Работа №28. Определение общего фосфора в тканях

Метод определения общего фосфора основан на минерали­зации ткани и определении фосфора по интенсивности окраски, образующейся при восстановлении фосфорно-молибденовой ки­слоты гидрохиноном и сульфитом натрия.

Метод состоит из следующих основных операций: высуши­вание и озоление навески, сплавление золы с карбонатной смесью и извлечение фосфатов водой, образование фосфорно-молибденовой кислоты, развитие цветной реакции при восста­новлении гидрохиноном и сульфитом натрия, измерение интен­сивности окраски.

Реактивы и материалы: биологическая ткань, карбонатная смесь: углекислый натрий и углекислый ка­лий в соотношении 1:1, хорошо перемешанные и растертые в ступке; ледяная уксусная кислота; 10%-ный раствор молибденовокислого аммония; раствор гидрохинона и сульфита натрия: 2 г дважды перекристаллизованного гидрохинона и 10 г сульфита натрия рас­творяют в 100 мл дистиллированной воды; однозамещенный фосфорнокислый калий.

Оборудование и посуда: сушильный шкаф, весы, ступка с пестиком, стаканчик для взвешива­ния с притертой крышкой, термостат, муфельная печь, тигель, водяная баня, фотоэлектроколориметр с оранжевым или красным светофильтром.

Порядок выполнения работы

Навеску мелко нарезанной ткани высушивают при 110–120°С до постоянного веса, затем растирают в ступке до тон­кого порошка. Порошок помещают в стаканчик для взвешива­ния с притертой крышкой и повторно высушивают в термостате до постоянного веса, по разности в доведенный до постоянного веса платиновый тигель берут навеску порошка (0,1000– 0,5000 г). Навеску осторожно озоляют при красном накале (примерно 500°С) в муфельной печи (по разности весов до и после сжигания может быть установлен вес золы).

В зависимости от взятой навески в тигель добавляют 0,5–1 г карбонатной смеси, тщательно перемешивают и сплавляют в муфельной печи в течение 20–30 мин. Сплав обрабатывают горячей водой, раствор фильтруют в мерную колбу на 25–50 мл, остаток промывают горячей водой. К фильтрату добавляют 4–8 мл уксусной кислоты. После прекращения выделения углеки­слого газа добавляют 4 мл 10%-ного раствора молибденовокислого аммония и доводят объем раствора до метки дистиллиро­ванной водой.

К 25 мл раствора добавляют 2 мл раствора, состоящего из гидрохинона и сульфита натрия, нагревают раствор в кипящей водяной бане в течение 10 мин, охлаждают, объем доводят во­дой до 100 мл и измеряют интенсивность голубой окраски при помощи фотоэлектроколориметра с оранжевым или красным светофильтром в отношении контрольного раствора. Контроль­ный раствор делают одновременно с опытным. По снятому от­счету с помощью калибровочного графика находят содержание фосфора в растворе, взятом для цветной реакции.

Построение калибровочного графика и расчет производят так же, как при определении неорганического фосфора с учетом разведений и навески.

Для построения калибровочного графика используют 0,1916 г однозамещенного фосфата калия (КН₂РО₄), который растворяют в воде, и после добавления 10 мл 0,1 н. серной ки­слоты объем доводят водой до 1000 мл; 1 мл такого раствора содержит 0,1 мг P₂O₅.

Количество неорганического фосфора, пересчитанное на 100 г мяса, вычисляют по формуле:

где с – количество Р₂О₅, соответствующее величине оптической плотности, мг;

50 – объем раствора при осаждении белков, мл;

100 – объем без белкового раствора после разбавления, мл; 25 – объем раствора при проведении цветной реакции, мл; 100 – множитель перевода в проценты;

е – навеска мяса, г;

25 – объем без белкового раствора, взятый для разбавления, мл;

5 – объем без белкового фильтрата после разбавления, взятый для цветной реакции, мл.

Если точно следовать описанной методике, то вышеприведен­ную формулу можно упростить:

.

Величина относительной ошибки определения для этого ме­тода лежит в пределах 3 – 5%.