Работа № 27. Рефрактометрическое определение концентрации белков в сыворотке крови
Реактивы и материалы: бумага фильтровальная; вата; палочки стеклянные; смесь спирта и эфира (1:1); сыворотка крови, вода.
Оборудование и посуда: рефрактометр, вата.
Порядок выполнения работы
Коэффициентом рефракции называют отношение синуса угла падения луча света к синусу угла его преломления. Коэффициент рефракции принято обозначать буквой n:
Между показателем преломления и концентрацией вещества в растворе для многих соединений характерна прямо пропорциональная зависимость. Коэффициент преломления раствора белка или белоксодержащей жидкости биологического происхождения находят с помощью рефрактометра. Работают с рефрактометром следующим образом: раскрывают камеру с призмами, тщательно ополаскивают призмы водой, промокают фильтровальной бумагой и окончательно осушают, протирая призмы ватой, смоченной смесью спирта и эфира (1:1). Стеклянной палочкой наносят на нижнюю призму 2 капли дистиллированной воды и закрывают камеру. Устанавливают рефрактометр так, чтобы призмы ею были ярко освещены или прямым светом, или пучком света, отраженным от зеркала. Об этом судят по степени освещенности видимого в окуляр поля. Если граница тени окрашена и расплывчата, поворотом рукоятки ахроматора добиваются чёткости и бесцветности границы. Поворотом призм или окуляра рефрактометра подводят границу темного поля к перекрестку нитей окуляра. Делают отсчет по шкале. При температуре 20°С отсчет должен быть 1,333 (показатель преломления воды при 20°С). Это значит, что прибор установлен и работает правильно. После того как прибор установлен по воде, камеру с призмами раскрывают, воду удаляют фильтровальной бумагой и сушат призмы смесью спирта с эфиром. На нижнюю призму наносят прозрачную каплю, сыворотки крови и закрывают камеру. Делают отсчет, как описано выше. Настройку прибора сбивают и делают еще один отсчет. Эту операцию повторяют снова. Все три значения заносят в рабочий журнал и вычисляют среднюю величину. По ней, пользуясь специальной таблицей, находят процентное содержание белка в сыворотке крови. Найденное значение заносят в журнал. По окончании работы смывают водой с призм прибора сыворотку, удаляют воду фильтровальной бумагой и осушают призмы спирто–эфирной смесью. На нижнюю призму накладывают, кусочек фильтровальной бумаги и закрывают камеру. В таком состоянии прибор оставляют до следующего определения. Если во время проведения отсчета температура не равна 20°С, то в полученное значение показателя преломления вносят поправку 0,0001 на каждый градус. При более низкой температуры поправку вычитают, высокой – прибавляют.
Зависимость между показателем преломления и концентрацией белка в растворе
Показатель преломления |
Концентрация белка (в %) при показателе преломления с точностью до десятичных |
|||||||||||
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
|||
1,337 |
0,60 |
0,66 |
0,72 |
0,77 |
0,83 |
0,89 |
0,95 |
1,01 |
1,07 |
1,12 |
||
1,338 |
1,18 |
1,24 |
1,30 |
1,36 |
1,41 |
1,47 |
1,53 |
1,59 |
1,65 |
1,70 |
||
1,339 |
1,76 |
1,82 |
1,88 |
1,94 |
2,00 |
2,05 |
2,11 |
2,17 |
2,23 |
2,29 |
||
1,340 |
2,34 |
2,40 |
2,46 |
2,52 |
2,58 |
2,63 |
2,69 |
2,75 |
2,81 |
2,87 |
||
1,341 |
2,93 |
2,98 |
3,04 |
3,10 |
3,16 |
3,22 |
3,27 |
3,33 |
3,39 |
3,46 |
||
1,342 |
3,51 |
3,57 |
3,62 |
3,68 |
3,74 |
3,80 |
3,86 |
3,91 |
3,97 |
4,03 |
||
1,343 |
4,09 |
4,15 |
4,20 |
4,26 |
4,32 |
4,38 |
4,44 |
4,50 |
4,55 |
4,61 |
||
1,344 |
4,67 |
4,73 |
4,79 |
4,84 |
4,90 |
4,96 |
5,02 |
5,08 |
5,13 |
5,19 |
||
1,345 |
5,25 |
5,31 |
5,37 |
5,43 |
5,48 |
5,54 |
5,60 |
5,66 |
6,22 |
5,77 |
||
1,346 |
5,83 |
5,89 |
5,95 |
6,01 |
6,07 |
6,12 |
6,18 |
6,24 |
6,30 |
6,36 |
||
1,347 |
6,41 |
6,47 |
6,53 |
6,59 |
6,65 |
6,70 |
6,76 |
6,82 |
6,88 |
6,94 |
||
1,348 |
7,00 |
7,05 |
7,11 |
7,17 |
7,23 |
7,29 |
7,34 |
7,40 |
7,46 |
7,52 |
||
1,349 |
7,58 |
7,63 |
7,69 |
7,75 |
7,81 |
7,87 |
7,93 |
7,98 |
8,04 |
8,10 |
||
1,350 |
8,16 |
8,22 |
8,27 |
8,33 |
8,39 |
8,46 |
8,51 |
8,57 |
8,62 |
8,68 |
||
1,351 |
8,74 |
8,80 |
8,86 |
8,91 |
8,97 |
9,03 |
9,09 |
9,15 |
9,20 |
9,26 |
||
1,352 |
9,32 |
9,38 |
9,44 |
9,50 |
9,55 |
9,61 |
9,67 |
9,73 |
9,79 |
9,84 |
||
1,353 |
9,90 |
9,96 |
10,02 |
10,08 |
10,13 |
10,19 |
10,25 |
10,31 |
10,37 |
10,43 |
||
1,354 |
10,48 |
10,54 |
10,60 |
10,66 |
10,72 |
10,77 |
10,83 |
10,89 |
10,95 |
11,01 |
||
1,355 |
11,06 |
11,12 |
11,18 |
11,23 |
11,29 |
11,35 |
11,41 |
11,47 |
11,52 |
11,58 |
||
1,356 |
11,64 |
11,70 |
11,76 |
11,81 |
11,87 |
11,93 |
11,99 |
12,05 |
12,10 |
12,16 |
||
1,357 |
12,22 |
12,28 |
12,34 |
12,39 |
12,45 |
12,51 |
12,57 |
12,63 |
12,68 |
12,74 |
||
1,358 |
12,80 |
12,86 |
12,92 |
12,97 |
13,03 |
13,09 |
13,15 |
13,21 |
13,26 |
13,32 |
||
1,359 |
13,38 |
13,44 |
13,50 |
13,55 |
13,61 |
13,67 |
13,73 |
13,79 |
13,84 |
13,90 |
||
1,360 |
13,96 |
14,02 |
14,08 |
14,13 |
14,19 |
14,25 |
14,31 |
14,37 |
14,42 |
14,48 |
||