Наклейка парафиновых срезов на предметные стекла

Подготовка предметных и покровных стекол, Очень важный момент в работе - подбор предметных и покров­ных стекол для препаратов. От толщины стекол зависит пра­вильная фокусировка препаратов. Световой микроскоп имеет объективы с определенным рабочим расстоянием (у иммерсион­ных объективов оно равно 0,1-0,12 мм). Ясно, что этими объек­тивами можно воспользоваться в том случае, если толщина предметного и покровного стекол не выходит за допустимые ве­личины, а именно 1-1,2 мм для предметных и 0,17 мм для по­кровных стекол. Кроме того, стекла должны иметь ровную по­верхность, без мутных пятен и царапин. Поэтому предваритель­но следует отбраковать стекла.

Следующий момент, на который необходимо заранее обра­тить внимание, - чистота стекол. Наклеенные срезы хорошо дер­жатся только на абсолютно чистой поверхности.

Обычно предметные стекла очищают так: кипятят в мыльной воде, промывают в водопроводной и при необходимости опус­кают в хромовую смесь, состоящую из трех частей насыщенного водного раствора бихромата калия и одной части концентриро­ванной серной кислоты. При этом нужно помнить, что кислоту вливают в дихромат калия, а не наоборот.

Из хромовой смеси стекла вынимают пинцетом и промывают проточной и дистиллированной водой. У чистых стекол поверх­ность полностью смачивается водой. Отобранные стекла поме­щают в стакан с дистиллированной водой, где они хранятся до употребления. Очень удобны в работе предметные стекла с ма­тированными концами, на которых можно делать надписи обыч­ным карандашом.

Покровные стекла отбирают размером 20х20 или 24х24 мм, более крупные применяют только для эмбриологических иссле­дований. Очищают стекла в смеси спирта и эфира, вытирают мягкой тряпочкой и хранят в сухом виде до использования.

Наклейка парафиновых срезов. Подготовив пред­метные стекла, можно приступить к наклеиванию парафиновых срезов. Для этого вынимают пинцетом одно стекло из сосуда с дистиллированной водой и, держа его пальцами за края, выти­рают чистой тряпочкой нижнюю поверхность. Затем кладут стекло на ровную поверхность стола.

Наклеивать срезы можно разными способами. Наиболее рас­пространенный способ с использованием обычной дистиллиро­ванной воды. Однако он дает хорошие результаты, только если предметные стекла будут абсолютно чистыми.

Рис. 32. Нагревательный столик для расправления микротомных срезов: 1 - предметное стекло с препаратом. По М. Н. Прозиной.

Порядок работы следующий. На поверхность предметного стекла из капельницы наносят несколько капель дистиллирован­ной воды. Скальпелем разрезают парафиновую ленту на отрез­ки с равным количеством срезов. Каждый отрезок переносят скальпелем на поверхность воды, соблюдая последовательность расположения срезов. Необходимо также следить, чтобы ниж­няя (блестящая) сторона их непосредственно касалась воды. Об­щее число срезов, которые можно уложить на одно предметное стекло, рассчитывают, принимая во внимание величину покров­ного стекла. Отрезки парафиновой ленты лучше укладывать перпендикулярно длинной стороне предметного стекла.

Сморщенные парафиновые срезы надо расправить. Для этого предметные стекла со срезами, плавающими в воде, переносят на ровную поверхность нагревательного столика (приспособле­ние для сушки и расправления парафиновых срезов на предмет­ных стеклах, рис. 32), имеющего латунную пластинку с подогре­вом от электротока. Во время расправления срезов следят, что­бы со стекол не испарилась вода. Срезы можно расправить и под лампой, а также на подогретых асбоцементных пластинках. Теплые предметные стекла с расправленными срезами перено­сят на черную поверхность стеклянной пластинки (можно ис­пользовать фотопластинки).

Теперь очень важно расправленные срезы правильно и вплот­ную уложить так, чтобы они были друг против друга в верти­кальном и горизонтальном положениях. Вместе с тем срезы должны находиться в центре предметного стекла и не выходить за контуры покровного. Чтобы аккуратно уложить срезы, сна чала удаляют избыток дистиллированной воды фильтровальной бумагой и скальпелем поправляют их. Окончательно удаляют воду уже после того, как срезы уложены. Для этого на них сверху помещают полоску фильтровальной бумаги и осторожно проводят по ней пальцем. Последнее можно делать только тог­да, когда срезы остыли, иначе они приклеятся к бумаге.

Предметное стекло со срезами подписывают обычным графи­товым карандашом, если оно матировано, или тушью с белком, для чего жидкую черную тушь смешивают с равным объемом смеси куриного белка с глицерином. Используют также алмаз­ный карандаш. Затем предметное стекло немедленно ставят су­шить в термостат при температуре 40°С. Следует помнить, что если срезы высохнут при комнатной температуре, они потом отстанут от стекла. Сушку в термостате ведут двое-трое суток.

Срезы пристают к стеклу вследствие капиллярного притяже­ния. Если они приклеены хорошо, при просматривании их с ниж­ней стороны предметного стекла не должно быть отсвечиваю­щих мест. Последнее указывает на то, что между стеклом и сре­зами остался воздух. Такие срезы легко отклеятся, как. только окажутся в жидкости.

Существуют и другие способы наклеивания срезов на пред­метные стекла, например с использованием белка с глицерином. Для этого к свежему куриному белку добавляют равный объем глицерина. После взбалтывания смесь фильтруют. Фильтрация протекает медленно. В фильтрат добавляют кристаллик анти­септика (тимола, фенола).

Есть два варианта наклеивания срезов белком: сухой и вод­ный. В первом случае на предметное стекло наносят каплю белка с глицерином и кончиком пальца или льняной тряпочкой растирают его тонким слоем. Переносят срезы на стекло кисточкой. Сначала к стеклу прижимают один угол среза, а потом и весь срез. Предметные стекла со срезами подогревают, после чего их можно сразу подвергнуть дальнейшей обработке.

Белково-глицериновую смесь можно разводить водой: 1 кап­лю смеси взбалтывают с 4 мл дистиллированной воды. Воду с белком и глицерином наносят пипеткой на предметное стекло, в нее помещают срезы. Срезы расправляют на нагревательном столике, удаляют избыток жидкости и сушат.