Порядок выполнения работы

Включить самописец, подключенный к хроматографу. 2-5мкл анализируемой пробы микрошприцом ввести в нагретый испаритель хроматографа. Для количественной оценки и идентификации места выхода компонентов предварительно необходимо в нагретый испаритель хроматографа вводить стандартные смеси исследуемых компонентов.

Массовую долю (X,%) препарата рассчитывают по формуле:

,

где S₁ – площадь компонента в стандартной смеси, мм²

S – площадь компонента в анализируемом растворе, мм²

X₁ – массовая доля исследуемого компонента (в %) в стандартной смеси.

Работа № 33. Прямое атомно-абсорбционное определение 3d-элemehtob (Fe, Сu, Mn, Co, Ni) и Zn в биологическом материале

Элементы 3d-группы периодической системы (Fe, Cu, Mn, Co, Ni) и Zn, обладающие биологической активностью, помимо физиологического, в более высоких концентрациях могут оказывать фармакологическое и токсическое действия на организм. В настоящее время это актуально в связи с увеличением содержания данных элементов в окружающей среде, что обусловлено в основном источниками промышленного загрязнения, а кроме того, определенная роль в этом может принадлежать и геохимическим факторам. Следует отметить сопряженность указанных элементов в метаболических реакциях. Все сказанное определяет необходимость всестороннего и глубокого изучения их обмена в норме и при патологии. Поэтому разработка адекватных методов определения микроэлементов в биологическом материале является актуальной задачей медицины. Одним из современных методов оценки обмена микроэлементов в организме является атомно-абсорбционная спектрофотометрия, обладающая рядом преимуществ перед традиционными химическими способами. Цель настоящей работы – опробовать технику прямого атомно-абсорбционного определения Fe, Cu, Mn, Co, Ni и Zn без предварительного их разделения и экстрагирования в сыворотке крови человека и крыс, а также в печени, селезенке и костном мозге последних.

Реактивы и материалы: Депротеинизирующий 0,6М раствор ТХУ и НС1 (био-тест «Железо», «Lachema», ЧССР). 1,6М раствор НСl (ос. ч.) для разведения всех стандартов. Стандартный раствор Fe (Fe²⁺, 17,90 мкмоль·л^–1; био-тест «Железо», «Lachema», ЧССР). Раствор хлорного Fe (Fe³⁺, 1,79 ммоль·л^–1; био-тест «Общая свя­зывающая способность», «Lachema», ЧССР). Стандартный раствор Cu (Cu²⁺, 3 ммоль·л^–1; био-тест «Медь», «Lachema», ЧССР). Стандартные растворы Mn, Co, Ni и Zn, приготов­ленные по ГОСТу 4212–76 (соответственно 1,82, 1,70, 1,70, 1,53 ммоль·л^–1).

Оборудование и посуда: ААС Perkin Elmer 2280, электропечь СНОЛ-1,6.2,5.1/П-М1У4.2, центрифуга, термостатированная водяная баня, платиновые тигли, полистироловые пробирки, дозаторы.

Порядок выполнения работы

Подготовку проб сыворотки крови для микроэлементов анализа проводили стандартным методом. Сыворотку депротеинизировали 0,6М раствором ТХУ и НСl (отношение объемов сыворотки и, депротеинизирующего раствора 1:1) и одновременно денатурировали при 90°С в течение 15 мин. Микро­элементы определяли в супернатанте, полученном после центрифугирования при 3000 об/мин в течение 10 мин. Анализ элементов в тканях прово­дили после их озоления стандартным сухим методом. Первоначально навеску сырого биоматериала доводили при 105°С до абсолютно воздушно-сухой массы (постоянной массы), взвешива­ли. Затем последовательно повышали температуру и заканчивали озоление при 500°С, пока не получали светлую однородную золу. Последнюю растворяли в 1,6 М НСl при 80–90°С. Элементы определяли непосредственно из полученного солянокислого раствора без разделения и экстрагирования. Объем соляной кислоты, используемой для растворения золы, составлял 1 мл на 200 мг абсолютно воздушно-сухой массы печени и селезенки, а для костного мозга – 1 мл на 50 мг. На всех этапах работы обращали особое внима­ние на защиту проб от возможного за­грязнения.