Порядок выполнения работы

1. В две пробирки наливают по 10 капель раствора белка и под­кисляют несколькими каплями 10% раствора уксусной кислоты.

2. В одну пробирку прибавляют 2—3 капли 5% раствора железистосинеродистого калия, в другую — 2—3 капли 10% раствора вольфрамата натрия, взбалтывая после добавления каждой капли. Наблюдают выпадение осадка. Осаждению белков железистосинеродистым калием мешает присутствие больших количеств средних солей в ра­створе; в этих случаях рекомендуется разбавлять испытуемую жид­кость водой.

3. В три пробирки наливают по 10 капель раствора белка и под­кисляют несколькими каплями 1% раствора уксусной кислоты.

4. В первую пробирку добавляют 2—3 капли раствора танина, во вторую — 5—6 капель раствора пикриновой кислоты, в третью — 1-2 капли раствора йодной ртути в йодистом калии. Во всех пробир­ках белок выпадает в осадок.

При осаждении танином осадок не образуется, если в растворе совершенно отсутствуют средние соли или имеется свободная мине­ральная кислота. В этих случаях прибавляют уксуснокислый натрий.

2.4. Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами

Белки при взаимодействии с концентрированными минеральны­ми кислотами, кроме ортофосфорной, денатурируются и осаждают­ся из раствора. Выпадение белка в осадок обусловлено дегидратаци­ей белковых молекул и рядом других причин, например образованием нерастворимых комплексных солей из белка и кислот и др. Воз­можно, что в условиях кислой среды к положительно заряженным коллоидным частицам притягиваются отрицательно заряженные ионы NO₃^- и, адсорбируясь на молекулах белка, экранируют их заряд. В избытке серной и соляной кислот происходит растворение первона­чально выпавших осадков белка. Избыток азотной кислоты не ра­створяет осажденный белок, поэтому для обнаружения белка в ис­следуемом материале пользуются азотной кислотой.

Реакция с азотной кислотой является высокоспецифичной и высокочувствительной. Она получила широкое применение при клинических исследованиях мочи на присутствие в ней белка (про­ба Геллера). Эта реакция лежит в основе количественного опреде­ления белка по методу Брандберг—Рабертс—Стольникова.

Реактивы и материалы: раствор белка или раз­бавленная сыворотка крови, азотная кислота, концентрированная, серная кислота, концентрированная, соляная кислота, концентрированная.

Оборудование и посуда: штатив с пробирками, капельницы, пипетки.

Порядок выполнения работы

1. В пробирку наливают приблизительно 1 мл (15—20 капель) концентрированной азотной кислоты и затем, сильно наклонив пробирку (под углом 45°), осторожно приливают по стенке равный объем раствора белка. В месте соприкосновения двух жидкостей появляется белый аморфный осадок белка в виде кольца (проба Геллера). Осторожно встряхивают пробирку и добавляют избыток азотной кислоты. Осадок не исчезает.

2. То же проделывают, взяв вместо азотной кислоты концентри­рованную серную и соляную кислоты. Отличие заключается в том, что образовавшиеся осадки белка в избытке серной и, соответствен­но, соляной кислоты растворяются.