Тимоловая проба (нтк «Анализ-х») (уирс)

Увеличение тимоловой пробы характерно для вирусных гепатитов, ток­сических поражений печени, умеренно сохраняется повышенной в постгепа­титном периоде, циррозах печени, особенно постнекро-тическом, а также при коллагенозах и миеломах. При механических желтухах тимоловая проба у 75% больных отрицательная, что имеет дифференциально-диагностическое значение, а проба Бурштейна — Самая (увеличение β-липопротеинов) — по­ложительная. При паренхиматозных желтухах обе пробы положительные. При взаимодействии сыворотки с тимоловым буфером появля­ется мутность вследствие образования комплекса «глобулин—тимол—липоид». Интенсивность помутнения зависит от количества взаимного соотношения отдельных белковых фракций.

Реактивы и материалы: концентрированный раствор тимола — 15 мл; стандартная суспензия BaSO₄ — 10 мл; серная кислота, 0,2 М раствор; тимоловый реактив.

Приготовление реактива. В мерную колбу на 1000 мл налить около 900 мл дистиллированной воды и при постоянном перемешивании маг­нитной мешалкой пипеткой постепенно добавить 15 мл тимолового ре­актива. Кончик пипетки погрузить в воду в колбе. Раствор долить дистил­лированной водой до метки и перемешивать еще 10 мин. Хранить при комнатной температуре. Раствор устойчив несколько месяцев.

Порядок выполнения работы

Реактивы и материалы добавляют в соответствии с таблицей:

Реактивы и материалы	Количество реактива, мл.
	Проба	Контрольный реактив 1	Контрольный реактив 2
Сыворотка	0,05	–	0,05
Тимоловый реактив	3,00	3,00	–
Физиологический реактив	–	0,05	3,00

Перемешивают и оставляют стоять ровно на 30 мин при комнат­ной температуре. Потом снова перемешивают и измеряют оптичес­кую плотность пробы против контрольного реактива 1. Если сыво­ротка хилезная, измеряют оптическую плотность против контроль­ного раствора 2: λ 620—690, кювета шириной 5 мм.

При построении калибровочного графика измеряют основной контрольный реактив 2, что соответствует 20 ед. S—Н, а затем из реактивов 2 и 3 разбавлением приготавливают серию растворов со­гласно следующей таблице:

Раствор 3 (H2SO4), мл	Раствор 2 (BaSO4), мл	Единицы помутнения, S–H
4,5	1,5	5
3,0	3,0	10
1,5	4,5	15
–	6,0	20

В пробирках хорошо смешивают растворы 2 и 3 и ровно через 30 мин измеряют оптическую плотность против воды. Перед измере­нием содержимое пробирок еще раз перемешивают. Нормальные ве­личины по этому методу: тимоловая помутнения — 0—4 ед. S—Н; пре­дельные величины — 4—5 ед. S—Н; патология — свыше 5 ед. S—Н.

В протоколе отметьте цель занятия, принцип метода, ход работы (крат­ко), диагностическое значение. Сделайте выводы о концентрации гемо­глобина в исследуемой сыворотке и о содержании билирубина в исследуемом образце. Оцените печеночные пробы.

В таблицу показателей норм основных клинико-биохимических исследований выпишите и выучите величину концентрации гемоглоби­на, билирубина и тимоловой пробы в крови.