19.2. Переваривание белков ферментами поджелудочной железы

Переваривание белков в двенадцатиперстной кишке происходит под действием ферментов поджелудочной железы трипсина и химотрипсина, которые действуют как на белки, так и на продукты расщепления белков – полипептиды, расщепляя их до коротких пептидов и небольшого количества свободных аминокислот. В ка­честве источника ферментов в опыте используют 2%-ный раствор панкреатина в 0,5%-ном растворе карбоната натрия или глицериновую вытяжку из поджелудочной железы. В качестве субстрата — кусочки фибрина или яичного белка.

Реактивы и материалы: 2%-ный раствор панкреатина в 0,5%-ном растворе карбоната натрия или глицериновая вытяжка поджелудочной железы; фибрин или денатурированный белок куриного яйца, уксусная кислота, 1%-ный раствор; синий лакмус.

Оборудование и посуда: штатив с пробирками; термостат (37—40 °С).

Порядок выполнения работы

В три пробирки наливают по 1 мл раст­вора панкреатина или вытяжки поджелудочной железы. Содержимое первой пробирки кипятят 2 мин и охлаждают под струей холодной воды. Содержимое второй пробирки нейтрализуют 1%-ным раствором уксусной кислоты до кислой реакции на лакмус.

Во все три пробирки опускают по кусочку фибрина или яичного белка и помещают их в термостат при 37 – 40 °С.

Через 40—60 мин пробирки вынимают, перемешивают, отмечают видимые изменения и проделывают биуретовую реакцию со всеми пробирками.

Полученные результаты вносят в таблицу и делают выводы.

№ пробы	Субстрат	Фермент	Реакция среды	Видимые изменения	Биуретовая проба	Выводы

Работа №20. Анализ желудочного сока

Путем последовательного действия протеолитических ферментов белки лишаются видовой и тканевой специфичности. Примерно 95-97% белков пищи всасывается в виде свободных аминокислот. Ферментный аппарат осуществляет поэтапное, избирательное расщепление пептидных связей. Превращение профермента пепсиногена в активный фермент пепсин происходит в желудке и протекает в присутствии соляной кислоты.

20.1. Титрование кислот желудочного содержимого

Кислоты желудочного содержимого оттитровывают 0,1 н. раствором гидроксида натрия. Для установления момента полного оттитровывания свободной соляной кислоты и других кислореагирующих соединений применяют различные индикаторы с разными зонами перехода окраски. Титруют на белом фоне.

Реактивы и материалы: пепсин, Фенолфталеин, 1% спиртовой раствор. Интервал перехода ок­раски при рн 8,2—10,0. стабилен при хранении при комнатной температуре, 4-диметиламиноазобензол (метиловый желтый, диметиловый желтый), 0,5% спиртовой раствор. интервал перехода окраски при рн 2,9—4,0. стабилен при хранении при комнатной температуре, ализаринсульфоновокислый натрий [ализариновый красный], 1% водный раствор. интервал перехода окраски при рн 4,3—6,3. стабилен при хранении при комнатной температуре, гидроксид натрия, 0,1 н. раствор.

Оборудование и посуда: пипетки на 5 мл, конические колбы на 50 мл, бюретки на 25, 50 или 100 мл.