2.7. Осаждение белков фенолом

Осаждением белков фенолом пользуются для удаления их при выделении и очистке нуклеиновых кислот и специфических поли­сахаридов. На способности фенола денатурировать белки основано его дезинфицирующее действие.

Реактивы и материалы: раствор яичного белка или разбавленная сыворотка крови, фФенол, насыщенный раствор.

Оборудование и посуда: штатив с пробирками, капельницы, пипетки.

Порядок выполнения работы

В пробирку наливают 10 капель раствора белка и добавляют при взбалтывании фенол до появления мути или осадка. Осадок увеличивается при стоянии.

Рекомендации к составлению протокола

Результаты работы записать в таблицу. В выводах указать на денатурационные изменения в белках, приводящие к их осажде­нию. Подчеркнуть роль слабых связей в поддержании вторичной и третичной структуры белков.

Осадители	Реактивы	Характер и цвет осадка	Чем обусловлена реакция
Соли тяжёлыхметаллов
Алкалоидные реактивы
Концентрированные минеральные кислоты
Органические кислоты
Органические растворители

2.8. Отделение альбуминов от глобулинов в сыворотке крови методом высаливания сернокислым аммонием и хлористым натрием

Альбумины и глобулины широко распространены в природе. Их различают в зависимости от места нахождения: сывороточные, яич­ные и т. д. Альбумины и глобулины растворимы в слабых растворах нейтральных солей, щелочей и кислот. Альбумины, в отличие от глобулинов, растворяются в чистой воде. Глобулины (за небольшим исключением) в воде не растворяются, поэтому при разбавлении яичного белка водой, когда концентрация содержащихся в яичном белке солей понижается, глобулины выпадают в осадок и вновь растворяются при добавлении поваренной соли. Одним из методов выделения альбуминов и глобулинов из растворов является выса­ливание. Для высаливания различных белков требуется неодинако­вая концентрация солей, что зависит от ионной силы осадителя и размера белковой молекулы. Так, глобулины выпадают из раствора при полунасыщении (при 50% насыщении) сернокислым аммони­ем, в отличие от альбуминов, которые высаливаются при полном насыщении данной солью. Это связано с тем, что у глобулинов больший молекулярный вес, чем у альбуминов. При высаливании поваренной солью и сернокислым магнием гло­булины осаждаются при полном насыщении этими солями. Альбумины высаливаются при такой же концентрации поваренной соли и сернокислого магния, как и глобулины но, в отличие от глобулинов, осадок альбуминов выпадает только при подкислении раствора. Подкисление способствует осаждению альбуминов анионами средних со­лей. При осаждении сернокислым аммонием не требуется подкисления раствора альбуминов кислотой. Отчасти это объясняется тем, что сернокислый аммоний является кислореагирующей солью.

Отделение альбуминов от глобулинов в сыворотке крови имеет диагностическое и прогностическое значение. В норме соотноше­ние между этими двумя фракциями сывороточного белка (А/Г) обыч­но колеблется в пределах 1,5-2,3. При многих патологических со­стояниях оно может изменяться. Например, во многих случаях инфекционных заболеваний наблюдается повышение количества глобулинов в плазме крови, и тогда это соотношение (белковый коэффициент) уменьшается.

Реактивы и материалы: сыворотка крови, сернокислый аммоний, насыщенный раствор, сернокислый аммоний, кристаллический, тонко измельчен­ный, хлористый натрий кристаллический, тонко измельченный, уксусная кислота, 1% раствор, гидроксид натрия, 10% раствор, сернокислая медь, 1% раствор.

Оборудование и посуда: штатив с пробирками, капельницы, воронки с фильтром.