Рекомендации к составлению протокола

Результаты работы оформить в виде таблицы. В выводах записать, в чем проявляется специфичность ферментов и чем она обусловлена.

Фермент	Субстрат	Температура гидролиза	Реакция Троммера

5.4. Влияние рН на активность α-амилазы слюны (определение оптимума рН для действия амилазы)

Для каждого фермента имеется определенное значение рН среды, при котором он является наиболее активным. Для того чтобы исследовать влияние активной реакции среды на каталитическое действие фермента, нужно приготовить ряд растворов с различными значениями рН, добавить к ним субстрат, фермент и определить после икубации, в какой среде катализ идет с наибольшей скоростью.

Реактивы и материалы: слюна, разведенная водой (1 мл воды + 1—2 капли слюны), фосфатный буфер, 1/15 м со следующими значениями рн: 6,2; 6,8; 7,2; 8,0, крахмал, 0,5% раствор, раствор йода в йодистом калии

Оборудование и посуда: штатив с пробирками, капельницы, термостат или водяная баня, снабженная термометром.

Порядок выполнения работы

1. В 5 пробирок отмеривают по 10 капель фосфатного буфера (1/15 М со следующими значениями рН: 5,4; 6,2; 6,8; 7,2; 8.0.

2. Во все пробирки прибавляют по 10 капель 0,5% раствора крахмала и по 1 капле разведенной водой слюны.

3. Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием, тотчас же помещают их в термостат при 37 ºС и отмечают время.

4. Для выявления скорости гидролиза через интервалы в 1-2 минуты из всех 5 пробирок отбирают по 1 капле жидкости в другие пробирки и проделывают реакции с раствором йода в йодистом калии. Гидролиз в каждой пробирке проводят до стадии эритродекстрина, который дает красно-бурое окрашивание с йодом.

5. Отмечают время (в минутах) появления эритродекстрина в каждой из пяти пробирок.

Рекомендации к составлению протокола

Зависимость активности амилазы от рН среды представить графически, откладывая по оси абсцисс значение рН среды, при котором проводился гидролиз крахмала, а по оси ординат — время в минутах, необходимое для гидролиза крахмала до стадии эритродекстрина. Сделать вывод, при каком значении рН оптимум действия фермента.

5.5. Влияние активаторов и ингибиторов на активность α-амилазы слюны

Для оценки влияния активаторов или ингибиторов каталитическое действие ферментов допытывается в присутствии указанных веществ. Полученные результаты исследования сопоставляются с данными, полученными в контрольном опыте, проводившемся без добавления активатора или ингибитора.

Реактивы и материалы: слюна, разведенная водой (1 мл воды+1—2 капли слюны), хлористый натрий, 1% раствор, сернокислая медь, 1% раствор, крахмал, 0,5% раствор, раствор йода в йодистом калии

Оборудование и посуда: штатив с пробирками, капельницы, термостат или водяная баня, снабженная термометром.

Порядок выполнения работы

1. Заготавливают три пробирки. В первую пробирку наливают 10 капель 1% раствора хлористого натрия, во вторую — 10 капель 1% раствора сернокислой меди, в третью — 10 капель дистиллированной воды.

2. Во все пробирки добавляют по 20 капель 0,5% раствора крахмала и по 1 капле разведенной водой слюны.

3. Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием, тотчас же помещают в термостат с температурой 37ºС и отмечают время.

4. Для выявления скорости гидролиза крахмала через интервал в 1—2 минуты из пробирок с гидролизуемым крахмалом отбирают по 1 капле жидкости в другие пробирки и проделывают с ней реакцию с раствором йода в йодистом калии. Гидролиз проводят до стадии эритродекстрина.

5. Отмечают время (в минутах) появления эритродекстрина.