Порядок выполнения работы

1. В центрифужную пробирку помещают 3 мл дистиллированной воды и наливают 0,2 мл сыворотки крови. Добавляют 3 мл 10% ра­створа трихлоруксусной кислоты, первые 1,5 мл по каплям, встряхи­вая пробирку, остальные – быстрее. Оставляют стоять 1—2 минуты.

2. Через 1—2 минуты содержимое пробирки центрифугируют 3—5 минут. Надосадочную жидкость сливают и переворачивают пробирку, пока не стечет вся жидкость.

3. К полученному осадку прибавляют 1 мл 57% раствора хлорной кислоты и 1—2 стеклянные бусинки для равномерного кипения.

4. Пробирку нагревают 20—30 минут на песчаной бане при 180°С, пока смесь не станет бесцветной. Рекомендуется наблюдать за про­цессом, пока не пройдет образование пены — 5 минут. После охлаж­дения объем опытных проб доводят дистиллированной водой до 7 мл.

1. Для приготовления контрольной пробы берут 0,8 мл 57% раствора хлорной кислоты и доводят водой до 7 мл.

5. Готовят три стандарта (для достоверности), содержащие по 2 мл рабочего стандартного раствора однозамещенного фосфорно­кислого калия и по 0,8 мл 57% раствора хлорной кислоты. Объем каждой стандартной пробы дистиллированной водой доводят до 7 мл.

6. Для определения фосфора в каждую пробирку (опытные, кон­трольные и стандартные) прибавляют по 1 мл 4% раствора молибденовокислого аммония, перемешивают и добавляют по 1 мл раствора аминонафтолсульфоновой кислоты, доводя дистиллированной водой объем до 10 мл. Содержимое пробирок вновь перемешивают.

7. Через 20 минут после прибавления аминонафтолсульфоновой кислоты интенсивность окраски измеряют на ФЭКе против конт­роля при длине волны 630—690 нм (красный светофильтр) в кюве­те с толщиной слоя 1 см.

Липоидный фосфор в 100 мл сыворотки (в мг%) рассчитывают по формуле:

X = Е_оп · 0,02 · 100 / Е_ст · 0,2 = Е_оп · 10 / Е_ст

где X—липоидный фосфор в мг%;

Е_оп—оптическая плотность опытной пробы;

Е_ст — оптическая плотность стандартной пробы;

0,02 — содержание фосфора в 2 мл стандарта (мг);

0,2 — количество сыворотки в опыте (мл).

Концентрацию общих фосфолипидов вычисляют умножением полученной концентрации липоидного фосфора на 25, так как ли­поидный фосфор составляет 4% (1/25 часть) молекулы фосфолипи­дов.

Норма концентрации липоидного фосфора у взрослых — от 6,1 до 14,5 мг% или 1,97—4,68 ммоль/л (коэффициент пересчета 0,323).

Пользуясь приведенными формулами, вычислить концентрацию липоидного фосфора и общих фосфолипидов в сыворотке крови. В выводах сопоставить полученный результат с нормальными по­казателями.

17.6. Открытие холестерина в тканях головного мозга

Стерины — вторичные одноатомные непредельные цикличес­кие спирты, содержащие ядро циклопентанпергидрофенантрена. Представителем стеринов животных и человека является холесте­рин. В некоторых тканях человеческого организма находится пре­имущественно неэстерифицированный холестерин (эритроциты), другие ткани (надпочечники, сыворотка крови и др.) содержат так­же и связанный холестерин в виде эфиров с высокомолекулярными жирными кислотами (стериды). Холестерин входит в состав липопротеинов тканей и крови. В плазме крови холестерин является составной частью сложных липопротеидных комплексов (хиломикроны, липопротеины очень низкой плотности, липопротеины про­межуточной плотности, липопротеины низкой плотности и липоп­ротеины высокой плотности). Особенно богаты холестерином мозг, надпочечники, яичный желток, желчь.

Реактивы и материалы: мозг, кальций сернокислый (гипс), в порошке, хлороформ, серная кислота концентрированная, уксусный ангидрид.

Оборудование и посуда: весы, ступка фарфоровая, стеклянная пластинка, сушильный шкаф, скальпель или нож, стеклянная палочка или лопаточка, пипетка на 5 мл, воронка с бумажным фильтром, штатив с пробирками, капельницы.