Измерение объектов под микроскопом

В практике цитоэмбриологических исследований нередко измеряют пыльцевые зерна, замыкающие клетки устьиц, хромосомы, пыльцевые трубки, зародыши и т. д. Измерения под микроскопом проводят при помощи шкалы окуляра-микрометра (рис. 2). Чтобы перевести результаты полученных измерений в микрометры, т. е. установить истинные размеры объекта, необходим объект-микрометр. Окуляр-микрометр может входить в комплект микроскопа вместе с окуляром или приобретается отдельно. Он представляет собой круглую стеклянную пластинку, на которой нанесена линейка со 100 делениями.

Окуляр-микрометр вставляют в окуляр. На столик микроскопа кладут препарат и, глядя в окуляр, перемещают объект препаратоводителем, а линейку микрометра - поворотом окуляра так, чтобы можно было измерить объект в делениях окуляра-микрометра. Одновременно записывают марку микроскопа и увеличения объектива и окуляра.

Измерив необходимое число объектов, препарат снимают и на столик микроскопа помещают объект-микрометр ОМП (для работы в проходящем свете), шкала которого имеет 100 делений (рис.2). Общая длина ее 1 мм, размер одного деления - 10. мкм. Шкалу объекта-микрометра совмещают со шкалой окуляра-микрометра, используя ту же самую комбинацию окуляра и объектива, которую применяли для измерения объектов. Удобнее всего совместить сначала нулевые точки шкалы. Например, при малом увеличении 100 делений объекта-микрометра, т. е. вся шкала, совпали с 80 делениями окуляра-микрометра.

	Рис. 2. Шкалы окуляра-микрометра (А) и объекта-микрометра (Б).
		Рис. 3. Окулярный винтовой микрометр МОВ-1-15: 1 - окуляр; 2 - корпус; 3 - барабан; 4 - основание; 5 - винт хомутика; 6 - биштрих.

Цену одного деления окуляра-микрометра вычисляют по формуле:

Ax10

Б

где А - число делений объекта-микрометра; Б - число делений окуляра-микрометра; 10 - длина одного деления объекта-микрометра, мкм.

Подставив цифры в формулу, получим:

101х100 = 12,5 мкм

80

Это и есть цена деления окуляра-микрометра. Для получения истинного размера объекта необходимо умножить его длину или ширину, измеренную в делениях окуляра-микрометра на цену деления окуляра-микрометра в микрометрах. Например, диаметр пыльцевых зерен кукурузы составил 8 делений окуляра-микрометра. Следовательно, истинный диаметр пыльцевых зерен в микрометрах составит: 8-12,5= 100.

Цена деления окуляра-микрометра, вычисленная для малого увеличения микроскопа, не годится для работы с большим увеличением. Поэтому перед началом измерений необходимо установить цену деления для всех комбинаций объективов и окуляров.

В тех случаях, когда требуется определить площадь или - подсчитать число клеток в единице площади, в окуляр микроскопа помещают сетчатый окуляр-микрометр. Он представляет собой квадрат со стороной 10 мм, каждая из которых разделена линиями на 20 частей. Интервал между двумя линиями равен 0,5 мм.

Измерение сравнительно крупных объектов можно провести при помощи окулярного винтового микрометра МОВ-1-15 (рис. 3). Он состоит из окуляра с увеличением 15Х, основания с хомутиком, надеваемого на тубус микроскопа, отсчетного приспособления с микрометрическим винтом и отсчетного барабана. В плоскости окуляра находятся неподвижная шкала с восемью делениями по 1 мм, подвижное перекрестие и индекс в виде биштриха. Отсчет проводят по шкале (в миллиметрах) и барабану (в сотых долях миллиметра).

До измерения объекта определяют увеличение объектива микроскопа. Для этого на столик микроскопа помещают объект-микрометр, на тубус надевают винтовой окулярный микрометр и фокусируют на резкость изображения перекрестия и шкалы объект-микрометра. Биштрих устанавливают в начале или в конце шкалы. Берут некоторое число делений объекта-микрометра, например 25. Подводят перекрестие к первому штриху шкалы и снимают отсчет, затем подводят перекрестие к двадцать пятому штриху и снова делают отсчет.

Линейное увеличение объектива определяют по формуле

V = M-N

ab

где V - увеличение объектива; М-N - разность двух отсчетов; а - число делений объекта-микрометра; b - цена деления объекта-микрометра.

Для измерения объекта на столик микроскопа помещают препарат, центр перекрестия совмещают с краем изображения объекта и делают отсчет. Затем перекрестие совмещают со вторым краем объекта и снова делают отсчет.

Размеры объекта определяют по формуле

C = M-N

V

где С - длина или ширина объекта, мм; V - увеличение объектива; М-N - разность отсчетов.