 1г нитрита натрия, растворяют в воде, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 500 мл, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.
Для приготовления рабочего раствора 1 мл основного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 200 мл, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Из полученного рабочего раствора готовят серию стандартных растворов: 5, 10 и 20 мл рабочего раствора пипеткой вносят в три мерные колбы вместимостью 100 мл, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.
Полученные стандартные растворы содержат в 1 мл соответственно 2,5; 5,0 и 10,0 мкг нитрита натрия.
Рабочий и стандартные растворы нитрита натрия нестойки, поэтому их готовят непосредственно перед построением калибровочного графика.
Для построения калибровочного графика в четыре мерные колбы вместимостью 100 мл пипеткой вносят: в первую колбу для приготовления контрольного раствора 10 мл дистиллированной воды, а в остальные- по 10 мл стандартных растворов, содержащих 2,5; 5,0 и 10,0 мкг нитрита натрия в 1 мл раствора.
В каждую колбу добавляют по 50 мл дистиллированной воды, по 10 мл фотометрического реагента № 1 и по 6 мл раствора III для проведения цветной реакции. Растворы в колбах перемешивают и выдерживают в темном месте в течение 5 мин. Добавляют 2 мл фотометрического реагента № 2 для проведения цветной реакции, перемешивают и выдерживают 3-10 мин в темном месте при (20±2)°С.
Растворы в колбах доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Измеряют интенсивность красной окраски на фотоэлектроколориметре при λ = 538 нм в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 1 см в отношении контрольного раствора.
По полученным средним данным из трех стандартных растворов на миллиметровой бумаге строят калибровочный график. На оси абсцисс откладывают концентрацию нитрита натрия (мкг в 1 мл окрашенного раствора); на оси ординат- соответствующую оптическую плотность. Пример калибровочного графика приведен на рисунке 1.
Массовую долю нитрита нитрия (х1) мг, определяют о формуле
где m – масса NaNO2 в 1 мл окрашенного раствора, найденного по калибровочному графику, мкг;
m0 – масса навески продукта, г;
V – объем фильтрата, взятый для фотометрического измерения, мл;
1000 – перевод в миллиграммы.
За конечный результат принимают среднее арифметическое трех параллельных определений, допустимые расхождения между которыми не должны превышать 0,2 мкг. Вычисления проводят с точностью до 0,1 мг в 100 г продукта. После выполнения работы делают заключение о соответствии массовой доли нитрита натрия в колбасных изделиях требованиям государственного стандарта.