Культуральные свойства бактерий

С целью изучения культуральных свойств, колонии (потомство одной клетки, образующие видимые невооруженным глазом скопления микробных клеток на плотной питательной среде). сначала рассматривают невооружённым глазом, а затем с помощью микроскопа. Отмечают следующие культуральные признаки:

Размер колоний (диаметр в мм). Размер колоний определяют измерением при помощи линейки со стороны дна чашки Петри. Если диаметр колонии < 1мм, то их называют точечными, 1…2 мм – мелкими, 2…4 мм – средними, 4…6 мм – крупными, более 10 мм – очень большими.

Форма колоний бывает правильной (округлой, эллипсоидной) и неправильной (мицеливидной, амёбовидной, листовидной, веретеновидной и т.д.).

Цвет колоний может быть белым, желтым, розовым, зелёным и т.д. Окрашивание колоний связано со способностью бактерий вырабатывать пигмент.

Поверхность колоний может быть гладкой, складчатой, шероховатой, бугристой и др.

Рельеф колоний бывает плоским, выпуклым, с вогнутым центром, кратерообразным и др.

Оптический свойства – колонии могут быть прозрачными, полупрозрачными, непрозрачными, блестящими, матовыми.

Консистенция колоний может быть мазеобразной, слизистой, сухой, вязкой, плёнчатой

Край колоний бывает ровным, извилистым. Зубчатым, волнистым, бахромчатым, локонообразным.

Структура колоний может быть гомогенной, неоднородной, грубозернистой, волокнистой и т.д.

Описываются колонии достаточно изолированные друг от друга.

Морфологические свойства бактерий

Выполняем посев исследуемого материала по методу Дригальского на МПА в чашках Петри. Для этого на поверхность МПА наносим каплю смеси при помощи профламбированной бактериологической петли. Распределяем каплю по поверхности шпателем. Затем этим же шпателем, не обжигая его, проводят по поверхности среды во второй чашке Петри, в третьей и т.д. Посевы инкубируют при температуре 37С в термостате в течение 3 дней. В результате на поверхности МПА образуются колонии – потомство одной клетки, образующие видимые скопления на плотной питательной среде.

С целью изучения морфологических свойств, бактериальную массу из одной колонии берут петлёй, предварительно хорошо профламбированной и охлаждённой, и переносят в пробирку с МПБ. Одновременно делаем мазок на предметном столе и окрашиваем его по методу Грама и микроскопируем. Посевы инкубируем при 37С в термостате.

Микроскопия мазка позволяет определить форму бактериальной клетки, наличие спор, иногда капсул (морфологические свойства), а также способность окрашиваться по методу Грама (тинкториальные свойства). Кроме того выявляем, состоит ли данная колония и м.о. одного вида или нескольких.

Понятие о чистой культуре. Методы выделения.Чистая к-ра – популяция м.о., содержащая клетки одного вида и выращенная на искусственных питательных средах при определённых условиях.При выделении используют методы посева(внесение части исследуемого материала в стерильную пит среду) и пересева(перенос части выросшей на пит среде культуры микробов на др, свежую стерильную пит среду).Метод Пастера, или метод разбавлений. Из суспензий, содержащей смесь м.о., делается ряд последовательных разведений в стерильной среде (физиологический раствор, питательный бульон). С каждым разведением количество микробных клеток будет уменьшаться и можно получить такие разведения, в которых будет находиться только одна клетка, которая даёт начало чистой культуре.Метод Коха. Исследуемый материал вносят бактериологической петлёй или пастеровской пипеткой в пробирку с расплавленным и охлаждённым до 45С МПА или МПЖ, равномерно размешивают, вращая пробирку между ладонями. Каплю из этого разведения переносят во вторую пробирку, из второй в третью и т.д. Содержимое каждой пробирки выливают в стерильные чашки Петри, оставляют для застывания среды, а затем помещают в термостат вверх дном во избежание осаждения конденсата. При посеве м.о. на плотную среду они размножаются только на том месте, куда попали первоначально. Из каждой жизнеспособной клетки образуется видимое невооружённым глазом скопление м.о. – колония.

Метод Дригальского. Основан на механическом разделении микробных клеток на поверхности плотной питательной среды. Для посева по этому методу используют чашки Петри, залитых плотной питательной средой. На поверхность застывшей среды в первую чашку вносят каплю исследуемого материала, содержащего м.о. Затем с помощью петли каплю растирают по всей поверхности среды. Этим же шпателем проводят по поверхности среды во второй и третьей чашках, в результате чего микробные клетки разделяются. После инкубации в первой чашке наблюдается рост в виде сплошного налёта. В следующих чашках количество становится меньше, и встречаются отдельно расположенные колонии, которые можно изолировать.Метод нагревания исследуемого материала применяется для выделения чистых культур споровых форм микробов (бацилл, клостридий). Перед посевом исследуемый материал прогревают на водяной бане при 80-90С в течение 10…20 мин. При термической обработке вегетативные формы м.о. погибают, а споры остаются живыми и при последующих высевах на плотную среду прорастают, формируя колонии.

Хим метод используется при изолировании культур м.о., устойчивых к определённым химическим веществам. Исследуемый материал перед посевом заливают 15% р-ром кислоты и выдерживают в термостате 3…4ч. После воздействия кислоты или щелочи клетки возбудителя туберкулёза остаются живыми, а все другие м.о. погибают. После нейтрализации кислоты или щёлочи, материал высеивают на плотную питательную среду, на которой вырастает только возбудитель туберкулёза.Метод Шукевича используется для выделения подвижных м.о. Делают посев в конденсационную жидкость скошенного МПА. Через несколько часов инкубации подвижные бактерии ( протеи) поднимаются вверх по поверхности среды, образуя налёт. Биологический метод основан на заражении лабораторных животных.