11.3.2. Количественное определение общего холестерина в сыворотке крови прямым методом по реакции Златкис– Зака

Метод основан на реакции холестерина с уксусной и серной кислотами в присутствии хлорного железа. Химизм реакции неизвестен. Видимо, происходит дегидратация холестерина под действием серной кислоты и его окисление хлорным железом. Интенсивность развивающейся красно-фиолетовой окраски прямо пропорциональна количеству холестерина в исследуемой пробе.

Реактивы и материалы: сыворотка крови, уксусная кислота ледяная, рабочий раствор хлорного железа, приготовленный из основного раствора, основной стандартный раствор холестерина, содержащий в 1 мл 1 мг холестерина.

Оборудование и посуда: микропипетка на 0,1 мл, пипетки мерные с делениями емкостью 1, 2, 5 мл, штатив с пробирками, фотоэлектроколориметр.

Порядок выполнения работы

1 .К 0,1 мл сыворотки прибавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл рабочего раствора хлорного железа.

2. Содержимое пробирки тщательно перемешивают и оставляют на 15 минут при комнатной температуре.

3. Колориметрируют на фотоэлектроколориметре против контроля при длине волны 510—560 нм (зеленый светофильтр), в кювете с толщиной слоя 1 см.

4. Контроль. К 0,1 мл дистиллированной воды прибавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл рабочего раствора хлорного железа. Далее обрабатывают как опыт.

5. Расчет производят по калибровочному графику.

6. Построение калибровочного графика. Из основного стандартного раствора холестерина готовят разведения, как указано в таблице.

Норма содержания холестерина в сыворотке крови 120—250 мг% (3,12—6,50 ммоль/л).

№ пробирки	Основной стандартный раствор холестерина, мл	Ледяная уксусная кислота, мл	Рабочий раствор хлорного железа, мл	Содержание холестерина в пробе, мг%
1	0,1	3,0	2,0	100
2	0,2	3,0	2,0	200
3	0,3	3,0	2,0	300
4	0,4	3,0	2,0	400
5	0,5	3,0	2,0	500

7.Через 20 минут пробы фотометрируют, как исследуемые, против контроля.

Примечание. При концентрациях холестерина более 350 мг% исследуемую сыворотку разводят физиологическим раствором, полученные результаты умножают на разведение.

Рекомендации к составлению протокола

Пользуясь составленным графиком, определить концентрацию холестерина в сыворотке крови. Полученный результат сопоставить в выводах с нормальными показателями.

Работа № 12. Показатели липидов. Химические свойства липидов

12.1. Показатели липидов

Качество липидов характеризуется следующими показателями или числами: кислотное число - это количество миллиграммов едкого кали, необходимое для нейтрализации свободных жирных кислот, содержащихся в 1 г масла или жира, оно характеризует качество масел и жиров, оценивая степень гидролиза триацилглицеридов ферментом липазой; число омыления - это количество миллиграммов едкого кали, необходимое как для омыления жирных кислот в составе триацилглицеридов, так и для нейтрализации свободных жирных кислот в 1 г исследуемого масла или жира; йодное число - это количество граммов йода, эквивалентное галоиду, присоединившемуся по месту двойных связей к 100 г исследуемого масла или жира.