17.3. Качественные реакции на желчные кислоты

Присутствие желчных кислот можно обнаружить реакцией Петтенкофера. Желчные кислоты дают пурпурное окрашивание с оксиметилфуролом, образующимся из фруктозы в присутствии концент­рированной серной кислоты.

Реактивы и материалы: сахароза, 20% раствор; серная кислота, концентрированная; желчь, разведенная водой в 2 раза.

Оборудование и посуда: сухое часовое стекло, капельница, стеклянная палочка.

Порядок выполнения работы

На сухое часовое стекло наносят 1 каплю желчи и 1 каплю рас­твора сахарозы, хорошо перемешивают стеклянной палочкой. Рядом наносят 3 капли концентрированной серной кислоты (стекло не сдвигать с места). Через некоторое время на месте слияния капель наблюдают развитие красного окрашивания, переходящего при сто­янии в красно-фиолетовое.

17.4. Роль сывороточного альбумина в транспорте высших жирных кислот в крови

Опыт заключается в сравнении растворимости свободных жир­ных кислот и их комплексов с сывороточным альбумином. Комп­лекс возникает при взаимодействии растворимой натриевой соли высших жирных кислот (мыло) с альбумином. При добавлении соляной кислоты натрий вытесняется и образуются свободные жир­ные кислоты:

R-COONa + НС1 → R-COOH + NaCl.

В комплексе с сывороточным альбумином высшие жирные кис­лоты остаются в растворе, а в отсутствие альбумина выпадают в осадок. Следует избегать избытка соляной кислоты, которая, вы­зывая денатурацию белка, может нарушить его способность к комплексообразованию.

Реактивы и материалы: натриевое мыло, 1% раствор, сыворотка крови, соляная кислота, 1% раствор.

Оборудование и посуда: штатив с пробирками, капельницы.

Порядок выполнения работы

1. В две пробирки вносят по 6 капель раствора мыла. В первую добавляют 20 капель сыворотки крови, во вторую – столько же воды. Пробирки слегка встряхивают.

2. В пробирку с добавленной водой вливают по каплям (1—2 капли) 1% раствор соляной кислоты только до появления осадка свободных жирных кислот.

3. В пробирку с сывороткой крови приливают такое же количество кислоты. Жирные кислоты не выпадают в осадок, так как об­разуют с сывороточным альбумином комплексное соединение.

Рекомендации к составлению протокола

Результаты исследования записать и обосновать различия в ра­створимости свободных жирных кислот и их комплексов с альбу­мином крови, а также указать на значение комплексообразования.

17.5. Определение общих фосфолипидов в сыворотке крови по фосфору

Фосфолипиды осаждают трихлоруксусной кислотой вместе с белками крови. Полученный осадок минерализуют и в остатке определяют неорганический фосфор. О содержании фосфолипидов в сыворотке крови судят косвенно — по количеству фосфор­ной кислоты, находимой колориметрически.

Реактивы и материалы: сыворотка крови, трихлоруксусная кислота, 10% раствор, хлорная кислота, 57% раствор, молибденовокислый аммоний, 4% раствор, рабочий раствор аминонафтолсульфоновой кислоты — эйконогена, рабочий стандартный раствор однозамещенного фосфорно­кислого калия, содержащий в 1 мл 0,01 мг фосфора.

Оборудование и посуда: микропипетка на 0,2 мл, пипетки на 1, 2, 5 и 10 мл с делениями, пробирки обычные, пробирки центрифужные, центрифуга, стеклянные бусинки, песчаная баня, фотоэлектроколориметр.